Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР
Мазок из гноя |
Мазок из зева |
Методы микробиологической диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций
А. Бактериологический
Материал из зева, носа, отделяемое ран, кровь, гной
Сахарный МПБ
Желточно-молочно-солевой |
Кровяной МПА |
|
агар |
||
|
Стафилококк |
Окраска по Граму |
Стрептококк |
|||||
|
МПА |
|
|
Сахарный, кровяной МПА, |
|||
|
|
|
|
|
сахарный МПБ |
||
|
|
|
|
|
Чувстви- |
Реакция агглюти- |
|
Реакция |
|
|
|
|
нации и преципи- |
||
|
Гемолиз эрит- |
Отношение к типовым |
тельность к |
||||
плазмокоагуля- |
тации с группо- |
||||||
|
роцитов |
стафилококковым фагам |
антибиоти- |
||||
ции |
|
|
выми и типовыми |
||||
|
|
|
|
кам |
|||
|
|
|
|
|
сыворотками |
||
|
|
|
|
|
|
||
18
Б. Серологический (чаще всего – в диагностике ревматизма)
1.Определение анти-O-стрептолизина.
2.Определение антигиалуронидазы.
Контрольные вопросы
Чем отличается морфология стафилококков на плотных и жидких питательных средах? Каков характер роста стафилококков на жидких и плотных питательных средах? Какова классификация стафилококков? Какие заболевания вызывают стафилококки? Какой материал берут от больных при различных стафилококк; заболеваниях и как его доставляют в лабораторию?
Какие микробиологические методы используют для диагностики заболеваний, вызываемых гноеродными кокками?
Как производят бактериологическое исследование гноя при стафилококковых заболеваниях?
Как производят выделение гемокультуры при стафилококковом сепсисе?
По каким признакам определяют патогенность выделенной культуры стафилококка? Как определяют наличие у стафилококка плазмокоагулазы?
Какие токсины образует стафилококк и как они обнаруживаются?
Какова морфология стрептококков? Чем отличается их морфология на жидких и плотных питательных средах?
Какова классификация стрептококков по характеру роста на кровяном МПА? Каково антигенное строение стрептококков?
Какие серологические классификации стрептококков существуют и на чем они основаны? Как производят определение групп и типов стрептококков?
Какие заболевания вызывают стрептококки?
Какой материал берут от больных при различных стрептококковых заболеваниях и как его доставляют в лабораторию?
Как производят бактериологическое исследование при различных стрептококковых заболеваниях?
Какие питательные среда применяются для выращивания стрептококков?
Каковы особенности роста стрептококков на жидких и плотных питательных средах? Какое значение имеет определение титров анти-O-стрептолизина и антигиалуронидазы? Каковы отличительные признаки энтерококков?
Какое значение имеет М-антиген стрептококков?
Приложение к ЗАНЯТИЮ 3
А. Критерии патогенности стафилококков
|
Безусловно |
Условно |
Непатогенные ста- |
|
Критерии |
патогенные |
патoгeнные |
||
филококки |
||||
|
стафилококки |
стафилококки |
||
|
|
|||
1. Гемолитические |
Резкий гемолиз на |
Незначительный |
|
|
агаре с 5 % крови |
Гемолиза нет |
|||
свойства |
гемолиз |
|||
кролика или барана |
|
|||
|
|
|
||
2. Некротические свой- |
Некроз при внут- |
При внутрикожном |
Внутрикожная |
|
рикожном введе- |
введении воспале- |
проба отрицатель- |
||
ства |
||||
нии кролику |
ние (некроза нет) |
ная |
||
|
||||
3. Плазмокоагулирую- |
Свертывание плаз- |
Свертывание плаз- |
Свертывание плаз- |
|
мы через 6 часов и |
||||
щие свойства |
мы через 1-2 часа |
мы не происходит |
||
позднее |
||||
|
|
|
||
4. Цвет пигмента (кос- |
Золотистый, пале- |
Белый |
Лимонно-желтый |
|
венный признак) |
вый |
|||
|
|
|||
|
|
|
19 |
|
|
Б. Классификация рода Staphylococcus |
|||
|
|
1. Коагулозоположительные стафилококки |
|||
1. |
S.aureusxxx |
|
|
|
|
2. |
S.intermediusхх |
|
|
|
|
3. |
S. hyicusa |
|
|
|
|
|
|
2. Коагулазоотрицательные стафилококки |
|||
4. |
S. saprophyticusx |
12. |
S. sciuri |
20. |
S. caprae |
5. |
S. hominisx |
13. |
S. simulans |
2l. |
S. eqorum |
6. |
S. capitis |
14. |
S. arlettae |
22. |
S. lentus |
7. |
S. warneri |
15. |
S. auricularis |
23. |
S. saccharolyticus |
8. |
S. epidermidisxxx |
16. |
S. carnosus |
24. |
S. schleiferi |
9. |
S. haemolyticusx |
17. |
S. caseolyticus |
25. |
S. lugdunensis |
10. S. cohnii |
18. |
S. gallinarum |
26. |
S. chromogenes |
|
11. S. xylosis |
19. |
S. kloosii |
|
|
|
|
Примечание: |
х – патогенные только для человека |
|
|
|
|
|
хх – патогенные только для животных |
|
|
|
|
|
ххх – виды, патогенные для человека и животных |
|||
|
|
а – не все штаммы имеют плазмокоагулазу |
|
||
В. Экзотоксины, продуцируемые токсигенными стафилококками
Тип токсина |
|
|
Действие токсина |
|||
1. Мембраноповреждающие α, β, γ, δ |
Разрушают различные клетки (эритроциты, |
|||||
|
|
|
|
лейкоциты, тромбоциты, макрофаги, лаб- |
||
|
|
|
|
роциты, клетки культур тканей, протопла- |
||
|
|
|
|
сты и др.) |
|
|
2. Лейкоцидин P-V (истинный лейкоцидин |
Разрушает лейкоциты |
|
||||
Пентона-Валентайна) |
|
|
|
|
|
|
3. Энтеротоксины А,В,С1,С2,СЗ,D,Е |
Вызывают пищевые интоксикации |
|||||
4. Эксфолиативные А и В |
|
|
Вызывают отслоение эпидермиса (пузыр- |
|||
|
|
|
|
чатка новорожденных) |
|
|
5. Экзотоксин токсического шока (ЭТШ) |
Вызывает синдром токсического шока |
|||||
Г. Основные межвидовые различия у бактерий рода Staphylococcus |
||||||
Признак |
|
|
|
Вид |
|
|
|
S. aureus |
|
S. epidermidis |
|
S. saprophyticus |
|
|
|
|
|
|||
Наличие: |
|
|
|
|
|
|
плазмокоагулазы |
|
+ |
|
– |
|
– |
фосфатазы |
|
+ |
|
+ |
|
– |
аргининдигидролазы |
|
+ |
|
+ |
|
– |
нитратредуктазы |
|
+ |
|
+ |
|
– |
Окисление |
|
|
|
|
|
|
и ферментация: |
|
+ |
|
|
|
+ |
маннита |
|
|
– |
|
||
|
|
|
|
|
||
трегалозы |
|
+ |
|
– |
|
+ |
галактозы |
|
+ |
|
+ |
|
– |
маннозы |
|
+ |
|
+ |
|
– |
рибозы |
|
+ |
|
– |
|
– |
Устойчивость к: |
|
|
|
|
|
|
новобиоцину |
|
– |
|
– |
|
+ |
лизостафину |
|
– |
|
+ |
|
+ |
|
|
|
|
|
|
20 |
Д. Основные дифференциальные признаки стрептококков группы А и стрептококков группы D (энтерококки)
|
Признаки |
|
|
Стрептококки |
|
|
|
группа А |
|
группа D (энтерококки) |
|
|
|
|
|
||
1. |
Форма |
|
круглая |
|
чаще овальная |
2. |
Взаиморасположение |
|
цепочки |
|
парами, короткие цепочки |
3. |
Температурные пределы роста |
|
25-38 °С |
|
10-45 °С |
4. |
Рост на средах с рН 9,6 |
|
– |
|
+ |
5. |
Pост на средах, содержащих |
|
– |
|
+ |
|
6,5% NaCl |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
6. |
Рост на среде с 40% желчи |
|
– |
|
+ |
7. |
Рост на молоке, содержащем |
|
– |
|
+ |
|
0,1% метиленового синего |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
8. |
Гиалуронидазная активность |
|
+ |
|
– |
9. |
Терморезиствнтность (при |
|
– |
|
+ |
|
60°С в течение 30 мин.) |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
З А Н Я Т И Е |
4 |
|
|
Дата ______________
Тема: Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных забо-
леваний (пневмококки, менингококки, гонококки)
План занятия:
1.Бактериологическое исследование гноя (продолжение). Макро- и микроскопия колоний, выросших при посеве гноя.
2.Определение патогенности стафилококка. Обнаружение плазмокоагулазы, гемотоксина (демонстрация). Фаготипирование стафилококков (демонстрация). Определение чувствительности культуры к антибиотикам методом дисков и Е-тестом.
3.Исследование микрофлоры зева. Макро- и микроскопия колоний, выросших на кровяном МПА.
4.Изучение морфологических и культуральных свойств пневмококка (демонстрация).
5.Менингококк. Демонстрация готовых препаратов-мазков из ликвора.
6.Гонококк. Микроскопия мазков из гноя больного гонореей.
7.Демонстрация лечебно-профилактических и диагностических препаратов, применяемых при кокковых инфекциях (вакцины, анатоксины, антибиотики, фаги).
Методические указания
1.На чашках с посевами найти колонии стафилококка: небольшие, выпуклые, с ровными краями, непрозрачные, с гладкой и блестящей поверхностью. Обратить внимание на наличие пигмента на молочном МПА и гемолиза на кровяном МПА. Промикроскопировать мазок из колонии и зарисовать в тетрадь.
2.Для определения чувствительности стафилококка к антибиотикам взять петлей колонию, размешать ее в пробирке с МПБ, чтобы получилось заметное помутнение бульона. 2-3 капли полученной эмульсии нанести в центр чашки с МПА и тщательно растереть по всей поверхности агара. Разделить дно чашки с тыльной стороны карандашом на 4 сектора, надписать на секторах названия антибиотиков и положить в центр каждого сектора
21
прокаленным и остуженным пинцетом диск с соответствующим антибиотиком.
Измерить и записать в таблицу диаметр зоны задержки роста стафилококка каждым антибиотиком. Сформулировать и записать вывод о степени чувствительности выделенной культуры к различным антибиотикам.
Регистрация чувствительности к антибиотикам выделенной культуры стафилококка
Антибиотик |
|
Пенициллин |
Стрептомицин |
Левомицетин |
Тетрациклин |
Диаметр зоны за- |
|
|
|
|
|
держки роста |
(в |
|
|
|
|
миллиметрах) |
|
|
|
|
|
Вывод: ______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
3. Просмотреть чашки с посевами материала из зева. Обратить внимание на наличие мелкоточечных колоний с зоной полного или зеленоватого гемолиза. Промикроскопировать и зарисовать препарат, приготовленный из подозрительной колонии (окраска по Граму).
6. Готовые препараты-мазки из отделяемого уретры больного гонореей окрасить метиленовым синим или по Граму. При микроскопии необходимо отыскать в препарате лейкоцит с заключенными в нем диплококками, имеющими форму кофейного зерна.
Микроскопия колонии |
Микроскопия колонии |
Пневмококк |
из посева гноя |
из посева слизи |
Streptococcus pneumoniae |
|
Гонококк в отделяемом уретры больного гонореей: |
|
Менингококк |
окраска по Граму |
окраска метиленовым синим |
Neisseria meningitidis |
|
Neisseria gonorrhoeae |
Методы микробиологической диагностики гонококковой инфекции
А. Бактериоскопический
Материал: гной из мочеполовых органов, с конъюнктивы глаза
По Граму |
Метиленовым синим |
22