Материал: Аутентичного материала

Исследованные фукоиданы демонстрируют ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. При этом отмечено, что, несмотря на больший показатель соотношения aXa/alla для фукоидана из F. evanescens, сипа и длительность антикоагулянтного эффекта для фукоидана из S. cichorioid.esвыше. Это объясняется различием в удельной антитромбиновой активности образцов (у последнего alia

146

активность вдвое больше, чем у первого) при практически одинаковых ингибиторных активностях по отношению к фактору Ха.

Полученные в экспериментах invitroи invivoрезультаты свидетельствуют, что фукоидан из F. evanescensотносится к препаратам, влияющим на систему коагуляционного гемостаза и фибринолиза как прямо, так и опосредованно. Влияние на систему фибринолиза осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы крови и связано с повышением потенциальной активности плазминовой системы.

Таким образом, исследуемые фукоиданы обладают свойствами антикоагулянтов и активаторов фибринолиза, в связи с чем имеют большие перспективы клинического применения в этом качестве.

Результаты проведенных экспериментальных исследований позволили нам разработать гипотетическую схему механизмов действия фукоидана на систему гемостаза (рис. 6.2).

Как показано на рис. 6.2, фукоидан оказывает прямое влияние на факторы внутреннего и внешнего путей свертывания, а также на конечный этап свертывания и демонстрирует ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Антикоагулянтная активность фукоидана связана с плазменным антитромбином III, который превращается из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина. Влияние фукоидана на систему фибринолиза осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы крови и связано с повышением потенциальной активности плазминовой системы.

Механизм действия фукоидана на систему гемостаза

ФУКОИДАН (прямое влияние)

Внутренний механизм свертывания крови

Внешний механизм свертывания крови

фактор Ха (протромбиназа) (ингибирование активности)

фактор На (тромбин) (ингибирование активности)



антитромбин III (AT-IH) (превращение AT-III из медленнодействующего в быстродействующий ингибитор тромбина)

Антикоагулянтная активность, коррекция нарушений гемостаза, купирование явлений ДВС-синдрома

Рис. 6.2. Гипотетическая схема механизма действия фукоидана на систему гемостаза

147

Глава 7. Коррекция атерогенных дислипидемий полисахаридами морских водорослей

Смертность и инвалидизация от заболеваний органов кровообращения занимает лидирующее положение в структуре заболеваемости и смертности не только в России, но и за рубежом. Общепризнанной причиной сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений является атеросклероз. Отягчающим фактором ряда заболеваний сердечно-сосудистой системы, в частности, атеросклероза, служит окислительный стресс, развиваюыцийся на фоне снижения уровня природных низко- и высокомолекулярных антиоксидантов в тканях. Дислипидемий и индуцированный ими оксидативный стресс являются ключевым патогенетическим звеном атеросклероза.

Сравнительно недавно основное значение в развитии атеросклероза придавали гиперхолестеринемии, но затем клинические и эпидемиологические исследования показали, что любая гиперлипидемия может способствовать возникновению и дальнейшему развитию этой болезни. В этой связи эффективность профилактических и лечебных мероприятий на всех стадиях атеросклероза во многом связана с коррекцией дислипидемий, нормализацией углеводного обмена и антиоксидантного статуса.

В настоящее время существуют разные по механизму действия медикаментозные и немедикаментозные средства, воздействующие на липиды и липидтранспортную систему крови: препараты группы ста-тинов - ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы (аторвастатин, ловастатин, правастатин), ингибиторы абсорбции холестерина (эзетимиб), анионо-обменные смолы (холестирамин, колестипол), производные фиброевой кислоты - фибраты (клофибрат, гемфиброзил, безафибрат), препараты никотиновой кислоты (ниацин, эндурацин), соединения омега-3. Постоянный или длительный прием этих препаратов замедляет процесс прогрессирования атеросклероза. Однако высокая стоимость лечения и побочные эффекты диктуют поиск альтернативных решений. Одно из таких решений — использование сульфатированных полисахаридов из природных, в том числе морских источников. Начало положили исследования липидснижающего действия гепарина, который является сульфатированным полисахаридом и оказывает гиполипидемическое действие в эксперименте. Основным механизмом действия гепарина является активация фермента липопротеидлипазы, который гидролизует богатые триглицеридами липопротеиды. Уменьшение уровня последних приводит к снижению вязкости крови, улучшению микроциркуляции, к

148

усилению транспорта кислорода в ткани, уменьшению агрегации тромбоцитов, а самое главное — способствует увеличению концентрации антиатерогенных липопротеинов высокой плотности. В то же время, выраженное антикоагулянтное действие и быстрая инактивация гепарина, а также необходимость постоянного контроля за возможностью возникновения осложнений типа остеопороза и тромбоцитопении осложняют его применение при гиперлипидемиях. В связи с этим увеличился интерес к изысканию и изучению аналогов гепарина, лишенных побочных эффектов. В работе (Рыженков и др., 1996) исследовано гиполипидемическое действие СПС — сульфатов хитозана (получены химическим путем) и сульфопроизводных крилана и лютелана. Было установлено выраженное гипотриглицеридемическое действие, а также увеличение уровня ЛПВП в сыворотке крови. Эти эффекты могут быть связаны со свойством препаратов активизировать липопротеидлипазу Известно, что существует обратная корреляция между содержанием а-холестерина и триглицеридов в сыворотке крови (Nikkila, 1978), что обусловлено активностью этого фермента. Влияние холестерина на липолитическую активность крови кроликов свидетельствует о том, что эти производные хитозана являются эффективными активаторами липолитических ферментов. Тенденцию к гипохолестеринемическому действию сульфатов полисахаридов можно объяснить снижением всасывания холестерина в кишечнике. Следует отметить, что в опытах in vitro наиболее активными были соединения с большей молекулярной массой, в эксперименте на животных большую активность проявили соединения с меньшей молекулярной массой — 20—40x10 кДа. Это объясняется, по-видимому, тем обстоятельством, что вещества с большей молекулярной массой хуже всасываются в кишечнике. Если учесть также тот факт, что токсичность изученных соединений увеличивается с увеличением молекулярной массы, а активность зависит от степени сульфатирования, что подтверждается и другими авторами, то можно считать целесообразным проведение дальнейших исследований при использовании веществ с молекулярной массой 20—40 kDa и содержанием серы 9—14%. Наличие дополнительного антиоксидантного действия у некоторых из изученных сульфатированных соединений также указывает на перспективность применения этих веществ в качестве возможных гиполипидемических средств.

Доказана эффективность включения в профилактические и лечебные комплексы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы препаратов-антиоксидантов. Действие синтетических препаратов направлено на конкретное патогенетическое звено. В отличие от синтетических при-

149

родные препараты сочетают в себе суммарные биологические эффекты, опосредованные разнообразным составом их компонентов. В связи с этим для фармакотерапии, направленной на профилактику рецидивов заболеваний сердца и их прогрессирование стали все чаще применять природные биологически активные вещества, экстракты водорослей и БАД к пище на их основе, обладающие наряду с липидкорригирующими эффектами и антиоксидантными свойствами, в частности, сульфатиро-ванные полисахариды из морских водорослей.

Экспериментальные исследования на животных и клинические наблюдения на людях доказывают, что полисахариды из морских водорослей снижают такой важный фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний как уровень холестерина в сыворотке крови. Сульфатированные полисахариды обладают комплексом благоприятных эффектов на организм человека (Запорожец, 2006), обусловленных их способностью связывать и выводить из организма экзо- и эндогенные токсические вещества и уменьшать проявления интоксикации различного генеза (Кузнецова, 2009). Сульфатированные полисахариды являются пищевыми волокнами, поэтому их можно применять практически без ограничений, не вызывая заметных нежелательных реакций.

Важным свойством пищевых волокон является их устойчивость к действию амилазы и других ферментов и поэтому в тонком кишечнике они не всасываются. Это свойство обеспечивает их своеобразное физико-химическое действие. При прохождении по кишечнику пищевые волокна формируют матрикс аморфного характера по типу "молекулярного сита", физико-химические свойства которого обусловливают водоудерживающую способность, катионообменные и адсорбционные свойства, чувствительность к бактериальной ферментации в толстой кишке. Наличие у пищевых волокон гидроксильных и карбоксильных групп способствует кроме гидратации, ионообменному набуханию. Это свойство пищевых волокон способствует ускоренному кишечному транзиту, увеличению влажности и массы фекалий и снижению напряжения кишечной стенки. В желудке под влиянием пищевых волокон замедляется эвакуация пищи, что создает более длительное чувство насыщения, ограничивает потребление высокоэнергезированной пищи и способствует снижению избыточной массы тела (Бабаян, 2011).

Механизм холестерин-снижающего действия полисахаридов обусловлен связыванием в просвете кишечника желчных кислот, обеспечивающих всасывание холестерина в кровь. В результате повышения вязкости содержимого кишечника усиливается фекальная экскреция желчных кислот. Вследствие усиленного синтеза в печени новых желч-

150

ных кислот происходит снижение уровня холестерина в крови. Кроме того, так как полисахариды слабее связывают гидрофильные желчные кислоты, в плазме увеличивается относительное содержание гидрофобных желчных кислот, которые сильнее, чем гидрофильные, ингибируют активность холестерин-7а-гидроксилазы в печени. Другое объяснение может состоять в продукции короткоцепочечных жирных кислот (про-пионовой, уксусной и масляной) при бактериальной ферментации полисахаридов. Экспериментально показано, что эти кислоты ингибируют синтез холестерина в печени. Кроме этого, хитозан, например, способен образовывать ионные комплексы с жирами, в том числе, с холестерином и ингибировать их абсорбцию и рециркуляцию из кишечника в печень (Ylitao et al., 2002).

Гиполипидемический эффект сульфатированных полисахаридов, сухих порошков из красных, бурых и зеленых водорослей, их смесей, а также экстрактов из них отмечен многими авторами (Soeda at al., 1994; Ren et al., 1994; Ara et al., 2002; Raghavendran et al., 2005; Amano et al., 2005; Yokota et al., 2009; Godard et al., 2009).

В экспериментах на животных показана способность фукоидана из водоросли S. japonicaзначительно снижать уровень ОХ, ТГ и ЛПНП и увеличивать содержание в сыворотке крови ЛПВП при гиперхоле-стеринемии и гиперлипидемии, нормализовать процессы перекисного окисления липидов, а также эффективно предотвращать формирование экспериментальной гиперхолестеринемии (Li et al., 1999, 2001, 2008). Результаты клинических испытаний фукоидана у больных с гиперли-пидемией (Li et al., 2008) также свидетельствуют о гиполипидемических свойствах данного полисахарида.

I.Dvir et al. (2009) провели сравнительное исследование эффективности биомассы красной микроводоросли Porphyrydiumsp. и выделенного из нее полисахарида у крыс с гиперлипидемией. Употребление животными в пищу биомассы водоросли (БВ) и полисахарида на 22—34% снижали ОХ, на 12—39% — ТГ и на 32—53% — ЛПНП в сыворотке крови. Коэффициент атерогенности был выше в группе животных, получавших БВ, по сравнению с контролем. Обращает на себя внимание тот факт, что у крыс, получавших полисахарид, сухой вес фекалий был больше на 3,17 г/ день, при использовании БВ — на 2,46 г/день (в контроле — 1,07 г/день). В кале крыс, получавших БВ и полисахарид, имело место повышение уровня нейтральных стиролов. Что касается желчных кислот, то они были более, чем вдвое повышены у животных, получавших БВ. У крыс опытных групп (получали биомассу водоросли и полисахарид) был значительно ниже вес печени (37,76 и 35,39 мг на грамм массы тела), чем в

151

группе контроля (42,86 мг на грамм массы тела). Кроме того, в опытных группах отмечен низкий уровень холестерина в печени (в опыте — 1,89 и 2,14 мг на г массы печени, в контроле — 3,89 мг/г массы печени). Все эти показатели свидетельствуют о терапевтическом эффекте БВ и ПС, полученного из нее, и перспективности применения этих биопрепаратов при различных хронических заболеваниях печени, таких, как жировая дистрофия и пр. Близкие результаты получены и другими авторами (Ага et al., 2002; Pengzhan et al., 2003; Werman et al., 2003; Amano et al., 2005). У животных, получавших биопрепараты и имевших высокий показатель ОХ, было обнаружено повышение HMG-CoA редуктазы — ключевого фермента в продукции эндогенного холестерина. Такие результаты были получены при содержании в рационе 5—10% БВ или полисахарида.

Механизм действия БВ и полисахаридов могут быть различными благодаря их уникальным, но различным физико-химическим свойствам (вязкости, растворимости, электрическому заряду и пр.) (Geresh, Arad, 1991; Eteshola et al., 1998; Arad, Richmond, 2004; Arad et al., 2006). Биомасса водоросли содержит, в основном, нерастворимые волокна, в то время, как большая часть волокон в полисахаридах — растворимые.

Фукоидан из водоросли Е vesiculosisповышал секрецию липопро-теинлипазы в культуре адипоцитов. При этом его уровень зависел от времени воздействия и дозы полисахарида (Yokota et al, 2009). Этот фермент, относящийся к классу липаз, расщепляет триглицериды самых крупных по размеру и богатых липидами липопротеинов плазмы крови — хиломикронов и ЛПОНП. Липопротеинлипаза регулирует уровень липидов в крови, что определяет ее важное значение при атеросклерозе. Фермент синтезируется в адипоцитах, клетках сердечной и скелетной мышц и некоторых других тканях и имеет центр связывания липопротеинов и каталитический центр для гидролиза жиров. Гидролиз активируется аполипопротеином С-П, который содержится в хиломикронах ЛОНП. Таким образом, гидролиз жиров происходит в комплексе, включающем липопротеин, липопротеинлипазу и внутреннюю поверхность капилляра. Жирные кислоты, образующиеся в результате гидролиза жиров, с помощью этого комплекса поступают в клетки, питаемые данным капилляром (в адипоциты — в жировой ткани, в миоциты — в мышечной ткани и т.д.).

Хиломикроны, циркулирующие в крови, в результате контактов с ЛПЛ постепенно освобождаются от триацилглицеринов и превращаются в остаточные хиломикроны, которые содержат очень мало триацилглицеринов и много холестерина. Остаточные хиломикроны (а частично и цельные) поглощаются клетками печени. Такой же путь превращений

152

проходит примерно половина ЛОНП. Другая половина ЛОНП в крови превращается в ЛПНП, которые поглощаются как гепатоцитами, так и многими другими клетками.

Установлено, что фукоидан индуцирует секрецию кофактора липопро-теинлипазы, аполипопротеина С-П (АроС-П). В клетках, обработанных фукоиданом, экспрессия гена этого фермента повышалась в зависимости от времени воздействия, количество его также увеличивалось. Обработка адипоцитов одновременно гепарином и фукоиданом не повышала показателей ЛПЛ по сравнению с одним гепарином. Таким образом, фукоидан действует в этом случае подобно гепарину, освобождая липопротеинлипазу, повышая внутриклеточный транспорт и снижая деградацию фермента в среде. Секреция липопротеинлипазы и АроС-II, индуцированная фукоиданом, может обусловливать регуляцию ТГ в плазме крови (Yokota et al., 2009).

Фукоидан повышал активность не только ЛПЛ, но также печеночного липопротеина и лецитин-холестерол-ацилтрансферазы (ЛХАТ) — фермента, превращающего свободный холестерин ЛПВП в эфиры холестерина, являющиеся его более гидрофобной формой. В силу высокой гидрофобности холестерин, превращенный в эфиры холестерина, перемещается с поверхности липопротеина в ядро. Освобождая место на поверхности частицы для захвата нового свободного холестерина, эта реакция является чрезвычайно важной для процесса очищения периферических тканей от холестерина (обратного транспорта холестерина). Таким образом, фукоидан способен регулировать дислипидемию, вероятно, путем ограничения абсорбции липидов (ОХС и желчных кислот), активировать метаболические ферменты (ЛП, HL, ЛХАТ) и повышать экспрессию рецепторов ЛПНП на клетках печени.

Сульфатированные полисахариды и экстракты водоросли Ulvalatucaобеспечивали энзиматическую (каталаза, глутатионпероксидаза, су-пероксиддисмутаза) и неэнзиматическую антиоксидантную защиту у крыс с гиперхолестеринемией. При этом у животных, получавших полисахариды, снижался уровень общих липидов (-61%), ОХ (-49,6%), ТГ (-66%), ЛПНП (-93%) по сравнению с контрольными животными. Использование экстракта водоросли значительно увеличивало уровень ЛПВП в сыворотке крови (+180%). Кроме того экстракт значительно снижал атерогенный индекс — в такой же степени, как аторвастатин (-94% и -92,4% соответственно) по сравнению с контролем (животные с гиперхолестеринемией). Следует отметить и еще одну немаловажную деталь. Цитозольные ферменты лактатдегидрогеназа и креатининкиназа являются диагностическими маркерами повреждения тканей. Они по-

153

падают в ток крови, когда нарушена проницаемость клеточных мембран. Повышение уровня этих ферментов в сыворотках крыс с гиперхолесте-ринемией отражает, таким образом, нарушение целостности мембран клеток и/или их проницаемости. У животных, получавших экстракт водоросли, полисахарид или аторвастатин уровень этих маркеров снижается в сыворотке крови, что свидетельствует, скорее всего, о стабилизации мембран клеток и ограничении выхода ферментов из них.

Фукоиданы, полученные из бурых водорослей, и фуканы, выделенные из морских иглокожих, способны оказывать профилактический и лечебный эффект при экспериментальном жировом гепатозе у крыс (Wu et al., 2011), поскольку они значительно снижают уровень триглицеридов в печени, а также ОХ в сыворотке крови (р<2>0,01). Такие результаты свидетельствуют о том, что фуканы как из бурых водорослей, так и из морских беспозвоночных могут быть перспективными кандидатами для разработки средств коррекции липидного обмена при этой болезни.

Хороший липидснижающий эффект на крысах с гиперлипидемией получен при совместном использовании сухого порошка водоросли Undariapinnatifidaи рыбного жира (Murata et al., 2002), которые действуют на организм синергично. Это касалось как ТГ сыворотки крови, так и глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы. Биомасса водоросли в сочетании с рыбным жиром оказывает действие на (3-окисление жирных кислот в печени, что определялось по активности 3-гидрокси-ацил-СоА-дегидрогеназы. В опыте увеличение составило 381%.

Повышение уровня липопротеинлипазы и лецитин-холестерол-ацил-трансферазы при использовании для лечения крыс с с гиперлипидемией фукоидана из Saccharinajaponicaописано в работе (Huang et al., 2010). Этот же полисахарид снижал уровень ОХ и ТГ в сыворотке крови.

В работе (Inoue et al.,2009) сделана попытка объяснить механизм ли-пидснижающего действия порфирана — СПС из красной водоросли. Известно, что для процесса метаболизма липидов требуется ряд белков с различными функциями. Эти белки с их генами также являются компонентами системы метаболизма липидов. ЛПНП переносят 60—70% всего холестерина крови. Они содержат один апобелок — аполипопротеин В100 (Апо-ВЮО). Это единственный белок в составе самого атероген-ного липопротеина — ЛПНП, ЛПОНП и хиломикронов. Повышенная концентрация Апо-В при нормальном уровне липидов является сильным предиктором развития ИБС, особенно у лиц моложе 40 лет (Hidari et al., 2001). Установлено, что порфиран значительно снижает уровень Апо-В в сыворотке крови. Эти результаты проливают свет на механизм липидснижающего действия порфирана, обусловленный его влиянием

154

на синтез Апо-ВЮО.

Как известно, ожирение является хроническим нарушением метаболизма липидов, причина которого — отсутствие равновесия между потребляемой и расходуемой энергией. Ожирение — фактор риска многих хронических болезней и метаболического синдрома. В целом, ожирение ассоциируется со степенью дифференцировки адипоцитов, накоплением внутриклеточных липидов и липолизом (Shi, Burn, 2004).

Сульфатированные полисахариды, в частности, фукоидан, могут подавлять накопление жира путем снижения уровня экспрессии генов аР2, Асе и ЗЗФКу (Kim et al., 2009). Фукоидан ингибирует диф-ференцировку адипоцитов, доказательством чего является снижение накопления в них жира, и регуляция экспрессии маркеров адипоцитов через МАРК сигнальный путь.

В 2011 году появилось сообщение М.К. Park et al. об ингибирующем эффекте фукоидана на аккумуляцию липидов путем регуляции уровня гормончувствительной липазы (HSL), которая является ограничивающим ферментом, обеспечивающим гидролиз ТГ жирных кислот. Накопление липидов под действием фукоидана снижалось на 16,5% при дозе фукоидана 100 мкг/мл и на 52,2% — при дозе 200 мкг/ мл. Одновременно было отмечено снижение уровня ТГ в адипоцитах на 86% по сравнению с контролем. При использовании фукоидана в дозе 200 мкг/мл уровень HSL и pHSL возрастал в 1,47 и 1,59 раза соответственно по сравнению с контрольными показателями. Эти исследования свидетельствуют о том, что фукоидан может индуцировать липолиз в адипоцитах путем усиления синтеза HSL и pHSL. Эти же авторы при использовании меченой глюкозы установили, что фукоидан ингибирует накопление липидов и путем снижения уровня глюкозы.

Проведены исследования влияния молекулярной массы полисахаридов на проявление их липидснижающего действия (Pengzhan et al., 2003). В экспериментах на крысах с гиперлипидемией были использованы фракции ульвана — СПС из зеленой водоросли Ulvapertusa — U1 и U2. Молекулярная масса варьировала от 15,6 до 28,2 кДа. Высокомолекулярный ульван был более эффективен в снижении в сыворотке крови ОХ (-45%) и ЛПНП (-54,1%), низкомолекулярный - в повышении ЛПВП (+61%) и снижении ТГ (-82,4%). Авторы рекомендуют использовать обе фракции у пациентов с гиперлипидемией и диабетом.

Полисахарид из красной водоросли снижал в сыворотке крови уровень общих липидов, ОХ, ТГ и ЛПНП на 48%, 49,6%, 63% и 80,6% соответственно. Уровень ЛПВП возрастал в 1,14 раза по сравнению с животными, не получавшими полисахарида. Полисахарид из бурой водоросли снижал

155

общие липиды, ОХ, ТГИ и ЛПНП на 25,5%, 49%, 51% и 91% соответственно. Уровень ЛПВП возрастал в 1,5% раза по сравнению с контролем. В группе крыс с гиперхолестеринемией наблюдалось значительное повышение уровня АЛТ и ACT в сыворотках крови. Употребление экстрактов водорослей A. spicifera, С. trinodeи аторвастатина снижало концентрацию этих ферментов. Пероральное применение экстракта A. spiciferaповышало активность щелочной фосфатазы, а экстракт С. trinodeи аторвастатин обусловили значительное снижение уровня этого фермента на 3% и 52,6% соответственно по сравнению с контролем.

Добавление в корм крыс с экспериментальной гиперхолестеринемией биомассы различных водорослей (красных, бурых, зеленых) в количестве 5% (Matanjun et al., 2010) приводило к снижению веса тела животных. При этом снижался ОХ (-11,4%-18,5%), ЛПНП (-22%-49%) и ТГ (-33,7%-36,1%). Значительно повышались ЛПВП (1б,3%-55%). Уровень изменений показателей зависел от вида водоросли. Так, биомасса водоросли K.alvarezii показала более выраженное, чем другие гиполипидемическое действие и антиоксидантную активность, а биомасса C.lintilifera — более значительно снижала ОХ. Общим для всех водорослей было снижение массы тела животных, глутатионпероксидазы эритроцитов и перекис-ного окисления липидов.

Снижение ЛПНП под действием полисахаридов обусловлено, по-видимому, антиоксидантными свойствами этих соединений, которые способны ингибировать пероксидацию ЛПНП (Chang-Hu et al., 2001). Сульфатные компоненты экстрактов водорослей уменьшают чрезмерное накопление ТГ (Dianzani, 1978). Кроме того, сульфатированные полисахариды снижают абсорбцию холестерина в кишечнике. Гистологическая картина печени животных первой контрольной группы (интактные крысы), была обычной, в то время как у крыс с гиперхолестеринемией имели место воспалительные изменения вокруг портальной триады с пестрой микровезикулярной жировой дегенерацией. У животных, получавших полисахариды из A. spiciferaи С. trinode, отмечалась нормализация картины органа, почти такая, как в контроле.

Несколько иные данные сообщались ранее (Wong et al., 1999). Речь в этой работе идет об экстрактах других водорослей — E.cava, Colpomeniasinuosaи Sargassumhemiphyllum. Эти биологически активные продукты не снижали ОХ сыворотки крови крыс с гиперхолестеринемией, а, наоборот повышали эндогенный синтез холестерина в печени.

Такие разноплановые результаты свидетельствуют о том, что для разработки лекарственных препаратов и БАД на основе морских водорослей необходимы тщательные доклинические исследования и всесторонний

156

сравнительный анализ полученных материалов.

Липидснижающее действие каррагинана установлено при включении его в рацион питания 20 человек добровольцев (Panlasigui et al., 2003). Каждая фаза в контроле и опыте продолжалась 8 недель с перерывом в две недели. Пациенты контрольной группы ПС не получали. Кровь у пациентов брали до начала опыта и после каждой его фазы. Применение каррагинана позволило снизить ОХС с 5,44 ммоль/л до 3,64 ммоль/л, а ТГ - с 1,28 ммоль/л до 0,87 ммоль/л. Уровень ЛПВП у пациентов опытной группы вырос с 1,25 ммоль/л до 1,65 ммоль/л. Содержание в сыворотке крови ЛПНП отличалось у пациентов обеих групп незначительно (в контроле — 3,25±1,9б ммоль/л, в опыте - 3,07±1,64 ммоль/л). У пациентов опытной группы несколько снизился вес тела (60,33± 12,06 кг против 61,11±12,33 кг). Снижение веса пациентов под действием каррагинана авторы объясняют действием этого полисахарида как источника пищевых волокон, которые связывают желчные кислоты и холестерин в тонком кишечнике, что приводит к стимуляции образования их в печени за счет деградации холестерина, поступающего сюда в виде атерогенных липопротеидов (Li et al.,2008). В свою очередь, снижение уровня общего холестерина и ЛПНП в крови способствует поступлению в нее холестерина из тканей, в том числе из артерий (Пискун и др., 1998). Снижение веса пациентов опытной группы коррелировало с положительной динамикой липидного профиля сыворотки крови. Близкие результаты получены другими авторами (Dattilo, Khris- Etherton, 1992; Andersen et al., 1995).

Уровень сывороточного холестерина может изменяться в зависимости от объема и плотности пищи, что имеет большое значение для скорости переваривания пищи и абсорбции нутриентов. Пищевые волокна обеспечивают объем, так как они не перевариваются и транзитом проходят через тонкий кишечник. Следует иметь в виду, что каррагинаны хорошо поглощают воду и тем самым еще больше увеличивают свой объем и вязкость содержимого кишечника, что также влияет на количество всосавшегося холестерина.

Многочисленные экспериментальные, клинические и эпидемиологические данные убедительно свидетельствуют о ключевой роли дисли-попротеинемий (ДЛП) в патогенезе атеросклероза и его клинических проявлений. Перспективные клинические исследования показали, что профилактика ДЛП у лиц из группы риска ишемической болезнью сердца (ИБС) и их лечение у больных ИБС замедляет рост атеросклеротических бляшек и даже вызывает их регрессию. Назначение липидснижающих препаратов является одним из основных принципов терапии ИБС, поскольку они улучшают выживаемость пациентов и отдаленный прогноз,

157

а также снижают риск развития сосудистых катастроф. Из лекарств, нормализующих липидный спектр крови, наиболее эффективными препаратами, имеющими огромную доказательную базу, являются статины. Поэтому именно они составляют основу лечения ИБС в плане коррекции нарушений липидного обмена. Внедрение статинов (аторвастатина, ловастина, правастина и др.), в первую очередь, связано с тем, что они способны угнетать активность ключевого фермента синтеза холестерина (ХС) в печени — 3-гидрокси-З-метилглутарил-КоА-редуктазы (ГМГ-КоА-редуктаза, КФ 1.1.1.34). Торможение синтеза ХС в печени ведет к уменьшению ХС в липопротеинах очень низкой плотности (ЛПОНП) и, далее, к снижению ХС в липопротеинах низкой плотности (ЛПНП). Это способствует увеличению рецепторного захвата ЛПНП клетками из циркулирующей крови, активизирует метаболизм хиломикронов, снижает его уровень в плазме. Положительное влияние статинов связано также и с дополнительными, так называемыми, плейотропными эффектами: сосудорасширяющее действие, улучшение функции эндотелия, стабилизация атеросклеротических бляшек, противовоспалительный эффект (Липовецкий, 2004; Гуревич, 2003). По данным Европейского исследования EUROASPIRE, в котором ведется наблюдение за динамикой факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, в Европе назначение статинов за последнее десятилетие возросло с 32,2% до 88,8%. Многочисленными исследованиями установлено, что большинство лекарственных препаратов, используемых для профилактики и лечения атеросклероза, обладают неблагоприятными побочными эффектами, особенно на метаболическую функцию печени, что затрудняет их применение и обусловливает все возрастающий интерес к немедикаментозным гипо-липидемическим средствам.

Авторами настоящего раздела работы проведена оценка влияния БАД «Фуколам» на липидный спектр крови пациентов с ИБС (стабильная стенокардия П-Ш функционального класса - ИБС II - III ФК). Методом случайной выборки проведено проспективное рандомизированое исследование показателей липидного обмена у 40 пациентов с ИБС II - III ФК, находящихся на лечении в терапевтическом отделении МО ДВО РАН и 20 пациентов контрольной группы (практически здоровые) в возрасте 45-60 лет. Все обследуемые пациенты были разделены на 2 группы: 1 группа — контроль (здоровые), 2 группа — больные ИБС, 2а группа — пациенты получали базисную терапию (БТ) (10 мг аторвастатина) и «Фуколам», 2б группа — пациенты получали БТ (без аторвастатина) и «Фуколам». Базисная терапия включала препараты калия, селективные бета-блокаторы, антагонисты кальция, аспирин, статины (по назначе-

158

нию). Лечение сердечной недостаточности проводили традиционными методами без каких-либо ограничений. Пациенты, отказавшиеся принимать статины или имеющие противопоказания (группа 26), получали БАД «Фуколам» по 1 капсуле (500 мг) 1 раз в день. После проведенного курса лечения в стационаре больные были выписаны домой и в зависимости от проведенного лечения, было рекомендовано продолжать прием этих препаратов до б месяцев от начала лечения.

Протокол исследования был утвержден Комитетом по биомедицинской этике МО ДВО РАН. Пациентов принимали в группу после подписания информированного согласия на участие в исследовании. Клинико-лабо-раторное обследование пациенты проходили до начала лечения, после лечения, в динамике приема препаратов (через 1, 3, б месяцев) после начала лечения. Всем пациентам проводили анализ крови на липидный спектр: общий холестерин (ХС общий), холестерин липопротеинов высокой, очень низкой и низкой плотности (ХС-ЛПВП, ХС-ЛПОНП, ХС-ЛПНП), триглицериды (ТГ), коэффициент атерогенности (КА). Также исследовали величины аполипопротеинов: А (апо А), В (апо В) и липо-протеин (а) — ЛП (а). Знание метаболизма липидов и липопротеинов в норме позволяет лучше представлять механизмы тех нарушений, которые лежат в основе наиболее часто встречающихся дислипопротеинемий, и более целенаправленно проводить коррекцию этих нарушений. Для понимания механизма было проведено исследование методом микротонкослойной хроматографии (ТСХ) липидных составляющих липопротеинов (нейтральные липиды и фосфолипиды), которые отражают глубину нарушений липидного обмена.

Липидный состав плазмы крови больных ИБС до лечения

Клинико-биохимические показатели плазмы крови больных ИБС и их сравнение с таковыми показателями у здоровых лиц представлены в таблице 7.1. У больных в плазме крови отмечается снижение количества общих фосфолипидов на 15% (р<0,05) и увеличение общего холестерина на 51% (р<0,001). Следует отметить, что величина апо А (апопротеин ЛПВП) была ниже контрольного значения на 14% (р<0,01), а апо В (апопротеин ЛПНП) превышало таковой на 31% (р<0,001). При этом уровень ХС ЛПНП был выше контроля на 63% (р<0,001), а ХС ЛПОНП на 21%. Следовательно, повышение ХС происходило за счёт его атерогенных фракций. Следует заметить, что величина ХС ЛПВП была выше показателей контроля и находилась в пределах норм метода.

159

Таблица 7.1 Биохимические показатели крови больных ИБС и здоровых лиц (М±т)

Показатели	Контроль	Больные ИБС до лечения	% изменений от контроля
Общие ФЛ (%)	4,00±0,23	3,40±0,211	-15
апо А (мг/дл)	154,6±5,7	132,78±4,802	-14
апо В (мг/дл)	117,2±6,0	153,28±6,813	+31
апо В/апо А	0,75±0,02	1,07±0,02	+43
ЛП (а) (мг/дл)	23,33±1,75	70,70±16,723	+203
ХС общий (моль/л)	4,31+0,19	6,49±0,263	+51
ХС ЛПОНП (ммоль/л)	0,57±0,04	0,69±0,09	+21
ХС ЛПНП (моль/л)	2,60±0,15	4,25±0,173	+63
ХС ЛПВП (моль/л)	1,17±0,05	1,47±0,15	+26
Коэффициент атерогенности	2,66±0,10	3,74±0,481	+41

Обращает на себя внимание превышение значения ЛП(а) в 3,03 раза. Расчет коэффициента соотношения апо В/апо А показал его увеличение на 43% (р<0,01), а коэффициента атерогенности на 41% (р<0,05).

Нейтральные липиды. В составе нейтральных липидов плазмы крови определено 5 фракций (рис. 7.1): триглицериды (ТГ), свободные жир-

—---■
5
4	•
•	-
1 *• •
• •
А Б В	Г Д

Рис. 7.1. Хроматограмма нейтральных липидов экстракта из плазмы крови. Система растворителей: петролейный эфир : серный эфир : уксусная кислота (90 : 10 : 1 по объему). Условные обозначения: 1 — холестерин, 2 — свободные жирные кислоты, 3 — триглицериды, 4 — эфиры жирных кислот, 5 — эфиры холестерина. А — липидный экстракт из плазмы крови, Б — стандарт холестерина, В — стандарт стеариновой кислоты, Г — стандарт тристеарата, Д — стандарт метиловых эфиров жирных кислот

160

ные кислоты (СЖК), эфиры жирных кислот (ЭЖК), холестерин (ХС) и эфиры холестерина (ЭХС).

На рисунке 7.2 представлены изменения фракций нейтральных липидов в плазме крови у больных ИБС по сравнению с контрольными показателями.

=; о о.

I-

X

о

X X 01 X О)

т

X

^9

15 1

10

5 ■

-10

ТГ

ХС

**"*

эхе

СЖК

ЭЖК

Рис. 7.2. Изменения в содержании липидных фракций в плазме крови больных ИБС.

*-р<0,05;***-р<0,001

Как видно на рисунке 7.2, в плазме крови больных выражена гипер-триглицеринемия и гиперхолестеринемия. Так, уровень триглицеридов (ТГ) был увеличен на 13%, что составляло 18,03±0,51% по сравнению с 16,00±0,58% в контроле (р<0,05). Количество неэтерифицированного холестерина (ХС) было выше контрольного уровня на 8% (18,96±0,53% против 17,63±0,50%; р<0,05), а количество эфиров холестерина (ЭХС) увеличено на 10% (р<0,001), что составляло 31,54±0,46% по сравнению с 28,75±1,37% в контроле.

Известно, что у больных ИБС в крови наблюдается высокое содержание ЛПОНП и ЛПНП, богатых триглицеридами и холестерином (Ежов и др., 2001; Липовецкий, Чураков, 2001), то есть, отмеченная нами гипер-триглицеринемия и гиперхолестеринемия, а также низкое содержание общих фосфолипидов обусловлены именно этими факторами. Общий холестерин плазмы крови слагается из двух фракций: неэтерифицирован-ный или альфахолестерин, этерифицированный холестерин или эфиры холестерина. Эфиры холестерина в крови в норме преимущественно находятся в составе ЛПНП (до 50%) и ЛПВП (до 20%). Этерификация

161

холестерина происходит как в ЛПВП, так и в ЛПНП при участии ЛХАТ (лецитишхолестерин-ацилтрансфераза) (Никифорова, 1981; Климов, Никульчева, 1995). Тот факт, что в плазме крови обследованных нами больных ИБС отмечалось увеличение апо В, являющегося белковой частью ЛПНП, а также увеличение ХС ЛПНП и ЛПОНП, косвенно свидетельствует о высокой концентрации данной фракции липопротеинов. При этом наибольший процент от общего холестерина занимают эфиры холестерина (увеличение на 10%). Высокая концентрация холестерина в крови обусловила повышение коэффициента атерогенности.

Подтверждением этих предположений является известный факт о том, что изменения в интиме и медии артерий при развитии атеросклероза обусловлены массивным отложением этерифицированного холестерина в составе так называемых «пенистых» клеток. При этом основная масса эфиров холестерина в бляшке при атеросклерозе происходит из циркулирующих в крови ЛПНП (Esterbauer et al., 1993).

Фосфолипиды

В составе фосфолипидов плазмы крови определено 8 фракций (рис. 7.3): фосфатидилхолин (ФХ), лизофосфатидилхолин (ЛФХ), сфингоми-елин (СМ), фосфатидилэтаноламин (ФЭ), лизофосфатидилэтаноламин (ЛФЭ), фосфатидилсерин (ФС), фосфатидилинозит (ФИ), дифосфати-дилглицерин (ДФГ).

г

7 5

8

Рис. 7.3. Хроматограмма фосфолипидных фракций экстракта из плазмы крови. Системы растворителей: 1-е направление — хлороформ : метанол : аммиак (65 :25 : 5 по объему); 2-е направление — хлороформ : ацетон : метанол : уксусная кислота : вода (30 : 40 :10 : 10 : 5 по объему). Условные обозначения: 1 — дифосфатидилглицерин, 2 — фосфатидилэтаноламин, 3 — фосфатидилхолин, 4 — сфингомиелин, 5 — лизофосфатидилхолин, 6 — лизофосфатидилэтаноламин, 7 — фосфатидилинозит, 8 — фосфатидилсерин

162

Сравнительный анализ величин фосфолипидных фракций плазмы крови больных ИБС (рис. 7.4) с таковыми в контроле показал, что среди холиносодержащих фракций отмечалось снижение количества фосфа-тидилхолина (ФХ) на 12% (40,55±0,63% против 46,14±0,76% в контроле; р<0,001) при одновременном увеличении лизофосфатидилхолина (ЛФХ) на 37% (15,07±0,42% против 11,00±0,32% в контроле; р<0,001) и сфинго-миелина (СМ) на 18% (15,37±0,22% против 13,00±0,49%; р<0,001).