Материал: Тонкослойная хроматография аминокислот в мицеллярных подвижных фазах на силикагеле
845
анионного ДДС непрерывно уменьшается, причем на зависимости имеется излом и растет величина ∆Rf (эффект дифференцирования). Тем не менее на практике лучше работать в более кислой среде, так как зоны аминокислот в ней более узкие. Следует отметить, что экстремумы на зависимости Rf – рН в ПФ на основе мицелл катионного и неионного ПАВ и излом в мицеллах анионного ДДС приходятся на одно и то же значение рН, близкое к 4.5, что, вероятно, связано с изменением химической формы данных аминокислот при диссоциации карбоксильной группы. Нейтральные аминокислоты в ПФ на основе ЦП делятся во всем интервале рН, но лучше в щелочной среде. Разделить нейтральные аминокислоты, варьируя рН среды в мицеллярном растворе ТХ-100 не удалось, а подвижность гидрофобных аминокислот от кислотности среды практически не зависит.
Практическое применение МПФ. В выбранных оптимальных условиях проведено разделение аминокислот в трех коммерческих объектах: «Фактор роста», «Элтацин» и «ВСАА 1000». Данные препараты повышают толерантность организма к физическим нагрузкам и увеличивают мышечную массу. Пример разделения гидрофильных аминокислот и компонентов БАД «Фактор роста» показан на хроматограмме (рис.4), а количественные данные определения аминокислот в указанных объектах с помощью мицеллярных ПФ на основе различных концентраций ДДС приведены в таблице 2.
Рис. 4. Пример хроматограммы разделения гидрофильных аминокислот в ПФ на основе 0.03 М ДДС; слева - направо: аргинин, лизин, аспарагиновая, глутаминовая кислоты и гистидин. Цифрами обозначены аминокислоты, разделенные в БАДе "Фактор Роста": 1-аргинин, 2-лизин, 3- орнитин
Для определения аминокислот использовали метод градуировочного графика. Для его построения готовили стандартные растворы аминокислот (1мг/мл). Микрошприцем на стартовую линию пластинки наносили 7 проб объемом от 0.1 до 0.7 мкл. С помощью программы Videodensitometer “Sorbfil”, рассчитывали площади пятен. Строили зависимость площади пика от массы пробы, мкг. Как видно из приведенных таблиц, результаты определения в целом соответствуют заявленному содержанию аминокислот в объектах. Таким образом показано, что ПФ на основе мицелл ПАВ позволяют в режиме ТСХ проводить полуколичественную оценку содержания некоторых аминокислот в различных коммерческих БАДах в течение 15-20 минут. Суммарная погрешность, включающая случайную и систематическую составляющую, не превышает 15-20 процентов.
Ворожейкин и др. / Сорбционные и хроматографические процессы. 2011. Т. 11. Вып. 6
846
Таблица 2. Содержание аминокислот в 1 грамме объектов, содержащих аминокислоты «Фактор роста» n = 3, P = 0.95
Аминокислота |
Rf |
Найдено |
Sr |
Относительная |
По паспорту |
||
m±∆m, мг |
погрешность, % |
mобъект, мг |
|||||
|
|
|
|||||
|
|
«Фактор роста», ДДС 0.021 М |
2.4 |
|
|||
Arg |
0.37 |
83 ± 2 |
0.06 |
|
100 |
||
Lys |
0.23 |
22 ± 1 |
0.04 |
|
4.5 |
20 |
|
|
|
«Элтацин», ЦПХ 0.030 М |
5.1 |
|
|||
Gly |
0.91 |
117± 6 |
0.05 |
|
140 |
||
Glu |
0.94 |
128± 5 |
0.06 |
|
4.0 |
140 |
|
|
|
«ВСАА 1000», ЦПХ 0.045 М |
3.4 |
|
|||
Val |
0.80 |
177±6 |
0.05 |
|
192 |
||
Leu + Ile |
0.74 |
183±8 |
0.04 |
|
4.4 |
208 |
|
Заключение
Таким образом, проведенное систематическое исследование показало, что варьируя природу и концентрацию мицелл ПАВ в подвижной фазе, ионную силу раствора и рН среды можно проводить разделение аминокислот, относящихся к группам полярных (катионных и анионных), нейтральных или гидрофобных представителей, на пластинках Сорбфил с полярной неподвижной фазой на основе силикагеля. Возможна также быстрая полуколичественная оценка качества коммерческих БАДов, содержащих аминокислоты.
Список литературы
1.Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2008, Т.1,2. 1206 с.
2.Дебабов В.Г. Биотехнология. М.: Наука, 1994. 425 с.
3.Кленова И.Ф., Яременко Н.А. Ветеринарные препараты в России. М.: Сельхозиздат, 2000. 544 с.
4.Lozanov V., Petrov S., Mitev V. Simultaneous analysis of aminoacid and biogenic polyamines of higher performance liquid chromatography after precolumn derivatization with N-(9-fluroenylenethaoxycerbonyloxy) succinide // J. Chromatogr. A, 2004, V. 1025, P. 201–208.
5.Селеменев В.Ф., Хохлов В.Ю., Бобрешова О.В., Аристов И.В., Котова Д.Л. Физико-химические основы сорбционных и мембранных методов выделения и разделения аминокислот. Воронеж, 2001. 300 с.
6.Thongkhao-On K., Kotegoda S., Pulido J.S., Shippy S.A. Determination of amino acids in rat vitreous perfusates by capillary electrophoresis // Electrophoresis, 2004, V.25, P. 2978–2984.
7.Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2 ч. - М.: Мир. 1980. 621 с.
8.Красиков В.Д. Основы планарной хроматографии. – СПб.: Химиздат, 2005. –
232с.
9.Малахова И.И. Количественная высокоэффективная тонкослойная хроматография аминокислот. Автореф. дис. … канд. хим. наук. СПб., 2003. 22 с.
Ворожейкин и др. / Сорбционные и хроматографические процессы. 2011. Т. 11. Вып. 6
847
10.Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Тюрина Н.В. Поверхностно-активные вещества в тонкослойной хроматографии // Журн. аналит. химии, 2003, Т.58, С.808-818.
11.Armstrong D.W., McNeely M. Use of micelles in the TLC separation of polynuclear aromatic compounds and amino acids // Anal. Lett., 1979, V. 12, P.1285-1291.
12.Sherma J., Sleckman B.P. Chromatography of aminoacids on reversed phase thin layer plates
//J. Liq. Chromatogr. 1983, V.6,. № 1, P.95-108.
13.Mohammad A. Gupta R. Mobility behavior of amino acids on silica static phase: Micelles activated separations // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 2008, V.65, №.2, P.166-171.
14.Mohammad A. Zehra A. Surfactants modified silica phase for sorption studies of essential amino acids by thin layer chromatography // Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects, 2007, V. 301, № 1-3, P. 404-411.
15.Lepri L., Desideri P.G., Heimler D. Reversed-phase and soap thin-layer chromatography of aminoacids // J. Chromatogr, 1980, V. 195, P. 65-73.
16.Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Тюрина Н.В. Тонкослойная хроматография хромофорных индикаторов, хелатообразующих реагентов и хелатов металлов в растворах ПАВ // Сорбционные и хроматографические процессы, 2004, Т.4, Вып. 6.
С.750-763.
Штыков Сергей Николаевич – д.х.н.,
профессор кафедры аналитической химии и химической экологии Института химии Саратовского государственного университета имени Н.Г. Чернышевского., Саратов
Ворожейкин Сергей Борисович – аспирант кафедры аналитической химии и химической экологии Института химии Саратовского государственного университета имени Н.Г. Чернышевского, Саратов
Башко Елизавета Сергеевна – студентка 5
курса Института химии Саратовского государственного университета имени Н.Г. Чернышевского, Саратов
Shtykov Sergei N. – Dr. Sci. (Chemistry), Professor, Division of Analytical Chemistry and Chemical Ecology, Institute of Chemistry, N.G. Chernyshevskii Saratov State University, Saratov E-mail: shtykovsn@mail.ru
Vorozheikin Sergei B. – post-graduate student, Division of Analytical Chemistry and Chemical Ecology, Institute of Chemistry, N.G. Chernyshevskii Saratov State University, Saratov, E-mail: deliverer@mail.ru
Bashko Elizaveta S. – student, Institute of Chemistry, N.G. Chernyshevskii Saratov State University, Saratov
Ворожейкин и др. / Сорбционные и хроматографические процессы. 2011. Т. 11. Вып. 6