Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

С какой целью используется реакция препитации в агаре в вирусологии? Как определяется цитопатическое действие вируса полиомиелита? Дайте общую характеристику ротавирусов.

Какие микробиологические методы применяются для диагностики ротавирусной инфекции?

Дайте общую характеристику калицивирусов.

Какие микробиологические методы применяются для диагностики калицивирусной инфекции?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики бешенства? Чем отличаются фиксированный и уличный вирусы бешенства?

Каковы основные свойства вируса клещевого энцефалита?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики клещевого энцефалита?

Методы микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций А. Вирусологический

Поскольку вирусы Коксаки и ЕСНО могут вызывать полиомиелитоподобные заболевания, исследование ведется с целью возможного выделения любого из вариантов энтеровирусов, для чего вирус выделяется параллельно на культурах ткани и заражением однодневных мышей.

Материал: испражнения, иногда спинномозговая жидкость, слизь из зева, кровь.

Из испражнений готовят суспензию, центрифугируют, надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками

Заражение культуры ткани

Заражение 1-дневных мышей (для обнаружения вирусов Коксаки А и В

Цитопатический эффект и образование бляшек (вирусы Коксаки часто не вызывают цитопатического эффекта).

Титрование выделенных вирусов с помощью реакции нейтрализации на культуре ткани с сыворотками против вирусов полиомиелита, вирусов Коксаки А и В, вирусов EСНО. При совпадении типов вируса и сыворотки отмечается рост культуры, изменение цвета среды и отсутствие бляшек.

Параличи и смерть наступают в присутствии вирусов Коксаки А и В.

Вирусы Коксаки А через 3-5 дней вызывают вялые параличи мышц с ценкеровским некрозом.

78

Вирусы Коксаки В через 6-8 дней вызывают некроз бурого жира в межлопаточной области и спастические параличи в результате поражения центральной нервной системы.

Б. Серологический

Обнаружение нарастания антител в парных сыворотках крови больных к выделенным вирусам ECHO производят с помощью РТГА, к вирусам Коксаки - по реакции нейтрализации и цветной пробе, к вирусам полиомиелита - по реакциям нейтрализации, преципитации и РСК.

Дифференциальные признаки энтеровирусов

Методы микробиологической диагностики бешенства

А. Вирусоскопический

Материал: ткань аммонова рога, мозжечка, продолговатого мозга

79

Микроскопия мазков-отпечатков или мазков, приготовленных из эмульсии мозга и окрашенных по Манну (Туревичу, Муромцеву), на наличие телец Бабеша-Негри (рубинового цвета). При наличии флуоресцирующих антител применяют метод люминесцентной микроскопии.

Б. Биологический

Материал: мозговая ткань, слюна животных.

Внутримозговое заражение белых мышей.

При наличии вируса бешенства мышь через 7-9 дней заболевают и гибнут.

При микроскопии мазков из мозговой ткани обнаруживают внутриклеточные включения Бабеша-Негри.

Методы микробиологической диагностики клещевого энцефалита

Материал: кровь, спинномозговая жидкость, секционный материал (ткань головного мозга).

80

В. Серологический

Материал: парные сыворотки больного для обнаружения по меньшей мере 4-кратного нарастания титра вируснейтрализующих антител

РСК РТГА Реакция нейтрализации на мышах или в культуре клеток

Приложение к ЗАНЯТИЮ 14

А. Возбудителями острых кишечных заболеваний (ОКВИ), кроме бактерий,

являются следующие вирусы:

1. Энтеровирусы – род из семейства Picornaviridae – включает 68 антигенно различающихся серотипов, в том числе:

полиовирусы: 1-3 (3 серотипа);

Коксаки А: А1-А22, А24 (23 серотипа);

Коксаки В: В1-В6 (6 серотипов);

ECHO (Enteric Cytopathogenic Human Orphans): 1-9; 11-27; 29-34 (32 серотипа);

энтеровирусы человека: 68-71 (4 серотипа).

Вирус гепатита А (бывший 72-й серотип энтеровируса) выведен из состава энтеровирусов в самостоятельный род Heparnavirus того же семества Picornaviridae.

2.Ротавирусы – род из семейства Peoviridae – 4 серотипа (по белкам VP3 и VP7).

3.Калицивирусы, в том числе вирусы группы Норволк (род Norovirus) и др.

4.Астровирусы.

5.Коронавирусы – 3-й серотип.

6.Аденовирусы – некоторые серотипы.

Б. Основные признаки энтеровирусов, по которым они объединяются в один род:

1.Вирусологические:

а) размер – 22-30 нм; б) геном – линейная однонитчатая нефрагментированная позитивная РНК;

в) устойчивость к эфиру;

г) повышение терморезистентности в присутствии ионов Mg++ и Ca++ ; д) устойчивость к желчи, кислотам, щелочам (в диапазоне рН 3,0 - 10,0); е) способность размножаться в определенных культурах клеток; ж) число капсомеров – 60; з) устойчивость во внешней среде.

2.Эпидемиологические:

а) выраженная сезонность заболеваний (лето, осень); б) фекально-оральный механизм передачи;

в) выделение вируса из кишечника, носоглотки, ликвора, крови; г) обнаружение в сточных водах; д) преимущественное поражение детей до 12 лет;

е) широкое носительство среди здоровых людей.

В. Основные свойства ротавирусов:

81

Род Rotavirus семейства Reoviridae. Родовое название происходит от латинского слова rota – колесо, так как форма вириона сходна с колесом телеги. Это обусловлено тем, что вирион имеет сферическую форму, а его геном окружен нуклеокапсидом, состоящим из двух слоев: внутренний слой плотно окружает сердцевину, имеет форму икосаэдра и соприкасается с тонким наружным слоем капсида, в результате образуется структура, напоминающая колесо: втулка, спицы и ободок. В выделениях больного обычно встречаются однокапсидные (60-65 нм) и двухкапсидные вирионы (70-75 нм). Инфекционными являются полные двухкапсидные вирионы.

Геном вириона представлен двунитевой фрагментированной РНК (11 фрагментов); в сердцевине кроме геномной РНК располагается вирионная РНК-полимераза. Суперкапсид отсутствует. В составе вириона имеется 8 белков (VP1-VP8). Особенно важным является VРЗ-белок наружного капсида. Он отвечает за проникновение вируса в клетку и его вирулентность, обладает гемагглютинирующим свойством.

Для диагностики ротавирусной инфекции предложены следующие методы: а) РПГА с применением антительного ротавирусного диагностикума; б) реакция коагглютинации; в) тест-системы для обнаружения антигена с помощью ИФМ.

Г. Основные свойства калицивирусов:

Вирионы имеют сферическую форму и диаметр 37 нм, суперкапсида нет. Геном представлен позитивной однонитевой РНК с м. м. около 2,6-2,8 МД. При негативноконтрастной микроскопии на поверхности вирионов обнаруживается 32 глубоких (около 10 нм) чашевидных вдавления, что послужило основанием дать им название калицивирусы (греч. calyx - чаша). Калицивирусы не размножаются в культурах клеток. Для диагностики в основном используют метод иммунной электронной микроскопии.

Д. Для диагностики ОКВИ могут быть использованы следующие методы:

1.Иммуноэлектронной микроскопии.

2.Иммунологические реакции: коагглютинации, преципитации в геле (различные варианты), РСК, иммунофлуоресцентный метод, иммуноферментный метод, радиоиммунный метод.

3.Биологический метод.

4.Использование ПЦР.

Е. Арбовирусы

«Арбовирусы» (лат. Arthropoda - членистоногие и англ. borne - передающийся) – вирусы, передающиеся восприимчивым позвоночным (в том числе и человеку) через укусы кровососущих членистоногих. Передача возбудителя у членистоногих из поколения в поколение может осуществляться трансовариально. Арбовирусы нетаксономическое, собирательное понятие. В настоящее время насчитывается около 400 арбовирусов, относящихся в основном к семействам тогавирусов, флавивирусов, буньявирусов, аренавирусов, реовирусов, рабдовирусов. Для человека патогенны около 100 из них. Природные очаги арбовирусных инфекций встречаются во всех районах земного шара, но чаще в тропических дождевых лесных зонах из-за обилия видов теплокровных животных и членистоногих. В России встречаются лишь некоторые из арбовирусных инфекций.

Заболевания, вызываемые арбовирусами, могут проявляться в виде трех клинических синдромов:

1.лихорадки недифференцированного типа, часто называемой «денгеподобной», с наличием мелкопятнистой сыпи или без нее и с относительно легким течением;

2.геморрагической лихорадки, часто с тяжелым течением и летальным исходом;

3.энцефалита, нередко с летальным исходом.

Деление это весьма условно, так как один и тот же возбудитель может вызывать заболевание с преобладанием тех или иных симптомов и различной тяжестью течения.

82