Материал: Lavrinenko,Babina_fiziol krovi-КРИ

элементами, среди которых преобладают эритроциты. Для этого используется капилляр Панченкова.

Ход работы Капилляром из прибора Панченкова (рис. 9) наберите раствор цитрата

натрия до метки Р (50) и выпустите в лунку эмалированной пластинки.

Затем последовательно заберите 2 капилляра крови до метки К (0). Кровь быстро смешайте с цитратом натрия в лунке и наберите снова в капилляр до метки 0 (К). Верхний конец капилляра закройте пальцем, чтобы раствор крови не вытек; перенесите капилляр в прибор Панченкова. Сначала нужно установить нижний конец капилляра в нижнее резиновое кольцо прибора, а затем – в верхний.

Рис. 9. Прибор Панченкова: а – штатив с капиллярами; б – капилляр;

К, Р — метки на шкале капилляра.

Кровь в капилляре прибора оставьте на 1 ч при комнатной температуре. По истечении часа измерьте высоту столба плазмы над эритроцитами в мм. Эта величина и составляет показатель СОЭ.

Рекомендации по оформлению протокола работы Полученные результаты занесите в тетрадь протоколов опытов,

оцените их и сделайте заключение, исходя из того, что в норме СОЭ составляет для мужчин 1–10 мм/ч, для женщин 2–15мм/ч.

101

СОЭ зависит от концентрации эритроцитов (увеличивается при эритропении, уменьшается при эритроцитозе), вязкости крови (понижается при сгущении крови), соотношения различных фракций белков крови

(увеличивается при повышении концентрации глобулинов и фибриногена).

СОЭ увеличивается при беременности (в связи с повышением концентрации фибриногена). У новорожденных наблюдается замедление СОЭ, обусловленное эритро-цитозом и низкой концентрацией фибриногена. В дальнейшем значение СОЭ соответствует уровню у взрослых.

Работа № 9. Определение группы крови по системе АВО

Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов

(агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существует два групповых агглютиногена (А и В) и два агглютинина

(α и β). Разные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: О

(I), А (II), В (III) и АВ (IV).

Для установления группы крови используются стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Метод определения группы крови по системе АВ0 основан на смеши-

вании капли крови с раствором, содержащим агглютинины – антитела против антигенов А и В (агглютиногенов).

В качестве таких растворов служат моноклональные анти-А и анти-В

антитела, поликлональные иммунные сыворотки или сыворотки крови лиц со II и III группами крови.

Ход работы Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной

из пальца. На планшет в разные лунки индивидуальными пипетками

102

нанесите растворы анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1 мл).

Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочной (разными концами в каждой лунке) смешайте кровь с реагентами.

За ходом реакции наблюдайте визуально при легком покачивании пластины в течение 3 минут. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты наблюдаются в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Таблица. Интерпретация результатов реакции агглютинации

Примечание. «+» - наличие агглютинации, «–» – отсутствие агглютинации.

Рекомендации по оформлению протокола работы Интерпретируйте результаты реакции агглютинации в соответствии с

данными, приведенными в таблице.

Работа № 10. Определение резус-фактора

Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эрит-

роцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена),

названного резус-фактором.

103

Выделяют три разновидности резус-антигена: D, С, Е. Наибольшей ак-

тивностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh(D),

условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D) – резус-отрицательными (Rh-).

Метод определения резус-принадлежности – резус-фактора (Rh-

фактора) крови человека – основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим антитела против резус-антигена (D).

В качестве таких растворов служат моноклональные анти-Dантитела или поликлональная иммунная антирезусная сыворотка.

Ход работы Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной

из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1

мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите ма-

ленькую каплю исследуемой крови (0,01–0,03мл). Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом.

В течение 3 мин наблюдайте за ходом реакции визуально при легком покачивании пластины. Результат реакции в лунках может быть либо положительным, либо отрицательным.

Рекомендации по оформлению протокола работы Сделайте вывод, исходя из того, что положительный результат

выражается в агглютинации (делается вывод о наличии в крови испытуемого резус-фактора, то есть резус-положительности). При отрицательном результате агглютинация отсутствует (делается вывод об отсутствии в крови испытуемого резус-фактора).

104

РАБОТА НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗАТОРЕ ГЕМОЛЮКС 19

Подготовка пробы

Рекомендуется использовать для анализа венозную кровь с антикоагулянтом К3ЭДТА или К2ЭДТА. В случае самостоятельного приготовления пробирок помните, что концентрация приготовленного антикоагулянта должна составлять 1,5–2,2 мг/мл цельной крови.

Оптимально, если кровь будет сразу браться с помощью вакуумных систем взятия крови, например «Вакуэт» (Грайнер).

При использовании капиллярной крови надо брать кровь самотеком,

исключить надавливание и забор тканевой жидкости; использовать специальные пробирки с капиллярами (типа «Миниколлект»), содержащие К3ЭДТА или К2ЭДТА. Кровь забирать до меток, указанных на пробирках.

Только в этом случае будет исключена преаналитическая ошибка измерения.

После взятия крови в пробирку содержимое необходимо перемешать для равномерного растворения ЭДТА и исключения образования осадка.

Оптимально для этого использовать механические шейкеры-ротаторы с вертикальным регулируемым вращением (типа Ротатора RS-24 или Ротамикс RM1). Идеальна ситуация, когда кровь до анализа непрерывно плавно перемешивается. Если это невозможно, то перемешивание необходимо перед анализом. Если нет ротатора, то перемешивание вручную должно проводиться при плотно закрытой крышке плавным покачиванием примерно на 180° в вертикальной плоскости. Недопустимы резкое встряхивание, щелчки по пробирке, так как это может приводить к повреждению клеток.

105