Материал: Власов Ю.И., Ларина Э.И. Сельскохозяйственная вирусология

окаймление жилок крыжовника и др.) н междужилковую мозаику. В случае светло-желтой или белой окра­ ски мозаику обозначают как аукуба-мозаика. Для неко­ торых заболеваний — желтуха сахарной свеклы, ксантоз земляники и др.— характерно хлоротическое окра­ шивание всей поверхности листа. Целому ряду заболе­ ваний бобовых культур свойственно появление крапча­ той окраски на семенной кожуре.

Изменение формы и размеров различных органов.

Неравномерный рост отдельных участков тканей листо­ вой пластинки, плодов и цветков приводит к морщини­ стости и деформации листьев (морщинистая мозаика картофеля, зеленая крапчатая мозаика огурца, нитевидность, папоротниковидность листьев томатов), бугри­ стости и деформации плодов (обыкновенная мозаика огурцов на огурцах, дыне, патиссоне). При некоторых заболеваниях отмечаются волнистость краев листовой пластинки, курчавость верхушки, закручивание и скру­ чивание листьев. Последний симптом определяется на­ рушениями в углеводном обмене и задержке оттока уг­ леводов из листьев. Эти признаки часто встречаются при поражении картофеля складчатой мозаикой, скру­ чиванием и мозаичным закручиванием листьев.

Другой формой отклонений от нормального роста является образование выростов (так называемых энаций) на верхней или нижней поверхности листа. К чис­ лу таких заболеваний относятся энационная мозаика томатов, вызванная ВТМ, деформирующая мозаика го­ роха, листовидные выросты жилок цитрусовых, бороздчатость листьев черешни. Вирусы способны также вы­ зывать у растений подобие опухолевого роста, причем ткани опухолей представляются мейее организованны­ ми, чем энации.

Поражения некротического типа. Отмирание ткани проявляется либо при локальной реакции, либо в си­ стемной некротизации. Некроз тканей проявляется в ви­ де отдельных пятен, колец, узоров на листьях, некроти­ ческих полос и цЛ-рихов на стеблях, жилках, черешках листьев. Возможны последующая некротизация всей ли­ стовой поверхности, точек роста (так называемый апи­ кальный некроз) и отмирание тканей всего растения. К заболеваниям некротического типа относятся стрик томатов, полосчатая мозаика картофеля., бронзовость табака, побурение люпина и др.

нии болезней отдельных сельскохозяйственных культур.

Установление инфекционности заболевания. Досто­ верным и убедительным подтверждением вирусной этио­ логии является инфекционность, если при этом исключе­ на возможность действия других вредных организмов (грибов, бактерий, нематод, тлей, клещей и т. д.). До­ казательством инфекционности служит воспроизведе­ ние на том же виде растений патологических измене­ ний, аналогичных с изучаемым образцом. Достигается это несколькими способами: 1) механически — путем на­

тирания соком, укола иглой, введения сока в проводя­

gidorus, Xiphinema, Trichodorus), 3) прививками, 4) че­ рез повилику (Cuscuta sp.). Обычно в первую очередь испытывают механический способ передачи инфекции и лишь при негативных результатах выбирают другой метод в соответствии с видовой принадлежностью и симптоматикой растения.

Более детально о способах механической передачи вирусов будет сказано при описании метода с исполь­ зованием растений-индикаторов. Приведем кратко ос­ новные приемы работы с насекомыми-переносчиками — тлями и цикадками. Для определения инфекционности заболевания посредством переносчиков следует исполь­ зовать популяции так называемых невирофорных насе­ комых, т. е. свободных от фитовирусов. С этой целью с непораженных растений отлавливаются насекомые оп­ ределенных видов (цикадки, бескрылые особи тлей), которые в дальнейшем размножаются на здоровых рас­ тениях в условиях изоляции. При соответствующей тем­ пературе (20°С) и освещенности (2000 лк) популяции невирофорных насекомых могут поддерживаться в ла­ бораторных условиях в течение нескольких лет.

Тлей можно использовать для доказательства инфек­ ционности вирусов скручивания листьев картофеля, жел­ той карликовости ячменя и др. Для этой цели пригод­ ны бескрылые формы тлей, которые перед постанов­ кой опыта специальными кисточками переносятся из

рассадника здоровых насекомых в чашки Петри на фильтровальную бумагу. После некоторого голодания тли пересаживаются кисточкой на больные листья испы­ туемых растений (по 20 особей на лист), где выдержи­

ваются то или иное время, в зависимости от характера переноса инфекции. При персистентном типе передачи инфекции (например, вирусы скручивания листьев кар­ тофеля, желтой карликовости картофеля, желтой кар­ ликовости ячменя и др.) длительность питания тлей варьирует от трех до семи суток, а при передаче ин­ фекции по неперсистентному типу достаточно несколь­ ких минут (например, у вирусов картофеля Y, М, A, F, вируса мозаики люцерны и др.). Затем инфицирован­ ные вирусом тли переносятся кисточкой на здоровые растения, находящиеся под изоляторами, из расчета 5 особей на растение. Продолжительность питания вирофорных тлей на здоровых растениях — от нескольких часов до трех суток, после чего тлей уничтожают с по­

тений злаков под капроновые колпачки (5...7X2 см), имеющие с двух сторон отверстия, которые после под­ садки насекомых завязывают. На каждый лист прихо­ дится 3...4 нимфы I—II возраста определенного вида цикадки. Длительность питания на больном растении до пяти суток. Далее насекомых переносят на пророст­ ки здоровых злаков, например, пшеницы (по 2...3 особи на растение). Для изоляции этих растений используют цилиндрики из ацетат-целлулоидной пленки диаметром 2...3 см, которые заглубляют в почву на 1... 1,5 см, а сверху закрывают ватной пробкой, обернутой в марлю. В течение месяца цикадок каждые 3...4 дня последова­ тельно пересаживают на здоровые растения, после чего уничтожают инсектицидами. Наблюдения ведут за рас­ тениями 1V2...2 месяца с момента начала опыта.

Серологический метод, основанный на иммуногенных и антигенных свойствах фитовирусов, позволяет ус­ тановить вид вируса, генетические взаимоотношения ме­ жду вирусами, определить концентрацию и локализацию вируса в клетках и тканях растений. Метод широко применяется в медицине, ветеринарии и фитопатологии

для диагностики вирусных, микоплазменных и бакте­ риальных заболеваний.

Для изучения фитопатогенных вирусов этот метод был впервые применен М. Двораком в 1927 г. Дальней­ шее развитие он получил в работах М. С. Дунина и Н. Н. Поповой (1937), разработавших капельный метод серодиагностики вирусов растений. В настоящее время

ские сыворотки можно получить, вводя очищенный пре­ парат вируса в организм различных видов животных (кролики, лошади, бараны, козы и др.). Наиболее ча­ сто используют для этих целей кроликов, обладающих высокой активностью к образованию антител; при не­ обходимости производства диагностических сывороток в больших количествах используют лошадей.

Для приготовления относительно чистых препаратов фитовирусов разработаны различные схемы их очистки на основе методов дифференциального центрифугирова­ ния (т. е. чередования низкоскоростного центрифугиро­

фугирования в градиенте плотности и др. В зависимости от вида вируса варьируют и схемы введения анти­ гена (число инъекций и интервалы между ними). По­ сле завершения цикла инъекций антигена у животного берётся кровь для выделения из нее сыворотки, которая после соответствующей обработки разливается по ам­

держание антител в антисыворотках определяется ря­ дом факторов, к числу которых относятся: а) способ введения антигена, б) число инъекций и количество вве­ денного антигена, в) интервалы между инъекциями, ■г) введение соединений, стимулирующих образование антител в организме животного. Антиген можно ввести животному внутривенно, внутримышечно, подкожно, в лимфатические узлы. Наиболее часто препарат вируса вводится кроликам внутривенно в ушную вену. Напри­ мер, при таком способе инъекций концентрация анти­