Методика определения полового хроматина в буккальном соскобе следующая. После предварительного полоскания ротовой полости стоматологическим шпателем берут соскоб эпителия внутренней поверхности щеки у коренных зубов. Соскоб наносится равномерным слоем на предметное стекло, окрашивается в течение 2 минут ацетоарсеином, затем покрывается покровным стеклом. Излишки краски удаляют с помощью фильтровальной бумаги. Подсчет телец полового хроматина проводят под иммерсией в круглых или овальных ядрах с ненарушенной ядерной мембраной. В норме у женщин обнаруживают половой хроматин в более 20% клеток, а у мужчин он в норме отсутствует. Метод используют для диагностики хромосомных болезней, связанных с изменением числа Ххромосом. Существует также методика определения У-хроматина, которая используется для диагностики синдрома полисомии У.
Глава 3. Принципы хромосомного анализа
Обязательным этапом исследования является визуальный анализ хромосом под микроскопом с использованием тысячекратного увеличения (х1000) при окулярах х10 и иммерсионном объективе х100. Оценку качества и пригодности хромосомных препаратов для исследования, а также отбор метафазных пластинок для анализа проводят при малом увеличении (х100). Для исследования выбирают хорошо окрашенные, полные метафазные пластинки с хорошим разбросом хромосом. Исследователь подсчитывает общее количество хромосом и проводит оценку структуры каждой хромосомы путем сопоставления исчерченности гомологов, а также сопоставления наблюдаемой картины с цитогенетическими картами (схемами) хромосом.
Использование компьютерных систем анализа изображений существенно облегчает задачу цитогенетика, повышает качество его работы и предоставляет возможность быстрого и простого документирования результатов исследования. Для обеспечения высокого качества работы рекомендуют участие двух специалистов в проведении цитогенетического исследования каждого образца. Документом, подтверждающим исследование, служит протокол, в котором указывают координаты просмотренных клеток, количество хромосом в каждой из них, обнаруженные перестройки, формулу кариотипа и заключение, а также фамилию пациента, дату и номер исследования, фамилию и подпись врача (врачей), проводившего исследование. Следует сохранять препараты и изображения хромосом для последующего просмотра.[5]
Заключение
В настоящее время у человека известно более 700 заболеваний, вызванных изменением числа или структуры хромосом. Около 25% приходится на аутосомные трисомии, 46% - на патологию половых хромосом. Структурные перестройки составляют 29%.
Пока не существует методов, которые позволяли бы лечить хромосомные болезни, но разработаны методы диагностики таких мутаций, что позволяет их обнаружить на ранней стадии. Такие, как кариотипирование, определение полового хроматина, метод мультиплексной лигазной цепной реакции, методы SKY и FISH. Материалом для диагностики большинства хромосомных болезней являются метафазные пластинки, которые изготавливают из лимфоцитов периферической крови. Так же пригодны фибробласты кожи, клетки красного костного мозга. Для пренатальной диагностики культивируют клетки амниотической жидкости, ворсин хориона, плаценты, эмбриональные ткани.
Основными принципами диагностики хромосомных заболеваний является визуальный анализ хромосом под микроскопом. Для исследования выбирают хорошо окрашенные, полные метафазные пластинки с точным расположением хромосом.
Список используемой литературы
1. Баранов В.С., Кузнецова Т. В. Цитогенетика эмбрионального развития человека: Научно-практические аспекты. [Текст]: СПб: Издательство Н-Л,2006.
2. Диагностика хромосомных заболеваний [Электронный ресурс]:Режим доступа: https://studopedia.info/1-97729.html (Дата обращения 19.12.2017)
3. Котелевская, Е.А., Смирнова, С.А., Василишина, А.А., Трофимова, И.Л., Смолянинов, А.Б. Молекулярно-генетическая диагностика хромосомных заболеваний с помощью мультиплексной лигазной цепной реакции [Текст]: СПб.: Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого», 2011.-247с.
4. Методы диагностики хромосомных заболеваний[Электронный ресурс]: Режим доступа: http://reflemp.ru/metodi-diagnostikihromosomnih-zabolevanij.html (Дата обращения 19.12.2017)
5. Цитогенетическая диагностика хромосомных болезней[Электронный ресурс]: Режим доступа: http://meddaily.info/?cat=article&id=952(Дата обращения 19.12.2017)