повітря, щоб підтримувати повітряний баланс у приміщенні. Бокс необхідно увімкнути як мінімум за 5 хвилин до початку роботи, а після її закінчення необхідно залишити його в робочому положенні також упродовж 5 хвилин для «очищення», тобто видалення контамінованого повітря, що міститься в боксі. Всі ремонтні роботи щодо БББ повинні проводитися кваліфікованим персоналом. Про будь-які несправності в роботі БББ необхідно повідомляти уповноважених осіб, починати роботу в ньому можна лише після усунення несправностей.
Лампи ультрафіолетового світла
Такі лампи не потрібні в БББ. Якщо ж вони використовуються, то їх необхідно щотижня очищати від пилу, який може знижувати бактерицидну ефективність ультрафіолетового випромінювання. Під час повторної сертифікації боксу потрібно перевірити інтенсивність ультрафіолетового випромінювання і забезпечити його відповідність нормам. Лампи ультрафіолетового світла необхідно вимикати, коли в приміщенні хтось перебуває, щоб захистити очі та шкіру від випадкового негативного впливу.
Відкрите полум’я
Необхідно уникати наявності відкритого полум’я поблизу вільного від мікробів простору всередині БББ. Відкрите полум’я порушує структуру потоку повітря і може бути небезпечним, якщо при цьому використовуються леткі займисті речовини. Для стерилізації бактеріологічних петель більш прийнятним є використання мікроспалювачів або електричних грубок.
Розлиття
Якщо біологічно небезпечний матеріал розлився у БББ, необхідно негайно почати процедуру очищення при працюючому боксі. Потрібно використовувати ефективний дезінфекційний засіб і застосовувати його таким чином, щоб звести до мінімуму утворення аерозолю. Всі матеріали, що мали контакт із розлитою речовиною, повинні бути продезінфіковані і/або оброблені в автоклаві.
Сертифікація
Функціонування й неушкодженість кожного БББ повинні бути сертифіковані відповідно до міжнародних стандартів під час установлення і потім сертифікуватися повторно на регулярній основі
80
кваліфікованим персоналом відповідно до інструкцій заводувиробника.
Чищення та дезінфекція
Поверхні всіх предметів усередині БББ, включаючи обладнання, повинні деконтамінуватися і видалятися з боксу після закінчення роботи. Внутрішні поверхні БББ необхідно деконтамінувати перед кожним використанням. Робочу поверхню і стінки необхідно протирати дезінфекційним засобом, що вбиває всі мікроорганізми, які можуть залишитися всередині боксу. В кінці робочого дня остаточна деконтамінація поверхні повинна передбачати протирання робочої поверхні, стінок і внутрішньої поверхні скла. Для цього необхідно використовувати розчин хлорного вапна або 70 % розчин спирту, якщо вони ефективні проти цільових мікроорганізмів. Друге промивання стерильною водою необхідне в разі використання такого дезінфекційного агента, як розчин хлорного вапна. Бокс рекомендується залишати в робочому стані. В іншому разі перш ніж його вимкнути, необхідно залишити його в робочому стані упродовж ще 5 хвилин для того, щоб видалити повітря, яке знаходиться в ньому.
Деконтамінація
БББ необхідно деконтамінувати до заміни фільтрів і до будьякого переміщення. Найпоширенішим методом деконтамінації є фумігація парами формальдегіду. Деконтамінація БББ повинна проводитися кваліфікованим персоналом.
Засоби індивідуального захисту
При будь-якому використанні БББ необхідно одягати індивідуальне захисне вбрання. Лабораторні халати є прийнятними для роботи з матеріалами 1-го і 2-го рівнів біонебезпеки. Зроблений із міцного матеріалу лабораторний одяг, який застібається ззаду, забезпечує кращий захист, і його потрібно використовувати під час роботи з матеріалами 3-го і 4-го рівнів небезпеки (винятком є лабораторії, в яких передбачена робота у спецодязі). Рукавички необхідно одягати на манжети рукавів, а не залишати їх під ними. Для захисту рукавів одягу дослідника можна надіти нарукавники. Для деяких процедур можуть знадобитися маски й захисні окуляри.
Сигналізація
81
БББ можуть бути обладнані одним із двох видів сигналізації. Віконна сигналізація встановлюється лише на бокси з підйомними рамами. Тривожний сигнал означає, що оператор установив підйомну раму в неправильне положення. Відповіддю на цей попереджувальний сигнал є повернення підйомної рами у правильне положення. Сигналізація повітряного потоку свідчить про припинення нормального режиму потоку повітря в боксі, що попереджає про негайну небезпеку для оператора або препарату. Якщо буде подано тривожний сигнал про порушення повітряного потоку, роботу необхідно негайно припинити і повідомити керівника лабораторії. Детальна інформація про подальші дії повинна міститися в інструкції заводу-виробника. Цей аспект повинен включатися до навчальної підготовки з використання БББ.
Додаткова інформація
Вибір правильного виду БББ, його монтаж, правильне використання і щорічна сертифікація його роботи – процеси досить складні. У зв’язку з цим рекомендується, щоб вони виконувалися під наглядом добре підготовленого і досвідченого фахівця з питань біобезпеки. Оператори повинні пройти офіційну підготовку з питань функціонування і використання БББ.
Правила користування БББ
1.Правила використання боксів повинні бути пояснені всім потенційним користувачам. Персоналу необхідно роздати письмові протоколи або керівництва з безпеки чи експлуатації.
2.Бокс можна використовувати лише за умови, що він перебуває у робочому стані.
3.Скляну оглядову панель не можна відкривати під час використання боксу. Необхідно тримати мінімум апаратури та матеріалів у боксі. Не можна перекривати циркуляцію повітря біля заднього відсіку.
4.У боксі не можна використовувати бунзенівські спиртівки. Виділюване тепло може порушити повітряний потік і пошкодити фільтри. Допускається використання електричного мікроспалювача, але краще користуватися стерильними одноразовими петлями для пересівання.
82
5.Усі роботи повинні проводитися у середній або задній частині боксу і повинні бути видимими через оглядову панель.
6.Необхідно звести до мінімуму переміщення позаду оператора.
7.Оператор не може порушувати повітряний потік, неодноразово виймаючи і знову вводячи руки в бокс.
8.Жодна решітка не повинна блокуватися записами, піпетками або іншими матеріалами, оскільки це порушує повітряний потік і може викликати контамінацію матеріалу й оператора.
9.Поверхню боксу біологічної безпеки необхідно протирати відповідним дезінфекційним засобом після закінчення роботи й у кінці дня.
10.Вентилятор боксу повинен працювати принаймні упродовж 5 хвилин до початку роботи і після завершення роботи в боксі.
11.Документи ніколи не можна поміщати всередину боксів біологічної безпеки.
3.10.Використовування центрифуг
1.Необхідною умовою забезпечення мікробіологічної безпеки при використанні лабораторних центрифуг є їх задовільні механічні характеристики.
2.Центрифуги повинні використовуватися відповідно до інструкцій виробника.
3.Центрифуги повинні встановлюватися на такому рівні, щоб оператор міг бачити внутрішню частину камери і правильно встановити цапфи та стакани.
4.Центрифужні пробірки та контейнери зі зразками, що підлягають центрифугуванню, повинні бути виготовлені з товстого скла або пластмаси і перед використанням перевірені на наявність дефектів.
5.Пробірки та контейнери зі зразками для центрифугування завжди повинні бути щільно закриті (по можливості кришками, що закручуються).
6.Стакан центрифуги необхідно завантажувати, врівноважувати, герметично закривати і розвантажувати в боксі біологічної безпеки.
7.Центрифужні стакани і цапфи повинні бути з’єднані за вагою і відповідним чином урівноважені разом зі встановленими пробірками.
83
8.Відстань між рівнем рідини в центрифужній пробірці до її краю повинна бути зазначена в інструкціях виробника.
9.Для балансування порожніх стаканів необхідно використовувати дистильовану воду або спирт (70 % етанол). Не можна застосовувати сольові або хлоровмісні розчини, оскільки вони викликають корозію металів.
10.Для роботи з мікроорганізмами необхідно використовувати центрифужні стакани з герметично закритими кришками («чашками безпеки»).
11.При використанні роторів центрифуги з кутовими насадками необхідно особливу увагу звернути на те, щоб не перевантажити пробірку, оскільки в цьому випадку вона може протекти.
12.Внутрішню поверхню центрифужної камери потрібно щодня оглядати для виявлення плям або бруду на рівні ротора. За наявності таких зареєстровані результати центрифугування необхідно переглянути.
13.Центрифужні ротори і стакани потрібно щодня оглядати на наявність можливої корозії і тріщин.
14.Стакани, ротори і центрифужні ємності необхідно деконтамінувати після кожного використання.
15.Після використання стакани необхідно зберігати у вертикальному положенні для того, щоб використана для балансування рідина могла повністю витікати.
16.При центрифугуванні можуть утворюватися зависі частинок інфекційних матеріалів у повітрі. Ці частинки переміщаються занадто швидко і не можуть бути віднесені потоком повітря, якщо центрифуга поміщена в БББ I або II класу з відкритою передньою частиною. Запобігти поширенню аерозолів можна, помістивши центрифугу в БББ
III класу. Проте правильні методи центрифугування і щільно закриті пробірки забезпечують достатній захист від інфекційних аерозолів та поширення частинок.
3.11.Використовування гомогенізаторів, шейкерів, міксерів та ультразвукових подрібнювачів (сонікаторів)
1.Домашні (кухонні) гомогенізатори не повинні використовуватися в лабораторіях, оскільки вони можуть протікати
84