Материал: Lavrinenko,Babina_fiziol krovi-КРИ

Задание 2. Фиксация и окраска мазков

Ход работы Есть два способа фиксации и окраски мазка.

Способ 1. Свежеприготовленный, высушенный на воздухе мазок за-

фиксируйте метиловым или этиловым спиртом. Для этого мазок поместите горизонтально в ванночку на подставки и капайте спирт так, чтобы он полностью покрывал мазок крови. Подождите несколько минут до испарения спирта.

Окраску фиксированных мазков производите свежеприготовленным водным раствором краски Романовского-Гимза. Для этого на 1 мл воды до-

бавьте одну каплю краски (~40мкл). Для получения хорошей окраски значение рН воды должно составлять ~6,8–6,9. Поэтому желательно использовать вместо воды фосфатный буфер с рН – 6,8–6,9. На один мазок потребуется 2–3 мл водного раствора краски.

Окрашивание производите нанесением водного раствора краски каплями на горизонтально расположенный на подставках в ванночке мазок

(до полного покрытия мазка). Красьте в течение 15–20 мин, после чего смойте краску холодной водопроводной водой и высушите мазок на воздухе.

Способ 2 (ускоренный). При окраске мазка ускоренным способом мазок не фиксируется предварительно. Свежеприготовленный,

высушенный на воздухе мазок поместите горизонтально в ванночку на подставки и наносите неразведенную краску Романовского – Гимза каплями, чтобы она полностью покрывала мазок крови, при этом капли считайте. Подождите 2 мин и после этого нанесите столько же капель дистиллированной воды. Смешайте воду с краской аккуратным покачиванием мазка и красьте 10 минут. После этого краску смойте холодной водопроводной водой и высушите мазок на воздухе.

96

Окрашенный и высушенный мазок исследуйте под микроскопом с им-

мерсией. На мазок нанесите каплю иммерсионного масла, осторожно опустите объектив (х90) до соприкосновения с маслом, затем объектив приподнимите на 1 мм. При этом силы поверхностного натяжения удерживают масло в контакте с линзой. После этого настройте поле зрения, медленно опуская объектив до появления контуров клеток. Для окончательной фокусировки используйте микровинт.

В поле зрения (рис. 7) основную площадь занимают безъядерные эритроциты и от одного до нескольких лейкоцитов с ядрами. Лейкоциты крупнее эритроцитов по размерам; ядра окрашены в фиолетовый цвет.

Нейтрофилы имеют бледно-розовую цитоплазму с нейтрофильными гранулами, окрашивающимися в розово-фиолетовый цвет. Форма ядра нейтрофилов зависит от их зрелости. Палочкоядерные нейтрофилы,

являющиеся более молодыми клетками, имеют ядро в виде изогнутой палочки. У зрелых нейтрофилов ядро вследствие перекручивания разделено на ряд сегментов, связанных очень тонкими, иногда почти незаметными нитями. Это полиморфноядерные, или сегментоядерные,

нейтрофилы.

Рис.7. Морфологические особенности лейкоцитов крови: 1 – базофил;

2, 12 – эритроциты; 3 – эозинофил; 4, 7 – моноциты; 8, 9, 10 – лимфоциты;

97

5 – палочкоядерный нейтрофил; 6 – сегментоядерный нейтрофил; 11 –

тромбоциты

У эозинофилов и базофилов цитоплазма окрашена очень слабо.

Эозинофилы имеют ярко окрашенные красные гранулы, окрашивающиеся эозином. Ядро эозинофилов по структуре близко к ядру нейтрофилов:

более молодые клетки имеют палочковидное ядро, более зрелые – сегментированное. Однако сегментация ядра выражена меньше. Ввиду относительной малочисленности эозинофилов учет палочкоядерных и сегментоядерных форм в отдельности не производится.

Базофилы в цитоплазме содержат крупные темные фиолетовые или ультрамариновые гранулы, часто закрывающие отдельные участки ядра.

Ядро базофилов неправильной формы, окрашивается в фиолетово-розовый цвет.

Лимфоциты и моноциты, составляющие группу агранулоцитов, не со-

держат зернистости в цитоплазме. Клетки лимфоцитов округлые, с

круглым или овальным ядром, которое окружено или очень узким (малые лимфоциты), или более широким (средние и большие лимфоциты) пояском цитоплазмы. Цитоплазма лимфоцитов голубая. Часто она видна лишь с одной стороны от ядра (в виде серпа). В некоторых клетках и этот серп незаметен, и тогда малый лимфоцит имеет вид «голого ядра».

Моноциты крупнее лимфоцитов, большей частью круглой, иногда не-

правильной формы, с хорошо выраженной цитоплазмой. Цитоплазма моноцитов серо-голубая. Ядро сравнительно велико и имеет выступы и углубления. Обычно оно «бобовидной» формы. Интенсивность окраски ядра моноцитов слабее, чем лимфоцитов.

Двигаясь по мазку, исследуйте лейкоциты в каждом поле зрения. При этом рекомендуется пересекать мазок по схеме, представленной на рис. 8.

98

пересчет на абсолютное содержание клеток крови, исходя из подсчитанного количества всех лейкоцитов в крови. При отклонениях морфологического состава в абсолютных единицах от нормы (таблица)

делается вывод об абсолютном нейтрофилезе или нейтропении и т. д.

Таблица. Морфологический состав лейкоцитов крови в абсолютных единицах (лейкоцитарный профиль)

Сделайте общее заключение о защитной роли лейкоцитов.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОЭ, ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО, РЕЗУСФАКТОРА

Цель: ознакомиться с методиками определения скорости оседания эритроцитов, групп крови и резус-фактора.

Задачи:

1)определить скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

2)определить группу крови по системе АВО;

3)определить резус-фактор.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, прибор Панченкова, эмалированные пластинки с лунками, стеклянные

палочки, стандартные сыворотки для определения групп крови и резус-

фактора, 5-процентный раствор цитрата натрия.

Работа № 8. Определение СОЭ

Метод основан на определении высоты столба плазмы крови, стабили-

зированной цитратом натрия, над осевшими за 1 ч форменными

100