Взаимодействие с щелочами. 1 мл экстракта смешивали 10% раствора натрия гидроксида. Раствор окрашивался в желто - бурый цвет.
Положительные результаты вышеперечисленных реакций свидетельствуют о наличии в комплексном экстракте веществ флавоноидной природы.
Обнаружение флавоноидов в фитоэкстракте из гинкго билоба двулопастном.
1. Цианидиновая реакция: 1 мл экстракта помещали в пробирку, добавляли цинковую пыль, затем по 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты и нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 минут. Наблюдали красное окрашивание
2. Борно-лимонная реакция: К 1 мл экстракта прибавляли метанольные растворы H3BO3. Появилось жёлтое окрашивание с жёлто-зелёной флуоресценцией.
3. С раствором аммиака: К 1 мл экстракта прибавляли 1 мл раствора аммиака, появилось желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное.
Таким образом, проведенные химические реакции доказали наличие флавоноидов в экстракте гинкго двулопастного жидком.
Количественное определение суммы флавоноидов в комплексном экстракте
Содержание суммы флавоноидов в процентах (X) в пересчете на рутин вычисляли по методике описанной выше.
Содержание суммы флавоноидов в комплексном фитоэкстракте в пересчете на рутин составило 2.85±0.02%.
Валидация методики количественного определения
Проводилась в соответствии с требованиями нормативной документации, регламентирующей валидационные процессы, согласно ОСТу 64-02003-2004.
Рис. 1. Спектр поглощения флавоноидов в комплексном экстракте
Рис. 2. Спектр поглощения стандартного образца рутина
Рис. 3. Спектр поглощения плацебо
Таблица 1
Сходимость аналитической методики
|
№ анализа |
Найдено флавоноидов, % |
||
|
Прибор 1 |
Прибор 2 |
||
|
1 |
2.86 |
2.79 |
|
|
2 |
3.09 |
2.99 |
|
|
3 |
2.97 |
3.01 |
|
|
4 |
2.78 |
2.81 |
|
|
5 |
2.83 |
2.91 |
|
|
6 |
2.74 |
2.80 |
Определения прецизионности методики осуществляли согласно методике, описанной ранее.
Правильность методики подтверждали методом добавок рутина в образец экстракта и построения градуировочной кривой зависимости оптической плотности от концентрации рутина в экстракте, представленная на рисунке 4. Установлен линейный характер этой зависимости.
Метрологические характеристики разработанной методики отражены в таблице 2.
Заключение
Наиболее важными сторонами экстракции являются: тщательный выбор оптимального экстрагента и способа экстракции.
Выбран метод экстракции - ремацерация. Установлен оптимальный экстрагент (спирт этиловый 70 % с добавлением 10% метиленхлори- да). Результатом проведенных исследований является определение флавоноидов в качественном и количественном выражении. Содержание флаво- ноидов в обоих фитоэкстрактах подтверждено известными цветными реакциями. Количественный анализ, проведенный спектрофотометрически, показал, что содержание флавоноидов в пересчете на рутин в комплексном фитоэкстракте составляет 2.85±0.02 %.
Таблица 2
Метрологические характеристики методики определения содержания суммы флавоноидов в комплексном экстракте
|
n |
хср |
ДX |
S |
S2 |
S |
t (p,f) |
Р,% |
е,% |
|
|
10 |
2.850 |
0.290 |
0.205 |
0.0419 |
0.065 |
2.26 |
95.0 |
5.1 |
Рис. 4. Градуировочная зависимость для определения суммы флавоноидов в комплексном экстракте
Список литературы
1. Барнаулов О.Д. Фитотерапия больных сердечно-сосудистыми заболеваниями. СпБ.: Элби, 2002, 224 с.
2. Батырханов Ш.К., Имамбаева Т.М., Ка- римханова А.Т., Абдуллаева Г.М. // Медицина Кыргыстана. 2015. Т 1, № 4. С. 30-32.
3. Буланкин Д.Г. Дисс. канд. фарм. наук. Самара, 2011, 23 c.
4. ГОСТ 24027.2-80 Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла
5. Ковалева Н.Г. Лечение растениями. Москва, Медицина, 1972, 352 с.
6. Куркин В.А., Буланкин Д.Г. Даева Е.Д., Каденцев В.И. // Химия растительного сырья. 2012. N 2. С. 85-88.
7. Лиманова О.А., Назаренко Е.М., Штры- голь С.Ю. // Новости здравоохранения. 2002. N 3. C. 36-40.
8. Локарев А.В. Cредство, обладающее противовоспалительным, противомикробным, репаративным, а также улучшающим микроциркуляцию в тканях действием и способ его получения. / А.В. Локарев // Патент № 245698 Россия, Заявка №2010127448, приоритет 05.07.2010.Дата регистрации в Госреестре изобретений 20.08.2012
9. Локарев А.В., Огай М.А., Степанова Э.Ф., Ковтун Е.В., Чахирова А.А., Ижагаева С.Г. // Астраханский медицинский журнал. 2019. №1. С.49-53.
10. Мирахмедов Ч.М., Белова Л.В. // Вестн. дерматологии и венерологии. 1983. №7. С. 23-27.
11. Михайлов, И.В., Шретер А.И. Современные препараты из лекарственных растений. М.: Изд. Дом МСП, 1999. 336 с.
12. Огай М.А., Степанова Э.Ф., Ларионов Л.П., Петров А.Ю. // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. 2010. N 10(81). С. 85-88.
13. Огай М.А. // "Химия в технологии и медицине: материалы Всерос. научно-практической конференции. Махачкала, 2001, с. 25-26.
14. Огай М.А., Степанова Э.Ф. // Вестн. Воронеж. гос. ун-та (ВГУ). Сер.: химия, биология, фармация. 2006. №2. С. 332-333.
15. Онбыш Т.Е., Макарова Л.М., Погорелый
В.Е. // Современные наукоемкие технологии. 2005. N 5. С. 22-25.
16. Пронченко Г.Е. Лекарственные растительные средства. Под ред. А.П. Арзамасцева, И.А. Самылиной. М.: Гэотар-Мед, 2002, 288 с.
17. Степанова Э.Ф., Андреева И.Н., Жук В.В, Огай М.А. // "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы VI Международного съезда, 4-6 июля 2002 г., Санкт-Петербург, 2002, с. 114-116.
18. Огай М.А., Степанова Э.Ф., Гаврась В.В., Веретенникова М.А., Великанова Н.А.// Фитодизайн в современных условиях: материалы Международной научно-практической конференции 1417 июня 2010 г. Белгород. 2010. С. 329-331.
19. Хисматулина Д.И., Нигматьянов А.А. // Известия Оренбургского аграрного университета. Изд-во: Оренбургский государственный аграрный университет (Оренбург). № 5 (67). 2017. С. 222224.
20. Zhang C.F., Zhang S.L., He X., Yang X.L., Wu H.T., Lin B.Q., Jiang C.P., Wang J., Yu C.H., Yang Z.L., Wang C.Z., Li P., Yuan C.S. // Ethnopharmacol. 2014. V. 153 (3). P. 793-800.
Локарев, А.В. Самуйленко А.Я., Огай М.А., Ковтун Е.В., Морозов Ю.А., МакиеваМ. С., Сливкин А.И., Беленова А.С., Гаврась В.В., Нам Н.Л.
REFERENCES
1. Barnaul O. D. Phytotherapy of patients with cardiovascular diseases. SPb.: Albee, 2002, 224 c.
2. Batyrhanov Sh. K., Imambaeva T M., Karimjanova A. T., Abdullayev, G. M. // Medicine Of Kyrgyzstan, 2015, Vol. 1, no. 4, pp. 30-32.
3. Bulankin D. G. Diss. Cand. farm. sciences'. Samara, 2011, 23 p.
4. GOST 24027.2-80 medicinal plant raw Materials. Methods for determining humidity, ash content, extractive and tannins, essential oil
5. Kovaleva N. G. Treatment with plants. Moscow, Meditsina, 1972, 352 p.
6. Kurkin V. A., Bulankin D. G. Daeva E. D., Kadentsev V. I. Chemistry of plant raw materials, 2012, N 2, pp. 85-88.
7. Limanowa O. A., Nazarenko, E. M., Stryhal S. J. // health care news, 2002, N 3, pp. 36-40.
8. Locarev A.V. Means that has anti-inflammatory, antimicrobial, reparative, and also improves microcirculation in tissues and the method of its production. Patent no. 245698 Russia, Application no. 2010127448, priority 05.07.2010.Date of registration in the state register of inventions 20.08.2012
9. Lokarev A.V., Ogai M. A., Stepanova E. F., Kovtun E. V., Chakhirova A. A., Izhagaeva S. G.
Беленова А.С., Гаврась В.В., Нам Н.Л.
Astrakhan medical journal, 2019, No. 1, pp. 49-53.
10. Mirakhmedov CH. M., Belova L. V. Vestn. dermatology and venereology, 1983, No. 7, pp. 23-27.
11. Mikhailov, I. V., Schroeter A. I. Modern preparations from medicinal plants. Moscow: Ed. House of SMEs, 1999, 336 p.
12. Ogai M. A., Stepanova E. F., Larionov L. P., Petrov A. Yu. / Scientific Vedomosti BelSU. Series: Medicine. Pharmacy, 2010, N 10(81, pp. 85-88.
13. Ogai M. A. Chemistry in technology and medicine: materials vseros. scientific and practical conference. Makhachkala, 2001, pp. 25-26.
14. Ogai M. A., Stepanova E. F. Vestn. Voronezh. state University (VSU). Ser.: chemistry, biology, pharmacy, 2006, No. 2, pp. 332-333.
15. Onbis T E., Makarova L. M., Pogorelov, V. E. Modern high technologies, 2005, N 5, pp. 22-25.
16. Pronchenko G. E. Medicinal herbal remedies. Edited by A. P. Arzamastsev, I. A. Samylina. Moscow: GEOTAR-Med, 2002, 288 p.
17. Stepanova E.F., Andreeva I.N., Zhuk V.V., Ogai M. A. "Actual problems of creating new medicines of natural origin: Materials of the VI International Congress, July 4-6, 2002, St. Petersburg, 2002, pp.114-116.
18. Ogai M. A, Stepanova E.F., Gavras V.V., Veretennikova M.A., Velikonova N.A. Phytodesign in modern conditions: materials of the International scientific and practical conference 14-17 June 2010 Belgorod, 2010, pp. 329-331.
19. Khismatullina D. I., Nigmatyanov A. A. // proceedings of the Orenburg agricultural University. Publishing house: Orenburg state agrarian University (Orenburg), 2017, No. 5 (67), pp. 222-224.
20. Zhang C.F., Zhang S.L., He X., Yang X.L., Wu H.T., Lin B.Q., Jiang C.P., Wang J., Yu C.H., Yang Z.L., Wang C.Z., Li P., Yuan C.S. Ethnophar- macol. 2014, V. 153 (3), pp. 793-800. doi: 10.1016/j. jep.2014.03.046. Epub 2014 Mar 2.