Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время мытья тела человека с кожи смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается не только из микробов, находящихся на поверхности, но и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).
На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.
Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Неповрежденные кожные покровы для большинства микро-организмов, в том числе и патогенных, непроходимы. При нарушении же целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.
Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды – из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).
На поверхности кожи обнаруживаются кокки (стафилококки, стрептококки), чаще непатогенные (сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы).
Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк – Staphylococcus epidermidis, - золотистый и лимонно-желтый стафилококк.
1) посев отпечатков пальцев на чашке с МПА или специальными средами (например, кровяной агар) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;
2) посев смывов с рук при помощи тампона, смоченного в стерильном физ. растворе (8-10 мл), ополаскивают его и смывают (1 мл), исследуют на ОМЧ и на наличие кишечной палочки.
Определение общего микробного числа – ОМЧ. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают ее 12 – 15 мл расплавленного и остуженного до 45ºС МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 – 48 часов, при температуре 37ºС. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.
Определение кишечной палочки. Оставшееся количество смыва помещают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и помещают в термостат при температуре 43ºС, на следующие сутки высеивают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.
Среда Кесслера – содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу - Е.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.
Микрофлора полости рото-носоглотки разнообразна и многочисленна, здесь обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Особенно много их локализуется в зубном налете – в 1г сухой массы его содержится около 250 млн. микробных клеток.
В ротовой полости создаются благоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов – это щелочная реакция слюны, пищевые остатки, термостатная температура и влажность. В различных участках полости рта микрофлора не одинакова. На боковых поверхностях рта микробов мало. Поверхность языка, особенно задней его части, а также задней части носоглотки содержит большое количество микроорганизмов. Здесь преобладают стрептококки, сарцины, спирохеты, веретенообразные палочки, стафилококки и др. Большое разнообразие микрофлоры наблюдается между зубами, в криптах и лакунах миндалин, где из остатков эпителия, детрита и бактерий образуются тонзиллярные пробки, однако преобладают стрептококки и диплококки. Микрофлору полости рта можно разделить на постоянную - резидентную и факультативную.
Резидентную группу составляют стрептококки (Str. Salivarius и др.),непатогенные стафилококки, диплококки, коринебактерии, лактобациллы, вейлонеллы, трепонемы (Tr. Buccalis – наиболее распространѐнная), дрожжеподобные грибы (Candida aldicans), актиномицеты, мико-плазмы, простейшие.
Среди факультативных микроорганизмов встречаются энтеробактерии (роды Eseherichia, Klebsiella, энтеробактерии протея), синегнойная палочка, спорообразующие – бациллы, клостридии, а также – пептострептококки и пептококки. Некоторое время в ротовой полости могут персистировать вибрионы, спирохеты, дифтерийная палочка, менингококки и др.
В поддержании количественного и качественного постоянства нормальной микрофлоры полости рта главную роль играет слюна, обладающая антибактериальной активностью за счёт содержания в ней ферментов (лизоцим, лактоферрин, пероксидаза, нуклеаза) и секреторных иммуноглобулинов. Индивидуальные колебания в составе микрофлоры полости рта зависят от возраста, гигиенических навыков, диеты, общей резистентности организма и резистентности слизистых оболочек, наличие дефектов зубов.
Нормальная микрофлора полости рта обеспечивает её защиту за счёт конкуренции, антагонизма по отношению к патогенным микроорганизмам, таким как дифтерийный возбудитель, патогенные стафилококки и стрептококки, менингококки, условно-патогенные и патогенные грибы. В случае же нарушения микрофлоры, то есть возникновение дисбактериоза, патогенные и условно-патогенные микробы могут вызывать заболевания органов полости рта или обеспечивать так называемую нисходящую инфекцию, т.е. миграцию микроорганизмов из полости рта в глотку, гортань, желудок, трахею, бронхи, лёгкие.
Полученный материал используют:
а) для микробиологического исследования – готовят препараты-мазки, красят по Граму, по Леффлеру, по Нейссеру, по Циль-Нильсену, микроскопируют, по морфологическим свойствам определяют возбудителей (патогенные и условно-патогенные стрептококки, стафилококки, дифтерийная палочка, менингококки, туберкулёзная палочка и др.);
б) для микробиологического посева и последующей идентификации микроорганизмов.
Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Но иногда через желудок проходят патоген-ные микроорганизмы.
Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию фер-ментов), в этой полости обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.
Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике регистрируется самая разнооб-разная по составу микрофлора.
Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.
Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть – аэробы.
1) облигатную её часть – это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме;
2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний;
3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.
К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные, такие как представители семейства энтеробактерий (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии
(лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы.
Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа
Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов.
Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, про-водят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.
Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.
Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.
Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о со-стоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека.
В настоящее время определяют 2 вида энтерококков – 1) Ent.. fecalis и 2) Ent. faecium.
Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.
Среда Калины – это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой диализат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).
На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культуральным свойствам – первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид – розовые, розовато-серые колонии.
Морфологические свойства энтерококков – в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.
Это Гр+ палочки, строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек – бифуркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блоурокка, в пробирках в анаэробных условиях.
Среда Блоурокка готовится следующим образом – к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.
Культуральные свойства бифидобактерий.
На среде Блоурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост – в виде “точек с хвостиками” или маленьких комочков.
Морфологические свойства бифидобактерий.
В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.
Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Mykobakterium smegmalis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, монококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору – немногочисленную – непатогенные кокки, сапрофиты, дрожжи. Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и pH влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Bac. vaginalis (палочка Додерлейна), влагалищная палочка. Влагалищные палочки имеют двоякую форму – одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие – тонкие, изящные, с заострѐнными концами, располагаются по одиночке или попарно, или неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, это – факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью. В некоторых случаях, в микрофлоре влага-лища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации. Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидий в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники – в этом случае имеет место персистенция- до начала появления клинической болезни.
Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов – так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски.
Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования – микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей.
Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом.