- мелкозернистые или бугристые, кожистой консистенции колонии, плотно спаянные с питательным субстратом;
- крупнобугристые строчковидные колонии очень хрупкой консистенции, легко отделяемые от субстрата;
- блестящие сальные или матовые колонии сливкообразной консистенции.
На жидких средах многие виды грибов растут в виде войлокообразного осадка на дне,отмечается пристеночный рост.Грибы вырабатывают пигменты различного цвета: белые, желтые, коричневые, черные, синие, зеленые, красные и малиновые, одни из которых растворяются в воде, а другие в спирте, ацетоне, дихлорэтане, четыреххлористом углероде.
У паразитических форм грибов мицелий расположен, как правило, внутри пораженного организма. В частности, внутри растений гифы гриба проходят по межклетникам и иногда распространяются по всему растению снизу доверху. В таких случаях говорят, что гриб обладает диффузным мицелием. Растения, пораженные диффузной грибницей паразитического гриба, обычно меньшей величины, несколько деформированы и несут на своей поверхности в зависимости от вида возбудителя болезни тот или иной тип спороношения.
У промежуточных по степени паразитизма форм грибов мицелий также в основном расположен внутри субстрата, однако в некоторых растениях гифы идут не по межклетникам, а через клетки (сквозь них). Для того чтобы проникнуть в клетку растения-хозяина, гиф паразита воздействует на клеточную оболочку своими ферментами. Осмос питательных веществ в этом случае осуществляется всей поверхностью погруженных в субстрат гифов.
Своими ферментами полупаразитический гриб не только растворяет оболочку клеток растения-хозяина, благодаря чему проникает внутрь, но и обычно приводит их к гибели, после чего усваивает содержащиеся в клетках питательные вещества. Таким образом, внедрившись в них в качестве паразита, гриб затем питается за счет им же убитой клетки как сапрофит. Такой гриб можно назвать хищником.
Чем сильнее выражены паразитические свойства гриба, тем меньшим набо- ром ферментов он обладает, в силу чего может поражать только ограниченное число субстратов, вплоть до отдельных сортов растений. Такая приуроченность к строго определенным субстратам называется специализацией, а паразитический гриб - узкоспециализированным. Специализация у грибов иногда принимает крайние пределы: известна приуроченность грибов даже к определенным органам растений. Такое явление носит название органотропности.
В качестве питательных субстратов грибов могут служить преимущественно объекты растительного (в том числе кормовые растения), реже - животного происхождения (млекопитающие, птицы, рыбы, насекомые, черви, простейшие и т. д.).
Микроскопические грибы вызывают у животных самую разную и порой трудно распознаваемую патологию.
Микозы - это заболевания животных, вызываемые патогенными грибами, проникшими в организм. Поселяясь в органах и тканях организма животного, гриб вызывает патологический процесс. Примерами могут служить кандидамикоз, стригущий лишай, аспергиллез и т.д.
Микотоксикозы - это заболевания животных, возникающие при употреблении кормов, пораженных токсигенными грибами. На кормах происходит накопление микотоксинов, которые при употреблении способны вызывать отравление животных. Известны такие микотоксикозы, как эрготизм, фузариотоксикоз, ста- хиботриотоксикоз, аспергиллотоксикоз.
Аллергии - это заболевания животных, протекающие в виде аллергических реакций. Аллергические реакции, по всей вероятности, могут вызываться как спорами грибов, так и вегетативной их частью, а также продуктами метаболизма.
Клинические проявления аллергий очень разнообразны: лихорадка, отек морды, одышка, сердечная недостаточность,ринит, конъюнктивит, диарея и т. д. Диагностировать аллергию сложно.
Смешанные заболевания - микозотоксикозы или токсикомикозы с явлениями аллергии. Это, вероятно, самые распространенные заболевания. Положение усугубляется тем, что при ослаблении неспецифической резистентности животных (вследствие неправильного кормления, эксплуатации, содержания) грибы находят благоприятную почву в организме, поселяясь в нем, развиваются, продуцируют токсичные и аллергенные вещества.
Актиномицеты - это прокариоты, относящиеся к бактериям и составляющие самостоятельную группу микроорганизмов. Основные свойства (форма, строение) сближает их с бактериями. Но есть свойства (мицелий, размножение при помощи спор, характер заболевания - актиномикоза), сближающие с грибами. Значение:
Аппаратура:
Автоклав
Сухожаровой шкаф
Спиртовка, газовая горела
Установки для облучения
Термоста́т — прибор для поддержания постоянной температуры. Поддержание температуры обеспечивается либо за счёт использования терморегуляторов, либо осуществлением фазового перехода.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ СУХИМ ЖАРОМ
Прокаливание(фламбирование) на огне, пламени горелки бактериологических петель, игл, пинцетов, скальпелей, предметных стекол.
Стерилизация сухим нагретым воздухом – сушильный шкаф, печь Пастера. Снаружи шкаф облицован теплонепроницаемым материалом, в верхней части - термометр. Внутри шкафа полочки для размещения стерилизуемого материала. Стерилизуют в течение 2 ч при 160°С. Воспламеняющиеся вещества, жидкости, питательные среды, резиновые предметы стерилизовать сухим жаром нельзя.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ВЛАЖНЫМ ЖАРОМ
Кипячение – в металлические стерилизаторы (иглы, шприцы, пинцеты, ножницы) раскладывают инструменты обернутые в 2-3 слоя марли. Наливают воду, чтобы полностью покрывала инструменты. В дистиллированную воду добавляют 2 % соду. Кипятят 20-25 мин. Водопроводную воду нельзя, она дает накипь. По окончании кипячения воду сливают, инструменты берут стерильным пинцетом.
Стерилизация текучим паром. Текучим называется насыщенный водяной пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100°С. Стерилизацию текучим паром осуществляют в паровом стерилизаторе или автоклаве при открытом спусковом кране в течение 15 - 60 мин в зависимости от объема раствора. Аппарат Коха представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху закрытый крышкой с отверстиями для термометра и для выхода пара. На дно сосуда помещена подставка с отверстиями, до уровня которой наливают воду. Предназначенные для стерилизации питательные среды ставят на подставку. Для уничтожения спор стерилизацию проводят дробно, а в промежутках среды хранят в термостате для прорастания спор.
Тиндализация -жидкость стерилизуется дробно при 60-65 °С пять дней подряд по 30 мин. Это используют для стерилизации сред, содержащих яичный белок, сыворотку крови, витамины. В первый день среды стерилизуют 2 часа, в последующие дни – по одному часу. В промежутках между прогреваниями среды хранят в термостате, чтобы споры проросли, а затем вегетативные клетки были уничтожены при следующем прогревании.
Пастеризация– это метод частичной стерилизации, предложенный Пастером для обработки пищевых продуктов, нестойких к действию высокой температуры (вино, пиво, молоко, соки). Продукт нагревают до 65-80 °С в течение 10-60 мин, затем резко охлаждают. При этом погибают вегетативные формы бактерий, а споры сохраняются. Последующее хранение при низкой температуре (4-5 °С) препятствует прорастанию спор и размножению оставшихся в продукте микробов.
Стерилизация паром под давлением, или автоклавирование. Автоклав представляет собой двустенный металлический котел с герметически закрывающейся крышкой. В пространство между стенками автоклава наливают воду, уровень которой в котле определяют по уровню ее водомерной трубки. Снаружи котел одет металлическим кожухом, в котором есть два манометра, показывающие давление пара внутри котла и между стенками.
Стерилизуемый объект помещают внутрь паровой камеры. Во время нагревания автоклава после закрывания крана необходимо следить за давлением, параллельно с возрастанием которого увеличивается температура пара.
Обычно стерилизация в автоклаве производится при 120 °С в течение 5-30 мин в зависимости от объема раствора. Этим гарантируется достаточно полная стерилизация независимо от вида микроорганизма. Таким способом стерилизуют посуду, фильтры, инструменты, водные растворы устойчивых к воздействию высокой температуры лекарственных веществ, перевязочный материал, а также трупный материал.
Фильтрация. Растворы, содержащие термолабильные вещества, удобнее всего стерилизовать фильтрованием. Неглазурованные фарфоровые цилиндры (свечи Шамберлена) применялись уже в лаборатории Пастера. Фильтрация проводится через мембранные бактериальные фильтры – диски из нитроклетчатки, вставленные в аппарат Зейтца и глубинные – свечи Шамберлена, Беркефельда. Некоторые из них выпускаются с различной величиной пор, что позволяет разделять организмы разной величины и формы.
- Многие актиномицеты являются продуцентами антибиотиков.
- Патогенные актиномицеты вызывают у человека актиномикоз. Заразиться можно от животных и при жевании травинок, колосков (актиномицеты являются свободно живущими микробами) Возможен эндогенный путь инфицирования тканей (возбудитель живет в десневых карманах здоровых людей). Чаще развивается актиномикоз шейно-челюстной области, что приводит к образованию воспалительных уплотнений со свищами, из которых выделяется жидкий гной с зернышками - друзами (это скопление актиномицетов, окруженные колбовидными вздутиями клеток паразита). Обнаружение друз - диагностический признак актиномикоза.
Облучение. Для полной или частичной стерилизации применяют ультрафио-летовые, рентгеновские и гамма-лучи. В лабораторных условиях наибольшее значение имеют ультрафиолетовые лучи. В спектре УФ-ламп преобладает излучение в области 260 нм, поглощаемое нуклеиновыми кислотами и при достаточно длительном воздействии вызывающее гибель всех бактерий. УФ-облучение используется для частичной стерилизации помещений; при этом бактерии погибают очень быстро, а споры грибов, гораздо менее чувствительные к ультрафиолету, значительно медленнее. Бокс облучают 2-3 часа, лампы выключают не позднее, чем за 30 мин до начала работы.
Ионизирующее излучение, стерилизацию ультразвуком применяют для стерилизации питательных сред, пищевых продуктов и других компактных материалов.
Питательные среды по своей сущности являются искусственной средой обитания микробов и поэтому должны соответствовать следующим требованиям:
- содержать основные питательные вещества, из которых строится микробная клетка: макроэлементы (азот,углерод,водород,кислород,фосфор,железо, калий, кальций, сера, магний), микроэлементы (кобальт, йод, марганец, молибден, цинк, медь и др.), витамины. Все элементы должны находится в легкоусвояемой для конкретного микроорганизма форме. В питательные среды добавляют аминокислоты, органические кислоты, витамины, сахара, многоатомные спирты, белки, соли различных кислот и воду;
- иметь достаточную влажность (не менее 20 % воды), т.к. поступление веществ в микробную клетку осуществляется при помощи диффузии и осмоса;
- быть изотоничными, т.е. иметь концентрацию солей соответствующую концентрации солей в микробной клетке (для большинства микроорганизмов 0,5%, для галлофилов – 3 %);
-быть нетоксичными для исследуемых микробов;
-обладать оптимальной для выращиваемого микроорганизма концентрацией водородных ионов (рН). Питательные вещества могут усваиваться микробами только при определенной реакции питательной среды, т.к. от этого показателя зависит проницаемость оболочки микробной клетки. Для большинства микроорганизмов оптимум роста наблюдается при рН 7,2-7,4;
-быть по возможности прозрачными, т.к. это облегчает изучение в них роста микробов;
-быть стерильными, чтобы была возможность размножать в них культуру только одного вида микроба.
Классификация питательных сред
Потребность в питательных веществах у различных микробов спруляция неодинакова, поэтому нет возможности создать для них универсальную питательную среду. На основании разных показателей питательные среды классифицируют следующим образом.
1.По консистенции: жидкие, плотные, полужидкие;
2.По происхождению - животного, растительного происхождения и синтетические среды постоянного состава;
3.По назначению:
-обычные(простые)-для выращивания большинства микроорганизмов;
-специальные - для культивирования микробов, не растущих или плохо растущих на обычных питательных средах;
-дифференциально-диагностические - употребляемые для определения родовых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (гемолитических, сахаролитических, протеолитических, редуцирующих и других свойств);
-элективные - для выделения микробов одного рода или вида из материала, содержащего смесь разных видов микроорганизмов, на которых одни виды хорошо растут, а другие не растут;
-среды обогащения (накопительные).
Основой многих питательных сред животного происхождения является мясная вода. Ее готовят из свежего нежирного говяжьего мяса, освобожденного от костей, фасций, сухожилий. Измельченное мясо (мелкие кусочки или фарш) заливают дистиллированной водой в соотношении 1:2 (на 1 кг мяса 2 л воды). Экстрагируют 12-24 ч, кипятят 1,5-2 ч, фильтруют, добавляют дистиллированной воды до первоначального объема, разливают в бутыли, колбы, закрывают ватно- марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве.
Простые питательные среды
Мясо-пептонный бульон (МПБ) - жидкая питательная среда. Для его приготовления к 1 л мясной воды добавляют 1 % пептона, 0,5 % химически чистой поваренной соли и кипятят. Мясная вода слабокислой реакции, поэтому МПБ подщелачивают – добавляют небольшое количество 10-15 % раствора КОН или NaOH, кипятят 2-3 мин. МПБ фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, автоклавируют.
Мясопептонный агар (МПА) - плотная питательная среда. К МПБ добавляют 2 % агар-агара (органическое вещество, полученное из морских водорослей)и кипятят до его расплавления, в горячем виде устанавливают рН, кипятят 5-10 мин, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или колбочки, автоклавируют. После стерилизации горячие пробирки с агаром раскладывают наклонно под углом 5-6°. При застывании образуется скошенная плотная поверхность.