Материал: ПромБТ_2020 3 Хроматография - введение
Мёртвое время колонки – из хроматограммы
Артефактный пик в начале хроматограммы, соответствующий выходу растворителя пробы.
Особенно характерен для UV детекторов (из-за особенностей аппаратуры детектор может отследить изменение коэффициента преломления).
Часто выглядит как первая производная гаусовой кривой.
В случае наличия в пробе неудерживающихся соединений – мертвое время можно определять как время удерживания такого соединения (или начало большого пика).
Точность определения зависит от того, насколько не удерживается данный аналит.
© С. В. Еремин, 2019 |
41 |
Мёртвое время колонки
Экспериментальное определение мёртвого (нулевого) времени колонки достаточно сложно. Необходимо вводить совершенно не связывающееся с сорбентом вещество, которое можно увидеть на используемом детекторе.
Если детектор UV, то для ОФ можно использовать урацил или нитрат. Для НФ иногда пригоден бензол.
При рефрактометрии ОФ можно использовать D2O, а для НФ алканы с более длинными цепочками, чем в элюенте.
В коммерчески доступных тестовых смесях для различных колонок всегда присутствует компонент с нулевым (с достаточной точностью) временем удерживания.
© С. В. Еремин, 2019 |
42 |
Мёртвый объём колонки
В лабораторный паспорт колонки удобнее вносить не мёртвое время, а мёртвый объем, поскольку могут использоваться разные расходы элюента. Пересчёт при этом тривиален.
0 мл |
= 0 мин |
(мл/мин) |
0 |
мин = |
0 мл |
|
(мл/мин) |
||||||
|
|
|
|
|
Для новой колонки можно сразу рассчитать мёртвый объем по результатам тестовой хроматограммы (фирменной или своей самой первой).
Кроме того, можно воспользоваться приближенными формулами
Для колонки ID 4.6 мм:
0 мл 0.01 (длина колонки мм) ± 10%
Обобщённая формула:
0 мл 0.5 10−3 (мм) (мм)2 ± 10%
Колонка 250*4.6 мм -> V0 ≈ 2.5 мл
© С. В. Еремин, 2019 |
43 |
Фактор удерживания К (коэффициент ёмкости)
К = (tx-t0) / t0 - отношение исправленного времени удерживания к мёртвому времени
Зависит от
•сорбента, элюента, аналита
•температуры (если есть физико-химические взаимодействия.
В эксклюзионной – НЕТ)
Не зависит от
•размеров колонки
•скорости подачи элюента
Имеет смысл только для изократики!
© С. В. Еремин, 2019 |
44 |
Селективность α
α = Kn+1/ Kn - отношение коэффициентов ёмкости двух соседних пиков.
Зависит от
•сорбента, элюента, аналита
•температуры (если есть физико-химические взаимодействия.
В эксклюзионной – НЕТ)
Не зависит от
• |
размеров колонки |
В общем смысле - способность |
|
• |
скорости подачи элюента |
хроматографической системы |
|
разделять некую смесь |
|||
|
|
||
Имеет смысл только для |
аналитов. Под системой здесь |
||
изократики! |
понимается конкретная колонка |
||
и элюент (или метод градиента)
© С. В. Еремин, 2019 |
45 |