Материал: Нарушения микроциркуляции, тромбоз, воспаление Учебно-методические рекомендации

2.Неполное восстановление функциональной активности поврежденных органов и тканей с полным прекращением процессов воспаления (значительные структурные перестройки органа/ткани при фиброзировании).

3.Переход острого воспаления в хроническую форму.

4.Гибель организма.

Хроническое воспаление – эволюционно выработанный механизм локализации, отграничения от неизмененных тканей, элиминации флогогенных агентов, способных ускользать от деструктивного действия эффекторов воспаления и персистировать в организме. Для течения хронического воспаление характерно чередование «волн» активации процесса (обострение) и его затухания (ремиссия).

Морфологически хроническое воспаление характеризуется выраженной лейкоцитарной инфильтрацией пораженных тканей (преимущественно моноцитар- но-лимфоцитарной), деструктивными изменениями органа (развитие фиброза, участки некротических изменений, нарушение формы и взаимодействия с другими органами/тканями).

Становится понятным механизм противовоспалительного действия голюкокортикоидов – блокаторов активности фосфолипазы А2 (через специфиче-

скую стимуляцию синтеза моноцитами липокортинов).

Цель занятия:

1.Исследовать особенности сосудистых изменений при развитии воспале-

ния.

2.Исследовать особенности фагоцитоза макрофагами.

3.Демонстрация учебного видеофильма «Роль лейкоцитов в развитии воспаления».

Опыт №1. Моделирование сосудистых изменений при развитии воспаления в брыжейке лягушки.

Подготовку препарата лабораторной лягушки осуществляют в соответствии с ранее описанной методикой (см. глава «Тромбоз», опыт №1).

Производят разрез боковой поверхности живота лягушки, осторожно извлекают из брюшной полости петли тонкой кишки, расправляют над круглым отверстием брыжейку, фиксируют ее к препаровальному столику булавками и дают немного подсохнуть для инициации воспалительных изменений; помещают подготовленный объект на предметный столик микроскопа.

Производят обзорную микроскопию брыжейки лягушки, наблюдают нормальную работу системы микроциркуляции. По мере высыхания препарата наблюдают стадийное развитие изменений в области микроциркуляторного русла, начальные стадии эмиграции лейкоцитов.

В протокол опыта заносят изменения кровообращения в микроциркуляторном русле и изображение маргинации лейкоцитов в кровеносном русле. Вывод должен отражать заключение о механизмах исследованных явлений.

25

Опыт №2. Микроскопическое исследование особенностей фагоцитоза – фагоцитоз птичьих эритроцитов в асептическом экссудате (опыт Мечникова).

Производят исследование методом световой микроскопии коллекции препаратов кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО СПбГПМУ по теме «Фагоцитоз».

Основой препарата является экссудат перитонеальной полости крысы, в которую за 40–50 минут до взятия материала ввели взвесь птичьих эритроцитов.

Для наблюдения за процессом фагоцитоза вызывается асептическое воспаление в брюшной полости крысы. С этой целью животному интраперитонеально вводится 5 мл 10% стерильного мясопептонного бульона. Через 24–48 ч., когда в перитонеальном экссудате появится достаточное количество макрофагов, в брюшную полость крысы двукратно (с интервалом в 15 минут) вводят взвесь птичьих эритроцитов - как объект фагоцитоза. Двукратное введение эритроцитов позволяет в одном препарате видеть различные фазы фагоцитоза. Полученный экссудат изучается в висячей капле и в окрашенных мазках.

а) Изучение фагоцитоза в нативном перитонеальном экссудате в висячей капле. Смазав по краям покровное стекло тонким слоем вазелина, на середину его наносят маленькую каплю 1% р-ра нейтральрот в физиологическом растворе и прибавляют туда же капельку полученного экссудата. Нейтральрот – индикатор, принимающий в кислой среде красный цвет, следовательно можно ожидать, что розовый цвет приобретет цитоплазма тех макрофагов, где уже идут процессы переваривания фагоцитированных клеток, под действием ферментов макрофага.

Покровное стекло накрывается предметным стеклом с лункой так, чтобы капля пришлась на середину углубления. Предметное стекло слегка прижимается к покровному и препарат переворачивают покровным стеклом вверх. Хорошо приготовленная висячная капля не должна касаться предметного стекла. Приготовленный препарат просматривают под микроскопом. Рассматривая препарат под малым увеличением, среди массы желтоватых эритроцитов находят красноватые комочки - макрофаги крыс, у которых уже идут процессы фагоцитоза. Поставив комочек в центр поля зрения, надо подвергнуть его подробному рассмотрению под большим увеличением, при этом можно наблюдать все стадии фагоцитоза гусиных эритроцитов макрофагами. Обращают внимание на окраску гусиных эритроцитов в стадии прилипания, в стадии захвата и в стадии переваривания их макрофагами крысы.

б) Изучение фагоцитоза в окрашенном препарате. Приготовление и окраска фиксированного мазка. Приготовление мазков начинают после того как при просматривании висячей капли под малым увеличением убеждаются в наличии фагоцитоза (красные комочки среди желтоватых эритроцитов).

Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносится экссудат и шлифованным стеклом делается мазок (не слишком тонкий). Он тщательно высушивается на воздухе и окрашивается краской Май-Грюнвальд. Зарисовать все стадии фагоцитоза.

26

Опыт №3. Демонстрация учебного видеофильма «Роль лейкоцитов в развитии воспаления».

Литература

1.Stevens, J.S. Lowe, I. Scott Core Pathology, 3rd Edition with STUDENT CONSULT Online Acces, 2009, Elsrvier Limited.

2.Rubin Е., Gorstein F et al. Rubin’s pathology: clinicopathologic foundations of medicine / editor-in-chief, E. Rubin. 4-th ed. 2004.

3.Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Общая патофизиология (с основами иммунопатологии). Учебник для студентов медВУЗов. – СПб.: 2005. – ЭЛБИ-СПб, 656 с., илл.

27