сыворотки. Применение поточной линии позволяет про водить ежедневно около двух тысяч анализов.
Существуют модификации, повышающие эффектив ность капельного метода. К ним относится методика У. Хамана, основанная на добавлении к соку 4%-ного раствора сульфата аммония в соотношении 1:1. Этот прием широко используется в ГДР в первичном, семе новодстве картофеля. Помимо капельного метода, здесь также применяется в практике семеноводства метод ра диальной диффузии в геле.
Серологические анализы картофеля рекомендуется проводить дважды — в зимнс-весенний период во время индексации клубней и в период вегетации растений, а именно в фазу бутонизации — цветения, когда концент рация вирусов мозаичной группы достигает максималь ного значения.
" Индексацией называется проверка на зараженность вирусами растений, выращиваемых в теплице из глаз ков, вычленяемых с частью мякоти клубня. Анализы проводятся комплексно: визуально, серологическим спо собом (на ХВК, SBK, МВК) и тестированием на расте ниях-индикаторах (на УВК, АВК и др.). Индексацию широко используют при проверке клонового материала (клон — потомство одного растения картофеля) в пер вичном семеноводстве. Число клубней, анализируемых методом индексации в клоне, зависит от объема-прове ряемого материала и имеющейся площади теплиц. При выявлении вирусов хоть в одном клоновом растении клон целиком выбраковывается.
Предложен также метод определения вирусов в рост ках картофеля в зимне-весенний период. Для этой цели клубни рекомендуют проращивать в течение трех не дель при температуре воздуха 18...22°С и использовать для постановки серологических реакций сок из ростков, предварительно отцентрифугированный для _ удаления крахмальных зерен. Показаны совпадение результатов серодиагностики в соке ростков и растений, выросших в поле (для вирусов ХВК, SBK и МВҚ), и возможность выявления этим методом в ряде сортов УВК.
Серодиагностика УВК в растениях картофеля имеет некоторые особенности. Этот вирус обладает более низ кой по сравнению с ХВК или МВК антигенной активно стью, его концентрация в соке листьев картофеля ниже и определяется рядом факторов, в частности повышен
ными |
тем пературам и, |
возрастом растений |
и др . П оэто |
|
му серодиагностика |
У В К в растениях |
картоф еля не |
||
всегда |
д а ет достоверны е результаты , и |
сс |
необходимо |
|
подкреплять в ряде случаев данны ми, полученными па
растсппях-ппдпкаторах. а такж е |
серодиагностикой |
по |
||||||||||||||||
росткам . |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Метод растений-индикаторов. В практике |
сем ен овод |
||||||||||||||||
ческой |
работы |
используется главным образом для ди а |
||||||||||||||||
гностики |
У В К |
и А В К . |
Н аилучш ими |
|
тест-растения ми |
|||||||||||||
сл уж ат |
гибрид |
А -6 |
(сорт |
А к в и л а Х Solanum |
|
d em issu m ) |
||||||||||||
и S olanu m ch acoen se |
(Т Е -1). |
О пределение |
У В К |
прово |
||||||||||||||
дится |
на |
отделенны х |
листьях |
вы ш еуказанны х |
индика |
|||||||||||||
торов. |
Л истья |
после |
инокуляции |
сока |
пом ещ аю т |
во |
||||||||||||
влаж ную |
кам еру |
при |
тем пературе |
воздуха |
|
19...25°С |
и |
|||||||||||
освещ енности |
1,5...2 |
тыс. лк. Ч ер ез |
5...7 |
дней в |
случае |
|||||||||||||
наличия |
вирусной |
инфекции |
на |
листьях |
развиваю тся |
|||||||||||||
тем но-буры е |
пли |
черные |
некрозы . При |
пораж ении А В К |
||||||||||||||
на |
отделенны х |
листьях индикаторов спустя 3...5 дней |
||||||||||||||||
после зар аж ен и я |
возникаю т темные точечные |
или зв езд |
||||||||||||||||
чатые некрозы . |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
Тест-растения |
использую тся |
и |
для |
определения д р у |
|||||||||||||
гих |
вирусов, |
а |
такж е |
микоплазм (возбудителей стол бу |
||||||||||||||
ра, |
ведьмины х |
метел, |
круглолистности |
и др .) |
и вироида |
|||||||||||||
веретеновидности клубней картоф еля. К числу индика торов с местной некротической реакцией на вирусы, по
мимо вы ш еописанных, |
м ож но |
отнести |
G om phrena |
g lo |
|||||||||||||||
bosa |
(на |
Х В К , |
М В К ), |
N icotian a |
debneyi |
|
и ф асоль сорта |
||||||||||||
R ed |
K idhey |
(на |
М В К ) |
и др . N icotian a |
tabacum |
и D atura |
|||||||||||||
stram onium |
системно |
реагирую т на |
Х В К (обр азов ан и |
||||||||||||||||
ем |
м озаи к и ), N icotian a |
tabacum — па |
У ВК |
(посветлепн- |
|||||||||||||||
ем |
ж илок, м озаикой, |
а |
некоторы е |
штаммы |
некротиза- |
||||||||||||||
цией |
ж илок |
листьев), |
N icotian a |
tabacum — на |
ra ttle -ви |
||||||||||||||
рус |
(светло-зелены м и |
|
и |
некротическими |
узор ам и |
на |
|||||||||||||
отрастаю щ их листьях, |
некрозам и |
на |
стеблях |
и |
иногда |
||||||||||||||
череш ках |
и д р .). |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
Н аличие |
LBK |
устанавливается |
с |
помощ ью |
P h y sa lis |
|||||||||||||
floridan a. И нф ицирование |
безвирусны х |
тлей |
на |
ди агн о |
|||||||||||||||
стируемы х |
обр азц ах |
картоф еля — срезанны х |
|
ростках |
|||||||||||||||
или |
листьях |
(по |
20 особей ) |
осущ ествляется |
в |
чаш ках |
|||||||||||||
П етри в течение |
3...7 |
дней |
при |
освещ енности |
2 |
тыс. лк |
|||||||||||||
и |
тем пературе |
в оздуха |
20°С. |
З ар аж ен и е |
L B K |
P h y sa lis |
|||||||||||||
floridan a |
происходит |
в |
ф азе |
развития |
|
первого |
листа. |
||||||||||||
Тлей из расчета 5 особей |
на |
растение |
пересаж иваю т |
||||||||||||||||
кисточкой |
№ |
1 |
и |
спустя |
3 |
дня |
уничтож аю т |
инсектици |
|||||||||||
дам и . И нкубационны й период |
LBK |
в растении P h y sa lis |
|||||||
floridana составляет |
при освещ енности |
10 |
тыс. лк |
с ф о |
|||||
топериодом 16 ч и тем пературе |
воздуха |
27°С 7 ...10 |
дней, |
||||||
а |
при |
тем пературе |
воздуха |
20°С |
и |
освещ енности |
|||
6 |
тыс. лк без ф отопериода 14— 20 |
дней. |
P h y sa lis |
flori |
|||||
dana реком ендуется |
вы ращ ивать на керам зите в |
пита |
|||||||
тельном |
растворе |
Қнопа. Х арактерны е |
симптомы |
LBK |
|||||
на |
P h y sa lis floridana — хлороз |
листьев, |
угнетение |
роста, |
|||||
иногда |
гибель. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
П ри |
диагностике |
м икоплазм озов передача инфекции |
||||||
на |
индикаторы |
осущ ествляется |
только |
посредством |
|||||
прививок или повиликой. В качестве индикаторов ис
пользую т барвинок |
(C ath aran th us roseus |
L .), |
N icotian a |
|||||||||||||
tabacum , |
N . glau ca, |
томаты |
и |
др . |
|
|
|
|
|
|
|
|||||
Д л я |
выявления |
вироида |
|
веретеновидностн |
клубней |
|||||||||||
картоф еля |
реком ендую т |
скополию |
китайскую |
|
(S cop olia |
|||||||||||
sin en sis |
H e m sl.), реагирую щ ую |
образованием |
|
местных |
||||||||||||
некрозов, некоторые сорта томатов, в частности |
R utgers, |
|||||||||||||||
К убанский |
ш тамбовый 220, |
|
Сибирский |
скороспелы й, |
||||||||||||
Волгоградский скороспелы й |
323, |
характерны ми |
призна |
|||||||||||||
ками на |
которых является систем ное |
забол еван и е |
в |
ви |
||||||||||||
д е задер ж к и роста |
и |
курчавости |
листьев. |
|
|
|
|
|
||||||||
С ерологический и индикаторны й методы диагностики |
||||||||||||||||
дополняю т |
оценку |
и |
браковку |
картоф еля |
по |
|
внеш ним |
|||||||||
признакам, |
способствую т |
удалению |
из |
сем енного карто |
||||||||||||
ф еля |
вирусных растений, |
в том числе |
и со |
скрытой |
|
(л а |
||||||||||
тентной) |
инфекцией. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
Метод электронной микроскопии используется для |
||||||||||||||||
выявления вирусов в листьях, клубнях, ростках. |
Д а ет |
|||||||||||||||
возм ож ность по морф ологическим |
признакам |
вирионов |
||||||||||||||
(ф орм е |
и |
разм ерам ) |
диф ф еренцировать |
д а ж е |
в |
см е |
||||||||||
ш анных инфекциях Х В К , ra ttle -вирус, возбудителей |
ж е л |
|||||||||||||||
той |
и курчавой карликовости |
картоф еля. |
В |
р я де |
|
сл у |
||||||||||
чаев |
для |
определения |
вида |
вируса |
этим |
сп особом |
ц е |
|||||||||
л есообр азен метод им муноэлектронной микроскопии (наприм ер, для отличия У В К и А В К , S B K и М В К ). Н е редко электронная микроскопия применяется т а к ж е в сочетании с методом растений-индикаторов.
Д иагностику м икоплазм электронно-микроскопиче- ским способом проводят главным обр азом на ультратонких ср езах проводящ ей системы больных растений.
Анатомический метод Игель-Ланге реком ендован как дополнительны й прием диагностики скручивания листьев картоф еля. Д остоверность м етода составляет в
бреднем |
80— 85% . А нализирую т |
срезы ниж ней части |
клубня |
(на расстоянии 2 см от |
стол он а), окраш ивая |
их 1% -ным раствором резорцинового синего. Степень
каллозообразования оценивается по |
пятибалльной |
ш ка |
|||||
ле, где: |
|
|
|
|
|
|
|
1 — сл абое отлож ение каллозы |
на ситовидных |
|
п ла |
||||
стинках; |
|
|
|
|
|
|
|
2 — каллозны е отлож ения |
на ситовидных |
пластинках |
|||||
увеличены в 2 — 4 |
р аза |
по сравнению с клетками зд о р о |
|||||
вых растений; |
|
|
|
|
|
|
|
3 — увеличение |
каллозны х |
отлож ений в |
5 раз |
и |
б о |
||
лее, пробки видны |
при |
малом |
увеличении; |
|
|
|
|
4 — хорош о заметны |
часто |
попадаю щ иеся |
пробки |
(по |
|||
4 и более в поле зрения м икроскопа); |
|
|
|
||||
5 — пробки длинны е, |
заполняю щ ие ситовидны е |
т р уб |
|||||
ки почти полностью, при малом увеличении они видны
как сплош ны е |
тяж и голубого или |
синего цвета. |
|
У здоровы х |
растений |
клетки |
флоэмы нормальные; |
поперечные перегородки |
без утолщ ений. |
||
Система выращивания семенного картофеля на безвирусной основе
Система предусм атривает получение здорового ис ходного м атериала и его дальнейш ее разм нож ение с ис пользованием приемов защ иты от повторных зар аж ен ий .
|
Методы получения здорового исходного материала. |
В |
сем еноводстве картоф еля для получения безвирусно- |
го |
исходного м атериала использую т клоновый отбор в |
сочетании с серологическим и индикаторным м етодам и диагностики вирусов и м етод культуры верхуш ечной (апикальной) меристемы часто в сочетании с термоили хем отер ап и ей .. .
_ К л о н о в ы й о т б о р с и с п о л ь з о в а н и е м с е р о л о г и ч е с к о г о
и и н д и к а т о р н о г о м е т о д о в |
д и а г н о с т и к и |
в и р у с о в . |
О снова |
||||
этого |
м етода |
заклю чается |
в выявлении |
и отборе |
отдель |
||
ных |
безвирусны х растений с |
последую щ ей |
их |
вирусо |
|||
логической экспертизой в течение трех лет. |
Э тот м етод |
||||||
пригоден для |
сортов картоф еля, частично |
зар аж ен ны х |
|||||
вирусами. |
|
|
|
|
|
|
|
Клоновый |
(или индивидуальны й) отбор — это отбор |
||||||
клонов (т. е. |
потомства одного |
растения), |
обладаю щ и х |
||||
наиболее типичными сортовыми признаками и свободны х от заболеваний, передаваем ы х клубнями. Э тот м етод
ш ироко применялся в Голландии и других странах с вы сокоразвиты м картоф елеводством .
Б ольш ая р абота по соверш енствованию м етодов се меноводства картоф еля на безвирусной основе прове
дена и в |
наш ей стране. В частности, Всесою зны м науч |
||||||
но-исследовательским институтом |
защ иты растений бы |
||||||
ла показана |
возм ож ность получения безвирусной |
элиты |
|||||
ряда |
сортов |
картоф еля |
(П риекульский |
ранний, |
Берлн- |
||
хинген, С еверная Р оза, П ауль В агнер, |
К ам ераз |
1, С то |
|||||
ловый |
19) |
и |
предлож ена |
систем а |
клонового сем ен овод |
||
ства, |
ставш ая обязательной для |
всех элитовы ращ иваю |
|||||
щих хозяйств страны .
Методом клонового отбора с использованием сер о диагностики и индикаторного м етода были получены практически здоровы е сорта: П риекульский ранний, И з- стадес, О лев на П риекульской опытной станции; Сулев,
Ранний ж елты й |
на |
Иыгевской |
опы тной станции; |
Л орх |
||||||||||||
в С еверо-Восточном |
научно-исследовательском институ |
|||||||||||||||
те сельского хозяйства п в |
других учреж дениях. О здо |
|||||||||||||||
ровлены |
так ж е |
некоторы е сорта, |
возделы ваем ы е |
в |
бо |
|||||||||||
л ее ю жны х районах, например |
В олж анин |
(К уйбы ш ев |
||||||||||||||
ский научно-исследовательский институт |
сельского |
хо |
||||||||||||||
зяйства, |
С еверо-К авказский |
научно-исследовательский |
||||||||||||||
институт |
горного |
и |
предгорного |
сельского |
хозяй ства), |
|||||||||||
Ю бель (П олесская |
|
сельскохозяйственная |
опытная |
стан |
||||||||||||
ция) |
и др. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
П родуктйвность |
|
элиты, |
сф ормированной |
на |
основе |
|||||||||||
клоновых |
отборов, |
сопровож даю щ ихся |
вирусологиче |
|||||||||||||
ской |
экспертизой, |
|
по |
данным |
ряда |
авторов, на |
40% |
|||||||||
выше обычной. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
О днако в |
настоящ ее |
время |
основным |
методом |
полу |
|||||||||||
чения |
исходного |
здорового |
м атериала |
|
во |
многих |
стр а |
|||||||||
нах является |
м етод |
культуры |
верхуш ечной |
меристемы |
||||||||||||
с применением |
термо- |
и хем отерапии, |
а |
метод |
клоно- |
|||||||||||
вого отбора |
ш ироко |
используется |
при |
|
поддерж ании о з |
|||||||||||
доровленного |
м еристемного |
картоф еля |
в |
процессе |
его |
|||||||||||
дальнейш его |
разм нож ения. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
М е т о д к у л ь т у р ы в е р х у ш е ч н о й |
( а п и к а л ь н о й ) м е р и |
|||||||||||||||
ст ем ы |
в |
с о ч е т а н и и |
с т е р м о - |
и |
х е м о т е р а п и е й . В связи с |
|||||||||||
полной зараж енностью |
многих |
сортов |
как |
старой |
сел ек |
|||||||||||
ции, так и вновь районированны х отобрать среди них
здоровы е растения путем |
клонового отбор а с- прим ене |
|
нием |
серодиагностики н |
индикаторного м етода практи |
чески |
невозм ож но. |
|