В главе рассмотрена проблема оценки результатов кристаллографических методов исследований биологических жидкостей, предложен способ решения. Представлено описание и реализация алгоритма распознавания линий и расчета их проекций.
Кристаллографические методы исследования - совокупность методологических подходов к извлечению информации о метаболизме и гомеостазе организма и/или его частей, основанных на феномене свободного или инициированного базисными веществами различного химического состава кристаллообразования высушенного жидкого или приводимого в жидкое состояние биологического материала с последующей интерпретацией результатов кристаллогенеза.
Фация - образец биологического субстрата, приготовленный по любой методике кристаллографического анализа.
Кристаллограмма - изображение всей поверхности образца высушенного биоматериала.
Особенности описания результатов свободной и инициированной кристаллизации биоматериала. Основные и дополнительные критериев оценки кристаллограмм, для учета характеристик фации, включают:
) Индекс структурности (ИС) - отражает состав элементов образца, наличие, относительное и абсолютное количество тел аморфного и кристаллического строения в микропрепарате. ценивается по 4-балльной системе: 0 баллов - присутствие в микропрепарате только вещества аморфного строения, 1балл - дискретная часть образца, представленная аморфными телами и единичными кристаллами; 2 балла - наличие в фации, кроме вышеуказанных элементов, дендритного компонента; 3балла - большая часть поля зрения или все поле образовано крупными дендритными структурами; аморфные тела и одиночные кристаллы немногочисленны.
) Тип взаимодействия кристаллических и аморфных структур (ТВ) Биологическая сущность и информативность данного феномена не изучены.
) Степень деструкции фации (СДФ) - интегральный показатель, отражающий правильность протекания кристаллогенеза и суммирующий как экзогенные, так и эндогенные факторы. Выражается в четырех степенях: 0 степень - все элементы фации правильной конфигурации, не разрушены как в целом, так и на отдельных участках; признаки разрушения текстуры фации отсутствуют; 1 степень - элементы фации имеют начальные признаки разрушения, деструктивные изменения текстуры не наблюдаются; 2 степень - визуализируются многочисленные разрушенные или измененные структуры; есть локальные нарушения целостности текстуры; 3 степень - все элементы фации разрушены, невозможно различить отдельные части фации и структуры, образец представляет собой бесформенную массу аморфного, зачастую окрашенного, материала; отмечаются четкие признаки разрушения текстуры.
) Равномерность распределения кристаллических и аморфных эле-ментов фации (R) - критерий, свидетельствующий о правильности протекания процесса свободного кристаллогенеза. Интерпретируется с использованием шестибалльной шкалы: 0 баллов - полная хаотичность фации, наличие разнородных элементов, пустот, мест скопления кристаллических структур, различная ориентация образований в поле зрения.1 балл - некоторая сгруппированность кристаллов, намечаются единичные участки правильного их построения, занимающие менее 30% от общей площади поля зрения, направленность фигур еще хаотичная.2 балла - наблюдаются четкие "островки" упорядоченности, занимающие от 30 до 50% поля зрения (изучаются не менее трех), расстояния между элементами в группах приблизительно уравниваются, регистрируется некоторая закономерность направленности структурных образований фации.3 балла - элементы фации в значительном числе (более 50% от общего количества) структурированы, "островки" равномерности переходят в участки сравнительно большой площади. Внутри этих зон наблюдаются правильное расположение и равномерность расстояний между отдельными образованиями. Закономерность направленности элементов и зональность просматриваются достаточно четко.4 балла - элементы фации в большинстве своем структурированы (свыше 75% от общего количества), остальные распространяются "островками" по полю зрения, чаще в краевой (маргинальной) зоне. Расстояния между отдельными образованиями практически постоянны. Ориентация элементов подчиняется определенной закономерности почти по всему полю зрения.5 баллов - все элементы тезиграфической фации четко структурированы на всем поле зрения, что подтверждается рассмотрением нескольких полей. Деление на центральную, промежуточную и краевую зоны четко просматривается. Границы последних можно установить даже без микроскопа. Расстояния между элементами картины постоянны, ориентация фигур правильная, закономерная на всей поверхности фации.
) Степень выраженности ячеистости фации (С) отражает особенности органико-минеральных взаимодействий в фации. Оценка производится по шестибалльной прямой шкале: 0 баллов - полное отсутствие признаков появления ячеистости, однородность картины, нет выделения "островков" кристаллов. Фации представляют единый "пласт" кристаллических образований.1 балл - наличие первых признаков неоднородности, "дробления" кристаллоскопической картины (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
начало обособления групп элементов (менее 30% от числа всех образований, занимающих менее 30% поля зрения);
появление некоторой неоднородности картины;
начало "дробления" единого "пласта" кристаллических фигур.
2 балла - отмечается достаточно просматриваемая тенденция к "дроблению" фации, образованию "островков" кристаллов (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
количество обособившихся элементов в "островках" - от 30 до 50% от числа всех структур, они занимают более 30% поля зрения фации;
выраженная неоднородность, зональность картины;
визуализируется процесс "разделения фации на участки, регистрируются формирующиеся пояса кристаллизации, служащие границами последних, в некоторых случаях не на всем протяжении, толщиной в 1 кристалл.
3балла - наблюдаются выраженные изменения в фации (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
элементы в "островках" составляют от 50 до 75% от общего числа, занимаемая ими поверхность - более 50% поля зрения (по нескольким полям);
выраженная неоднородность, "зернистость" картины;
четко просматривается процесс "расчленения" фации в нескольких полях зрения;
пояса кристаллизации довольно четкие, образованы более чем одним рядом кристаллических структур.
4балла - достоверно просматриваются признаки появления ячеистости (выделены наиболее диагностически значимые принципы):
число сгруппированных в ячейки структур от 75 до 100% от общего количества;
сгруппированные элементы занимают все поле зрения (при изучении не менее чем трех полей);
очень четко выражены "дробность", "зернистость" картины;
пояса кристаллизации образованы более чем одним рядом кристаллов, имеются на всей поверхности поля зрения, окружают "островки" полностью.
5баллов - картина характеризуется следующими наиболее диагностически значимыми морфологическими признаками:
число сгруппированных в ячейки структур от 75 до 100% от общего количества;
сгруппированные элементы занимают все поле зрения (при изучении нескольких, не менее чем трех полей зрения);
очень четко выражена "дробность", "зернистость" картины;
пояса кристаллизации образованы более чем одним рядом кристаллов, имеются на всей поверхности поля зрения, окружают "островки" полностью;
присутствуют "разломы" картины (кроме фаций сыворотки крови, для которых данный феномен является самостоятельным диагностическим признаком).
) Выраженность отдельных зон кристаллизации (Z) - четкость формирования зон в фации высушенной биологической жидкости. Выражается в баллах (от 0 до 3): 0баллов - невозможность выделения каких-либо зон кристаллоскопической фации; 1балл - при малом увеличении светового микроскопа выделение зон неотчетливое, наблюдаются незначительные признаки зонализации; 2балла - наличие зон фации четко определяется при малом увеличении микроскопа; 3балла - четкая визуализация зон даже без микроскопа.
) Выраженность краевой белковой зоны (Кз) указывает на относительное содержание в биологической среде компонентов с высокой молекулярной массой, прежде всего белкового состава. Данный показатель оценивается по 4-балльной прямой полуколичественной шкале: 0баллов - полное отсутствие краевой зоны, невозможно выделение краевой зоны под "малым" (мельче х56) увеличением микроскопа; 1балл - краевая зона присутствует нечетко и/или не на всем протяжении фации; 2балла - при микроскопии по всему периметру микропрепарата отмечается наличие выраженной краевой зоны; 3балла - соотношение "ширина краевой зоны - радиус фации" превышает 1: 3; 4балла - выраженная краевая зона в сочетании с наличием "разломов"; 5баллов - краевая зона визуализируется даже без использования микроскопа.
) Рельефность текстуры (Т) позволяет оценить состояние и особенности фонового рисунка, на котором располагаются основные кристаллические и аморфные структуры. Оценивается по прямой 4-балльной схеме: 0баллов - нет признаков наличия текстуры; 1балл - едва заметные при микроскопии элементы (участки) текстуры; 2балла - хорошо различимая при микроскопии текстура фации; 3балла - визуализируемая без использования микроскопа текстура микропрепарата.
Можно заметить, что основная проблема разработки автоматических систем оценки результата кристаллогенеза заключается в большом объеме критериев и субъективности их оценки. Для её решения необходимо минимизировать количество критериев, устранить субъективный аспект с помощью компьютерного анализа и создать конкретную шкалу оценок.
Для уменьшения количества критериев, мы провели их тщательный анализ, проверили сложность их вычисления, применимость к различным методам и информативность. По его итогам был выбран один критерий - степень деструкции фации (далее СДФ), несущий, на наш взгляд, максимальное количество информации о фации и дающий исчерпывающую картину о протекании процесса кристаллогенеза, имеющий линейную шкалу оценки и простоту вычисления. СДФ суммирует как экзогенные факторы дегидратационного процесса (температура, влажность, давление, скорость потоков воздуха, попадание дополнительных веществ и т.д.) так и эндогенные (термодинамическая составляющая кристаллообразования, наличие адекватного для формирования кристаллогидратов и стабилизации органических макромолекул количества воды и т, д.).
Исходя из описания критерия и сопоставления данных, взятых из работ по кристаллографическим методам исследований, можно точно сказать, что величина СДФ определяется плотностью трещин, отношением радиальных трещин к тангенциальным и их распределением по зонам фации. Следовательно, система, распознающая форму разломов, их направление и плотность распределения в зависимости от зоны, позволит нам устранить субъективный аспект и даст исчерпывающую информацию.
В процессе считывания и преобразования в цифровой массив изображение подвергается различным искажениям и зашумлению, что требует применения средств для его улучшения и реставрации.
Весь алгоритм можно разбить на несколько этапов:
) Ввод изображения.
) Предварительная обработка.
) Распознавание линий.
) Расчет их радиальных и тангенциальных составляющих
) Вывод результата.
Ввод изображения будет осуществляться по средствам захвата с оптического устройства (камеры) либо считывания уже имеющегося.
Предварительная обработка направлена на улучшение изображения, отсечение лишней информации и состоит из нескольких шагов:
) Преобразование в полутоновое изображение.
Так как цвет не несет для нас значимой информации, можно перевести его в полутоновое, заменив значения RGB для каждого элемента матриц на значение интенсивности яркости. Это ускорит процесс обработки, так как программе или функции, работающий с матрицей изображения, необходимо будет оперировать с одним значением для каждого элемента.
) Выравнивание освещения (компенсация разности освещения).
Большинство изображений фаций имеет неравномерное освещение, что вызывает проблемы в процессе дальнейшей обработки. Компенсацию разности будем производить с помощью алгоритма Single scale retinex (SSR).
Принцип работы данного алгоритма:
Исходное изображение
(рис.2)
Получаем приближенное изображение освещения путем
низкочастотной фильтрации
(рис.3)- матрица свертки низкочастотного фильтра
Восстановим изображение по формуле
(рис.4)
) Сглаживающая фильтрация (устранение шумов).
Как правило, фильтрация осуществляется путем свертки матрицы изображения с маской, представляющей фильтр. В нашем случае будем использовать фильтр Гаусса. Фильтр Гаусса является результатом операции размытия изображения функцией Гаусса. Данный подход широко применяется в графических редакторах, как правило, для уменьшения зашумленности изображения и сглаживания резких краев. Также Гауссово сглаживание используется в качестве оператора этапа предварительной обработки во многих системах распознавания образов.
С точки зрения математики, применение фильтра Гаусса
равносильно свертке изображения с функцией Гаусса (также данный подход известен
как двумерное преобразование Вейерштрасса). Механизм работы фильтра заключается
в расчете функции Гаусса для каждого пикселя изображения. Уравнение гауссовой
функции для одного измерения имеет следующий вид:
, (1)
где x - координата объекта в одномерном пространстве;
σ - среднеквадратичное гауссово отклонение.
В двумерном случае дважды осуществляется расчет функции Гаусса (1)
для каждого из измерений:
, (2)
где x,y - координаты объекта в двумерном пространстве;
σ - среднеквадратичное гауссово отклонение.
Формула (2) дает поверхность, ограниченную концентрическими окружностями, распределенными относительно центральной точки по Гауссу. Значения, вычисляемые на основе этого распределения, используются для построения конволюционной матрицы, которая применяется к исходному изображению.
1) Выделение краев.
Выделение краев будет осуществляться детектором границ Канни. Его преимущества перед остальными детекторами:
а) Хорошее обнаружение, т.е. минимальная вероятность пропуска реального перепада яркости и минимальная вероятность ложного определения перепада (максимизирование выходного отношения сигнал/шум).
б) Хорошая локализация (пиксели, определенные как пиксели края, должны располагаться насколько возможно ближе к центру истинного края).
в) Только один отклик на один край.
Вышеперечисленные критерии были записаны в виде уравнений, которые были решены численно, и был определен путем моделирования вид оптимального (в смысле указанных выше критериев) оператора выделения края.
Принцип работы детектора:
. Свертка изображения с ядром - производной от фильтра гаусса.
. Поиск значения и направления градиента.
Утоньшение полос в несколько пикселей до одного пикселя.
. Связывание краев и обрезание по порогу.
Определяем два порога: нижний и верхний
Верхний порог используем для инициализации кривых
Нижний порог используем для продолжения кривых
Пример работы детектора границ Канни представлен в виде исходного изображения (рис.6) и обработанного изображения (рис.7)
Процесс распознавания лини и расчет их радиальных и тангенциальных составляющих можно объединить в одну операцию. Для этого разделим изображение кристаллограммы на несколько сегментов (рис.8). В пределах каждого сегмента ведем радиус с заданным углом смещения, если на его пути будет встречаться линия, проецируем её на радиус и нормаль к нему, поворачиваем радиус на заданный угол и повторяем операцию.
Проекция на радиус будет представлять собой радиальную
составляющую линии, а проекция на нормаль - тангенциальную.
Для реализации алгоритма было выбрано две программные среды MATLAB для предварительной обработки и Matcad для реализации процесса распознавания.(сокращение от англ. "Matrix Laboratory") - пакет прикладных программ для решения задач технических вычислений и одноимённый язык программирования, используемый в этом пакете.
Image Processing Toolbox - библиотека функций для MATLAB, позволяющих решать широкий спектр задач обработки изображений.- система компьютерной алгебры из класса систем автоматизированного проектирования, ориентированная на подготовку интерактивных документов с вычислениями и визуальным сопровождением.