Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4.Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5.Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6.Реакция связывания комплемента.

7.Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1.Реакция агрегат-гемагглютинации.

2.Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3.РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

4.Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

Г. Аллергический - проба Бюрне

Методы микробиологической диагностики сибирской язвы

А. Бактериологический

Материал: тканевой выпот из-под струпа и со дна язвы, кровь, мокрота, испражнения.

13

Б. Биологический

Исследуемый материал (см. метод А)

подкожное заражение белых мышей или морских свинок

Выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств Микроскопия препаратов-

отпечатков из органов

В. Серологический – реакция термопреципитации Асколи (для обнаружения специфического антигена возбудителя в исследуемом материале).

Г. Аллергический – Проба с антраксином.

Контрольные вопросы

Какие виды бруцелл вызывают бруцеллез у человека? Каковы основные хозяева бруцелл соответствующих видов?

Каковы морфология и культуральные свойства различных видов бруцелл?

Какие свойства бруцелл используются для классификации их на вида и биотипы? Какой из видов бруцелл наиболее патогенен для человека?

Каковы пути заражения бруцеллезом?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики бруцеллеза? Какой берется от больного материал для выделения возбудителя бруцеллеза? Как осуществляется выделение возбудителя из разного материала?

Какими методами осуществляется серологическая диагностика бруцеллеза? Какова техника постановки серологических реакций?

Каково диагностическое значение реакции Хеддльсона?

Как производится оценка реакции Райта? Какова ее диагностическая ценность?

Как ставится аллергическая проба Бюрне? Через сколько времени и как производится ее оценка?

С какого дня заболевания рекомендуется ставить реакцию Райта и пробу Бюрне? Что такое бруцеллин и как его получают?

Как производится специфическая профилактика бруцеллеза? Как производится отбор лиц, подлежащих специфической вакцинации?

Какие категории работников подвергаются специфической профилактике в первую очередь?

В чем заключается принцип вакцинотерапии бруцеллеза?

Какова методика постановки реакции Кумбса? (см. Часть I, занятие 16).

Каковы морфология, культуральные свойства и устойчивость во внешней среде возбудителя сибирской язвы?

Как дифференцируется сибиреязвенная палочка от антракоидов и псевдосибиреязвенных бактерий?

14

Какой материал берется для исследования при сибирской язве?

Какие микробиологические методы используются для диагностики сибирской язвы?

Как осуществляется проверка животного сырья на зараженность сибиреязвенными палочками?

Какой иммунопрепарат используется для специфической терапии сибирской язвы и как он применяется?

Какие вакцины используются для профилактики сибирской язвы и как они применяются?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 2

А. Дифференциальная характеристика видов рода Brucella

Обозначения: + - наличие роста, выделение уреазы, сероводорода, агглютинабельность сыворотками, лизис фагом;

— - отсутствие роста, выделения уреазы, сероводорода, агглютинабельности сыворотками, лизиса фагом.

Б. Основные дифференциальные признаки Bacillus anthracis и Bacillus anthraсоides

В. Факторы патогенности и генетический контроль их синтеза у возбудителя сибирской язвы

Основными факторами патогенности сибиреязвенной палочки, которые определяют патогенез заболевания, являются сложнокомпонентный экзотоксин и капсула.

15

Синтез сложного токсина контролируется плазмидой pXO1, имеющей молекулярную массу 110-114 МД. В составе плазмиды pXO1 имеется три гена, определяющих синтез основных компонентов экзотоксина:

ген cya-ОФ, определяет синтез фактора отечности

ген pag-ПА, определяет синтез протективного антигена ген lef-ЛФ, определяет синтез летального фактора

Продуктом гена суа-ОФ является аденилатциклаза, катализирующая накопление в клетках эукариотов цАМФ.

Синтез капсулы сибиреязвенной палочкой контролируется плазмидой рХO2, имеющей м.м. 60 МД. Капсула чисто полипептидной природы (полиглютаминовая кислота) – единственная в мире микробов.

З А Н Я Т И Е 3

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных

заболеваний (стафилококки, стрептококки)

План занятия:

1.Изучение морфологии и культуральных свойств стафилококков.

2.Изучение морфологии и культуральных свойств стрептококков.

3.Бактериологическое исследование гноя: микроскопия и посев на кровяной агар.

4.Исследование флоры зева. Микроскопия и посев на кровяной агар.

5.Бактериологическое исследование крови. Посев крови на сахарный МПБ (демонстрация).

Методические указания

1.Обратить внимание на внешний вид культур стафилококков мутность, осадок в МПБ; характер налета, степень прозрачности и наличие пигмента на МПА. Приготовить и окрасить по Граму препараты всех видов стафилококков, выросших на плотных и жидких питательных средах. Препараты зарисовать.

2.Обратить внимание на внешний вид культур стрептококков на жидких и плотных средах - придонно-пристеночный рост на сахарном бульоне, величину колоний и наличие зоны гемолиза или позеленения на кровяном МПА. Приготовить и окрасить по Граму препараты-мазки из культур гемолитического и зеленящего стрептококков с кровяного МПА и сахарного МПБ. Сравнить морфологию одного и того же вида стрептококка, выращенного на жидких и плотных питательных средах. Препараты зарисовать.

3.Приготовить из гноя препарат-мазок и окрасить его по Граму. Обратить внимание на взаиморасположение кокков в препаратах-мазках из гноя. Препарат зарисовать. Произвести посев гноя петлей штриховым способом на половину чашки с кровяным или молочно-желточно-солевым МПА.

4.Взять материал со слизистой зева друг у друга стерильным ватным тампоном. Для приготовления мазка материал с тампона растереть на поверхности предметного стекла, предварительно прокаленного и остуженного (стекло должно быть стерильным, чтобы не загрязнить тампон). После приготовления мазка тем же тампоном произвести посев на половину чашки с кровяным МПА. Приготовленный мазок зафиксировать, окрасить по Граму и промикроскопировать. Обратить внимание на наличие в мазке кокков и характер их взаиморасположения.

16

на МПА на МПБ Золотистый стафилококк – Staphylococcus aureus

на МПА на МПБ Эпидермальный стафилококк – Staphylococcus epidermidis

на кровяном МПА на сахарном МПБ Гемолитический стрептококк – Streptococcus haemolyticus

на кровяном МПА на сахарном МПБ Зеленящий стрептококк – Streptococcus viridans

17