Биосинтез белков
Введение
Выяснение механизма биосинтеза белков во всем многообразии их видовой специфичности и биологической активности было одной из крупнейших проблем биохимической науки. Лишь к концу XX столетия были выяснены все основные принципы, на которых основывается этот процесс, и расшифрованы структуры биологических макромолекул, принимающих в нем участие.
В эукариотических клетках для белкового синтеза необходимы около 300 специфических макромолекул, в том числе свыше 70 рибосомных белков, не менее 20 активирующих ферментов, более 10 вспомогательных ферментов и особых белковых факторов, свыше 70 видов транспортных и рибосомных РНК, множество матричных и низкомолекулярных ядерных РНК. В процессах созревания белков участвует не менее 100 дополнительных ферментов. Многие из этих макромолекул собраны в сложные трехмерные структуры и органеллы.
Вскрыты и фундаментальные закономерности, на которых основывается биосинтез белков: биологическое кодирование, принцип комплементарности, сборка биополимеров на матрицах.
1. Молекулярная организация генетического материала клетки
Белки синтезируются под прямым контролем генетического материала клетки. Первичная структура всех белков клетки закодирована в молекулах ДНК, составляющих основу хромосом. Ген - это участок ДНК, кодирующий синтез одной молекулы (белка или РНК).
Генетическая информация переписывается с ДНК на мРНК (транскрипция), а затем переводится в аминокислотную последовательность белковой молекулы (трансляция) с помощью рибосом (рис. 1). Образующиеся полипептидные цепи определяют признаки клетки и вместе с тем целого организма. Так происходит экспрессия (проявление) генетической информации.
Рис. 1. Транскрипция и трансляция мРНК прокариот (а); транскрипция, процессинг и трансляция мРНК эукариот (б).
Геном - это совокупность генов гаплоидного набора хромосом данного вида организмов. Плазмон - совокупность генов внеядерных ДНК, содержащихся в цитоплазме, то есть в митохондриях, пластидах и т.п. Геном видоспецифичен, кодирует синтез видоспецифических белков и структур.
Эукариоты содержат ДНК в хромосомах ядра. Количество ДНК в эукариотических клетках в десятки, сотни, тысячи раз больше, чем у прокариот.
Так, у человека ДНК состоит из 3,2 - 3,5 млрд нуклеотидов, ее длина в диплоидном наборе составляет 174 см. Структурные гены составляют лишь около 3%. Роль остальных участков не раскрыта, они не транскрибируются и получили название «молчащей» или "эгоистической" ДНК.
Избыточность ДНК эукариот объясняется также прерывистой организацией большинства генов. Кодирующие последовательности экзоны чередуются с не кодирующими - интронами. Количество таких участков варьирует в разных генах. Например, ген овальбумина кур включает 7 нитронов, а ген проколлагена млекопитающих - 50. Эти участки транскрибируются, а затем удаляются из первичного транскрипта по средством сплайсинга .
В разные периоды онтогенеза освобождаются от гистонов и транскрибируются те или иные гены ДНК, отличающиеся в разных клетках, что приводит к развитию организма. Таким образом, геном имеет определенный язык программирования, собственную программу, записанную в ДHK в голографическом виде.
2. Роль рибонуклеиновых кислот в белковом синтезе
Генетическая информация о структуре специфических белков, закодированная в ДHK, переносится из ядра в цитоплазму с помощью молекул РНК. В цитоплазме осуществляется биосинтез белка на рибосомах. Образующиеся белки определяют признаки клетки, а вместе с тем целого организма. Так происходит экспрессия (проявление) генетической информации.
Непосредственное участие в биосинтезе белка принимают молекулы РНК трех видов: транспортная РНК (тРНК), рибосомная РНК (рРНК) и матричная, или информационная PНK (мРНК). Количество РНК в каждой клетке находится в прямой зависимости от количества вырабатываемого белка. Все виды РНК синтезируются непосредственно на ДНК, которая служит матрицей
2.1 Транспортная РНК (тРНК)
Важная роль в процессе использования наследственной информации клеткой принадлежит тРНК. Доставляя необходимые аминокислоты к месту сборки пептидных цепей, тРНК выполняет функцию посредника. Каждой аминокислоте соответствуют две или большее число специфических тРНК.
Молекулы тРНК представляют собой полинуклеотидные цепи, состоящие из относительно небольшого числа нуклеотидов ? 75 - 95, что соответствует молекулярной массе 24 000 - 31 000 дальтон. В структуре разных тРНК выявлено много общих черт. Так, во всех тРНК 8 или более, нуклеотидов содержат необычные (модифицированные) азотистые основания, которые представляют собой производные главных оснований. В большинстве тРНК на 5'-конце находится гуанин, а на 3'-конце всех тРНК присутствует последовательность из трех нуклеотидов - ЦЦА.
В результате комплементарного соединения оснований, которые находятся в разных участках полинуклеотидной цени тРНК, она приобретает структуру, напоминающую по форме лист клевера. В ней выделяют четыре главные части, выполняющие различные функции. Центральная антикодоновая ветвь содержит антикодон - специфический триплет нуклеотидов, который комплементарен соответствующему кодону мРНК и может образовывать с ним водородные связи.
На противоположной стороне располагается акцепторный стебель, который присоединяет специфическую для тРНК аминокислоту к последовательности ЦЦA, стоящей на 3'-конце.
Ветвь 1, содержащая минорный нуклеотид дигидроуридин, обеспечивает контакт тРНК с рибосомой, а ветвь 3, содержащая псевдоуридин, - с ферментом аминоацил-тРНК-синтетазой (АРСазой)(рис.2).
Рис. 2. Строение типичной молекулы тРНК
Рибосомная РНК (рРНК) составляет более 80% всей РНК клетки. Она кодируется особыми генами, находящимися в нескольких хромосомах и расположенными в зоне ядрышка, называемой ядрышковым организатором. В клетках человека содержится около 100 копий гена рРНК, локализованных грушами на пяти хромосомах. С этого гена "списывается" первичный транскрипт, который разделяется на 3 молекулы: 28S, 18S и 5,8S рРНК. рРНК связывается с белковыми молекулами, образуя вместе с ними клеточные органеллы - рибосомы, которые находятся преимущественно в цитоплазме. На рибосомах протекает синтез белка.
Каждая рибосома состоит из двух субчастиц - большой и малой. В эукариотической рибосоме малая субчастица 40S состоит из одной молекулы рРНК и 33-х молекул разных белков, большая - из трех разных молекул рРНК и около 40 белков. Прокариотические рибосомы и рибосомы митохондрий и пластид содержат меньше компонентов и имеют меньшие размеры. Молекулы рРНК выполняют, прежде всего, роль каркасов, на которых в строго определенном порядке крепятся рибосомные белки. Кроме того, рРНК обеспечивает связывание рибосомы с определенной нуклеотидной последовательностью мРНК, благодаря чему устанавливается начало считывания информации при образовании полипептидной цепи. 28S рРНК имеет каталитическую активность, то есть является рибозимом.
Специальные участки (или функциональные центры) рибосомы обеспечивай ее взаимодействие с тРНК. В первом - аминоациальном (А - центре) размещается тРНК, несущая аминокислотный остаток (аминоацил-тРНК). В P-центре (пептидильном) располагается тРНК, нагруженная цепочкой аминокислот, то есть растущим полипептидом. Участки образуются благодаря взаимодействию обеих субчастиц рибосом. В каждый момент биосинтеза белка в центрах рибосомы помещаются два кодона мРНК, которые взаимодействуют с двумя соответствующими им тРНК.
Рибосомныесубчастицы имеют замысловатую форму, обеспечивающую выполнение ими их функций. Они "пригнаны" друг к другу, но между ними остается щель. Через щель проходит "прочитанная" молекула мРНК, отсюда же выдвигается новосинтезированная полипептидная цепь (рис. 3).
Существует четкое "разделение труда" между субчастицами рибосомы: малая субчастица отвечает за прием и декодирование генетической информации, то есть выполняет генетические функции, в то время как большая обеспечивает энзиматические реакции в процессе трансляции. Предполагают, что образование пептидной связи (реакция транспептидации) катализируется пептидилтрансферазным центром рибосомы, и основной вклад вносит рРНК.
Рибосомные субчастицы отделяются друг от друга после окончания синтеза полипептидной цепи.
Рис. 3. Расположение функциональных центров на малой (вверху) и большой (внизу) субчастицах рибосомы.
Цепь мРНК связана с малой субчастицей в районе ее "шеи" и протягивается через этот мРНК-связывающий центр в ходе трансляции от 5'-конца (направлен вниз и вправо) к 3'-концу (обращен вверх и влево). Две молекулы тРНК занимают А- и Р-участки на малой субчастице, будучи связаны своими антикодонами с двумя смежными кодонами мРНК в районе "шеи" малой субчастицы. Пептидилтрансферазный центр (РТС) расположен в районе "шеи" (в борозде под центральным выступом) большой субчастицы. Когда субчастицы ассоциированы, акцепторные концы двух тРНК с их аминоацильным и пептидильным остатками взаимодействуют с пептидилтрансферазным центром большой субчастицы.
2.2 Матричная РНК (мРНК)
Матричная (мРНК) или информационная (иРНК) составляет всего 3 - 5% всей содержащейся в клетке РНК. Она переносит генетическую информацию от ДНК к рибосомам, где служит матрицей для биосинтеза полипептидных цепей. В любой данный момент в клетке присутствует чрезвычайно сложная смесь сотен мРНК, каждая из которых кодирует одну или несколько полипептидных цепей. Большинство мРНК существует в клетке в течение короткого времени, так как распадаются, выполнив свою функцию. Матричные РНК ? это одноцепочечные молекулы caмой разной длины. Минимальная длина определяется размером полипептидной цепи, которую она кодирует. Например, для синтеза белка, состоящего из 100 аминокислотных остатков, требуется мРНК из 300 нуклеотидов, поскольку каждая аминокислота кодируется тройкой нуклеотидов (триплетом). Однако мРНК всегда несколько длиннее, так как содержит ряд дополнительных участков. Так, на 5'-конце имеется некодирующий "лидер" длиной от 25 до 150 оснований. мРНК прокариот обычно кодируют два или большее число полипептидов (их называют полигенными). Такие мРНК содержат межгенные области, или спейсеры, которые разделяют отдельные кодирующие участки и, видимо, помогают регулировать скорость транскрипции.
Эукариотические мРНК обычно являются моногенными. Другое отличие эукариотическихмРНК ? это наличие в них 5'-концевого “кэпа” (от англ. cap - “шапка”), представляющего собой остаток 7-метилгуанозина, присоединенного посредством трифосфатной связи. Кроме того, на своем 3'-конце они содержат “хвост” из 100-200 последовательно присоединенных остатков А (аденилата). Эти характерные участки присоединяются к первичному транскриптуэукариотической мРНК в ходе процессинга.
3. Генетический код и его свойства
Генетический код - это способ записи генетической информации о структуре белков (полипептидов) посредством последовательности нуклеотидов в нуклеиновых кислотах (ДНК или РНК).
Последовательность нуклеотидов ДНК однозначно определяет порядок расположения аминокислот в полипептидной цепи. В то же время химическая природа мономеров (нуклеотиды и аминокислоты) совершенно различна, так что они не могут непосредственно взаимодействовать друг с другом. К тому же в нуклеиновых кислотах содержится всего 4 нуклеотида, а в белке - 20 аминокислот. Поэтому белок можно рассматривать как линейный текст, записанный при помощи алфавита из 20 букв, роль которых играют аминокислоты, который определяется (кодируется) другим текстом, записанным при помощи алфавита из 4-х букв ? нуклеотидов молекулы ДНК. Следовательно, для каждой аминокислоты имеется свой кодон.
Простые математические расчеты показывают, что каждая аминокислота кодируется более, чем одним нуклеотидом. Однако сочетаний по 2 нуклеотида 42 = 16 недостаточно для кодирования 20-ти аминокислот. При сочетании нуклеотидов по 3 получается 43 = 64 кодона, что и реализуется в клетке. "Словарь", при помощи которого в мРНК записана информация о кодируемом ею белке, расшифрован полностью (таблица 1).
Генетический код имеет следующие особенности.
. Код триплетный, то есть одну аминокислоту определяет тройка нуклеотидов.
. Код однозначный (специфичный): каждый кодон обозначает только одну, "свою" аминокислоту.
. Код не имеет “запятых”, то есть отсутствуют сигналы, показывающие конец одного кодона и начало следующего. Поэтому в начале прочтения мРНК должна быть правильно установлена “рамка считывания”. Если в результате воздействия мутагенов произойдет выпадение или встраивание одного нуклеотида, то рамка считывания "сбивается" на один нуклеотид, и все последующие кодоны выйдут из правильной рамки, что приведет к образованию белка с искаженной аминокислотной последовательностью (мутации со сдвигом рамки считывания).