Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

Патогенные свойства иерсиний обоих видов, как и возбудителя чумы, во многом определяются наличием у них плазмид с молекулярной массой 42-48 МД и 82 МД. Плазмиды контролируют такие свойства возбудителей, как зависимость роста от наличия в среде кальция, способность синтезировать антигены вирулентности (v-w), пили адгезии, способность вызывать кератоконъюнктивит у морской свинки и т.п.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает использование бактериологического метода и серологических реакций.

При бактериологическом методе исследуемый материал от больных (испражнения, кровь, слизь из зева), а также подозрительные продукты или воду засевают на среды Эндо, Плоскирева, Серова (индикаторную и дифференциальную) и инкубируют при 37°C в течение 48-72 часов.

Подозрительные колонии (мелкие бесцветные на средах Эндо и Плоскирева и окрашенные колонии двух различных форм на средах Серова) пересевают для получения чистых культур, которые идентифицируют по биохимическим признакам и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирующих сывороток.

Для серологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза используют развернутую реакцию агглютинации (по типу реакции Видаля) с соответствующими диагностикумами или реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Положительными считают реакции при титре антител 1:400 и выше. Реакции рекомендуется ставить с парными сыворотками (с интервалом в несколько дней). Нарастание титра антител будет свидетельствовать о специфичности инфекционного процесса.

Б. Дифференциальные признаки биоваров Y. рestis

В. Отечественная классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)

Г. Особенности генетического контроля факторов патогенности у возбудителя чумы

Контроль наиболее важных факторов патогенности возбудителя чумы осуществляется плазмидами, на которых локализованы гены вирулентности. Известны три плазмиды, контролирующие важнейшие факторы патогенности возбудителя: рYР (м.м.6 МД); рYТ

(м.м. 60 МД) и рYV (м.м. 47 МД).

Плазмида рYР (6 МД) несет гены, определяющие синтез пестицина. фибринолизина и плазмокоагулазы.

8

Плазмида рYТ (60 МД) несет детерминанты, контролирующие синтез антигена фракции I и "мышиного" токсина.

Плазмида рYV (47 МД) ответственна за синтез антигенов v и w и термоиндуцибель-

ных белков внешней мембраны, а также зависимость роста чумной палочки от наличия в среде ионов Са++.

Д. Основные различия между возбудителями чумы, псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

Е. Географические разновидности туляремийных бактерий

Ж. Ландшафтные типы природных очагов туляремии

Пойменно-болотный, луго-полевой, степной, лесной, предгорно-ручьевой, тугайный (пойменно-пустынный) и тундровый.

9

З А Н Я Т И Е 2

Дата ______________

Тема: ООИ. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

и сибирской язвы

План занятия:

1.Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл.

2.Бактериологическая диагностика бруцеллеза. Выделение гемокультуры (разбор).

3.Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта. Регистрация результатов реакции Райта.

4.Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза – реакция Хеддлъсона и др.

5.Аллергическая диагностика бруцеллеза. Постановка пробы Бюрне (разбор).

6.Знакомство с препаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза (диагностикумы, бруцеллин, профилактические и лечебная вакцины).

7.Возбудитель сибирской язвы. Изучение морфологических и культуральных свойств. Приготовление и микроскопия мазков из чистой культуры авирулентной сибиреязвенной палочки.

8.Знакомство с иммунопрепаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения сибирской язвы (антраксин, вакцины, сыворотки).

Методические указания

1. Приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать препарат из убитой культуры бруцелл. Обратить внимание на размеры микроорганизмов.

3. Поставить реакцию Райта с сывороткой больного бруцеллезом по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200.

Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на наличие заболевания бруцеллезом у данного больного?

Регистрация результатов реакции Райта

Вывод: ______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

4. На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипеткой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

10

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положительная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

Регистрация результатов реакции Хеддльсона

Заключение __________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

5. Реакция Бюрне. Техника постановки реакции:

а) стерильным тампоном, смоченным спиртом, тщательно дезинфицируют кожу на границе верхней и средней трети передней поверхности предплечья;

б) в шприц с делениями по 0,1 мл и о тонкой иглой набирают бруцеллин (обратить внимание на внешний вид, данные этикетки и срок годности препарата!);

в) держа шприц по возможности параллельно поверхности кожи, вводят иглу внутрикожно. Для этого необходимо держать иглу срезом вверх и толчкообразными движениями насаживать на нее кожу. Когда срез иглы скроется в коже, иглу поворачивают срезом вниз и, осторожно нажимая на поршень, вводят содержимое шприца в кожу (0,1 мл бруцеллина). На месте инъекции должен образоваться небольшой белый волдырь, указывающий на правильное введение препарата;

г) реакцию учитывают дважды: через 24 и 48 часов. В случае положительной реакции (наличие отека и гиперемии) миллиметровой линейкой измеряют размер отека (длина

иширина).

7.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм СТИ).

Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать препарат из культуры авирулентного штамма сибиреязвенной палочки.

11

Методы микробиологической диагностики бруцеллеза

А. Бактериологический

Б. Биологический

Материал: загрязненный или с низким содержанием бруцелл

Вводится морской свинке по 1,0 мл подкожно

в паховую область

В. Серологический

Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1.Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2.Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3.Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют

12