Материал: 130916

при исследовании патологического материала желательно использовать две разные среды.

Следует также подчеркнуть, что от одного животного иногда удается одновременно выделить две разные культуры микобактерий. Поэтому при выделении из исследуемого материала культуры быстрорастущих микобактерий бактериологическое исследование необходимо продолжать до 3 месяцев, чтобы не пропустить роста медленнорастущих микобактерий.

Биологический метод Наиболее чувствительным из вышеперечисленных методов является

биологический, позволяющий обнаружить туберкулез у исследуемого животного даже если во взятом материале (1 мл) имеются лишь единичные экземпляры микобактерий.

Для постановки биопробы берут кроликов массой не менее 2 кг, морских свинок массой 300–500 г и кур не моложе 5 месяцев. Биопробу ставят с материалом от каждого животного в отдельности.

Заражение животных проводят 3–4-недельной культурой: морских свинок – подкожно, кроликов – внутривенно в краевую вену уха, кур – внутривенно в подкрыльцовую вену или внутримышечно в область грудины в дозах по 1 мг микобактерий, суспендированных в 1 мл физиологического раствора.

Выявление возбудителя туберкулеза в биологическом материале проводят параллельно с культуральным исследованием путем введения посевной суспензии в дозе 1–2 мл подопытным животным.

Возбудитель туберкулеза бычьего вида вызывает у морских свинок и кроликов генерализованный процесс в период от 20-х до 90-х суток после введения культуры.

Микобактерии человеческого вида вызывают у морских свинок генерализованный туберкулез, а у кроликов прогрессирующий процесс не развивается.

Микобактерии туберкулеза птичьего вида у морских свинок вызывают абсцесс в месте введения культуры и увеличение регионарного пахового лимфатического узла, у кроликов – сепсис, характеризующийся резким увеличением селезенки и гибелью животных в течение 10-30 суток, а у кур гибель в течение 30 суток.

Микобактерии туберкулеза человеческого и бычьего видов при внутривенном заражении кур не вызывают у них заболевания и каких-либо изменений в органах (табл. 3).

Таблица 3 – Патогеннность видов микобактерий для различных видов лабораторных животных

16

Молекулярно-генетический метод исследования (ПЦР) Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является молекулярно-

генетическим экспресс-методом исследования, основанным на обнаружении в исследуемом материале специфического фрагмента ДНК, характерного только для определенного вида возбудителя. ПЦР применяют при постановке диагноза на туберкулез:

•у крупного рогатого скота – при отсутствии видимых изменений или возникших затруднениях в определении характера патологоанатомических изменений;

•у других видов млекопитающих животных – независимо от характера патолого-анатомических изменений;

•у птиц – при отсутствии видимых изменений или возникших затруднениях при определении характера изменений.

ПЦР применяют также для определения видовой принадлежности выделенных микобактерий.

Серологические методы диагностики туберкулеза В настоящее время в качестве дополнительных серологических

методов диагностики применяются:

реакция связывания комплемента (РСК). РСК основана на том, что при взаимодействии в системе «антиген – антитело» (АГ+АТ) при наличии комплементарности (родства между АГ и АТ) образуется специфический иммунный комплекс, который адсорбирует комплемент. При отсутствии специфического родства между АГ и АТ образование иммунного комплекса не происходит, и комплемент остается свободным. Образование комплекса визуально не видно. Для индикации ярко выраженной реакции подключают гемолитическую систему – эритроциты барана и гемолитическую сыворотку. В присутствии комплемента эритроциты барана лизируются гемолитической сывороткой и окрашивают пробу в кровянистый цвет – это отрицательная РСК. При отсутствии гемолиза – положительная РСК;

реакция иммунофлюоресценции (РИФ). РИФ может применяться как для прижизненной, так и посмертной диагностики туберкулеза. С ее помощью можно проводить индикацию возбудителей туберкулеза и атипичных микобактерий. При помощи меченных флюорохромами

17

соответствующие антигены. При положительном результате образовавшийся комплекс «антиген – антитело» начинает светиться при просмотре в люминесцентном микроскопе;

иммуноферментный анализ (ИФА). ИФА – метод ферментзависимого иммуносорбентного анализа (ELIZA). Применяется для выявления гуморальных антител при туберкулезе. ИФА имеет высокую чувствительность, непродолжительное время постановки реакции, но из-за ряда трудностей, связанных с отсутствием высококачественных туберкулезных антигенов, конъюгатов и реагентов, специального оборудования не нашел широкого применения в диагностике туберкулеза животных.

Лабораторные исследования на туберкулез проводятся в срок до 6 месяцев.

Диагноз на туберкулёз считается установленным в следующих случаях:

У млекопитающих животных за исключением свиней:

-при обнаружении на вскрытии изменений характерных для туберкулёза;

-при отсутствии видимых изменений или при возникших затруднениях в определении характера изменений при положительном результате ПЦР и положительных результатах бактериологического исследования;

-при выявлении бактериологическим исследованием возбудителя бычьего или человеческого вида;

-при положительных результатах биологической пробы.

У свиней:

-при положительных результатах ПЦР и выявлении бактериологическим исследованием возбудителей туберкулёза бычьего или человеческого вида.

У птиц:

-при обнаружении на вскрытии характерных изменений, с подтверждением диагноза бактериологическим методом исследования;

-при отсутствии видимых изменений или возникновении затруднений в определении характера изменений - при положительном результате ПЦР.

Таблица 4 – Схема дифференциальной диагностики микобактериозов и туберкулёза крупного рогатого скота

18

19

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1.Что позволяет выяснить эпизоотологический метод диагностики?

2.Значение клинического метода диагностики туберкулеза в настоящее время.

3.Аллергический метод диагностики туберкулеза.

4.Причины неспецифических аллергических реакций на туберкулин.

5.Техника проведения профилактической внутрикожной туберкулинизации. Дозы туберкулина, учет и оценка реакции после введения аллергена у животных.

6.Как проводят учет и оценку результатов офтальмопробы?

7.Для каких целей применяют внутривенную туберкулиновую

пробу?

8.Для каких целей применяют симультанную туберкулиновую

пробу?

9.В чем сущность пальпебрального метода туберкулинизации крупного рогатого скота?

10.Какие органы при патологоанатомическом исследовании животных наиболее часто поражаются туберкулезом?

11.Какой биоматериал отбирают для лабораторного исследования?

12.Какие методы серологической диагностики туберкулеза применяются в настоящее время?

13.Сущность бактериологического метода исследования.

14.Какие животные используются для постановки биопробы?

15.В каком случае диагноз на туберкулез считают установленным?

16.Какие факторы способствуют распространению туберкулеза на животноводческих фермах?

17.Что значит «Плановая туберкулинизация животных»?

20