24. Стерилизация сухим жаром

Метод основан на бактерицидном действии нагретого до 165-170С воздуха в течение 45 мин. Аппаратура: сухожаровой шкаф (печь Пастера). Печь Пастера – металлический шкаф с двойными стенками, обшитый снаружи материалом, плохо проводящим тепло (асбест). Нагретый воздух циркулирует в пространстве между стенками и выходит наружу через специальные отверстия. При работе необходимо строго следить за нужной температурой и временем стерилизации. Если температура будет более высокой, то произойдет обугливание ватных пробок, бумаги, в которую завернута посуда, а при более низкой температуре требуется более длительная стерилизации. По окончании стерилизации шкаф открывают только после его остывания, иначе стеклянная посуда может потрескаться из-за резкой смены температуры. Материал и режим стерилизации: а) стеклянные, металлические, фарфоровые предметы, посуда, завернутые в бумагу и закрытые ватно-марлевыми пробками для сохранения стерильности (165-170С, 45 мин); б) термостойкие порошкообразные лекарственные средства - тальк, белая глина, окись цинка (180-200С, 30-60 мин); в) минеральные и растительные масла, жиры, ланолин, вазелин, воск (180-200С, 20- 40 мин).

25. Стерилизация паром под давлением.

Стерилизация паром под давлением. Наиболее эффективный и широко применяемый в микробиологической и клинической практике метод. Метод основан на гидролизующем действии пара под давлением на белки микробной клетки. Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает высокую эффективность этой стерилизации, при которой погибают самые стойкие споровые бактерии. Аппаратура – автоклав. Автоклав состоит из 2-х металлических цилиндров, вставленных друг в друга с герметически закрывающейся крышкой, завинчивающейся винтами. Наружный котел – водопаровая камера, внутренний – стерилизационная камера. Имеется манометр, паровыпускной кран, предохранительный клапан, водомерное стекло. В верхней части стерилизационной камеры – отверстие, через которое пар проходит из водопаровой камеры. Манометр служит для определения давления в стерилизационной камере. Между давлением и температурой существует определенная зависимость: 0,5 атм - 112С, 1-01,1 атм – 119-121С, 2 атм - 134С. Предохранительный клапан – для защиты от чрезмерного давления. При повышении давления выше заданного, клапан открывается и выпускает лишний пар. Порядок работы. В автоклав наливают воду, уровень которой контролируют по водомерному стеклу. В стерилизационную камеру помещают материал и плотно завинчивают крышку. Паровыпускной кран открыт. Включают нагрев. После закипания воды кран закрывают лишь тогда, когда будет вытеснен весь воздух (пар идет непрерывной сильной сухой струей). Если кран закрыть раньше, показания манометра не будут соответствовать нужной температуре. После закрытия крана, в котле постепенно повышается давление. Начало стерилизации – тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. По истечении срока стерилизации прекращают нагрев и охлаждают автоклав до возвращения стрелки манометра к 0. Если выпустить пар раньше, жидкость может вскипеть из-за быстрой смены давления и вытолкнуть пробки (стерильность нарушается). Когда стрелка манометра вернется к 0, осторожно открывают паровыпускной кран, спускают пар и затем вынимают стерилизуемые объекты. Если не выпустить пар после возвращения стрелки к 0, вода может конденсироваться и смочить пробки и стерилизуемый материал (стерильность нарушится). Материал и режим стерилизации: а) стеклянная, металлическая, фарфоровая посуда, белье, резиновые и корковые пробки, изделия из резины, целлюлозы, древесины, перевязочный материал (вата, марля) (119 - 121С, 20-40 мин)); б) физиологический раствор, растворы для инъекций, глазные капли, дистиллированная вода, простые питательные среды - МПБ, МПА(119-121С, 20-40 мин); в) минеральные, растительные масла в герметически закрытых сосудах (119-121С, 120 мин);

26. Дробные методы стерилизации

Тиндализация - метод дробной стерилизации при температуре ниже 100С. Она используются для стерилизации объектов, которые не выдерживают 100С: сыворотка, асцитическая жидкость, витамины. Тиндализация проводится в водяной бане при 56С по 1 часу 5-6 дней.

Пастеризация - частичная стерилизация (споры не погибают), которая проводится при относительно низкой температуре однократно. Пастеризацию проводят при 70-80С, 5-10 мин или при 50-60С, 15-30 мин. Пастеризация используется для объектов, теряющих свои качества при высокой температуре. Пастеризацию, например, используют для некоторых пищевых продуктов: молока, вина, пива. При этом не повреждается их товарная ценность, но споры остаются жизнеспособными, поэтому эти продукты нужно хранить на холоде.

Стерилизаторы и шкафы с электрич обогревом снабжены тер­морегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необход т. Подготовка посуды. Посуда перед стерилизацией д б тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохр стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употр. В верх­ концы пипеток вставляют ватные тампоны. Торчащие из пипеток волокна ваты сжигают в пламени горелки. Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4-5 см. Обмотку начинают с оттянутого конца и постепен­ным движением бумаги по спирали заканчивают у конца с ватным тампоном. Завернутые пипетки для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов перед стерилизацией упаковывают по несколько штук вместе или помещают в спе­ц металлич или картонные пеналы. Чашки Петри обычно заворачивают в пакеты по 2-4 штуки, шпатели — по отдельности, затем, как и пипетки, их объединяют в общий сверток. Колбы, пробирки и трубки Бурри закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли. Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в сте­рилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого ма­териала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во вр работы д б плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за т, т к при ее понижении не осущ стерилизация, а при нагреве выше 180 °С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилиза­ции шкаф не открывают до тех пор, пока т в нем не упадет до 80 °С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материа­ла, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего выгружать посуду, когда т в стерилизаторе сравняется с комнатной. Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. В автоклаве посуда увлажняется.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ Мелкие металлич инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели — стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрас­на) непосредственно перед испол. На пламени кратковр об­жигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные кл, и споры микроорг.

27. Методы частичного обеспложивания.

кипячение - погибают только вегетативные формы бактерий, споры могут выживать; метод применяется для обработки игл, инструментов многоразового использования (кипячение в течение 30 минут с добавлением в воду 1% бикарбоната натрия), для обработки некоторых инъекционных растворов (не переносящих автоклавирования), которые до стерилизации должны отвечать очень высокому стандарту чистоты. Для стерилизации питательных сред этот метод не применяется.

+Фильтрование - освобождение жидкостей от микробов в тех случаях, когда материал не может быть подвергнут нагреванию (сыворотка, ряд лекарственных растворов). Фильтры имеют настолько малые поры, что задерживают микробы, но вирусы проникают через них. Поэтому фильтрат от вирусов не освобождается. Фильтрование производится или под повышенным давлением, и жидкость нагнетается через поры, или создается разрежение, и жидкость всасывается через фильтр в приёмник. Стерильность профильтрованной жидкости проверяется путем посева её на питательную среду. Фильтры и приёмники должны быть стерильными.

Пастеризация - способ основан на том, что при нагревании до 50-60С в течение 30 минут, или 70-80С – в течение 5-10 минут, или 90С - 2 минуты погибает большинство бесспоровых микробов. Споры остаются жизнеспособными. Метод применяется для пастеризации молока, вина, компотов и т д. Пастеризованные продукты нужно хранить на холоде, чтобы не проросли споры.

28. Методы контроля стерилизации.

В связи с распространением в последние годы микроорганизмов, высоко резистентных к действию факторов окружающей среды, ужесточаются способы стерилизации и контроля ее качества. Для контроля стерилизации используются:

1. Физические методы – максимальные и контактные термометры.

2. Химические вещества как температурные индикаторы. Это порошкообразные вещества со строго определенной температурой плавления: бензонафтол(110С), антипирин (113С), резорцин и сера (119С), бензойная кислота (120С). Эти вещества смешивают с небольшим количеством сухой анилиновой краски (фуксин, метиленовый синий) и помещают в запаянные стеклянные трубочки, которые укладывают между стерилизуемыми предметами. Этот метод используют для контроля режима стерилизации в автоклаве. Если температура в автоклаве была достаточной, вещество в трубочке плавится и окрашивается в цвет красителя, который растворяется в этом веществе.

3. Биологические методы – использование термостойкой спорообразующей тест культуры – Bacillus stearothermophilus. Его споры погибают при 121С за 15 мин при их содержании в 1 мл среды 106 клеток. Биологический тест используют для контроля режима стерилизации в печи Пастера. Пробирки с полосками марли, фильтровальной бумаги, с шелковой нитью, зараженные спорами, помещают в шкаф между стерилизуемыми предметами. После стерилизации в пробирку вносят питательный бульон и наблюдают за ростом микроорганизмов.

29. Дезинфицирующие вещества, механизм их действия. Консерванты.

Дезинфекция – уничтожение патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды для прерывания путей передачи инфекции с помощью химических веществ. Химические вещества, которые используются для дезинфекции, называются дезинфицирующими веществами. Они нарушают физико-химическую структуру микробной клетки. По механизму действия дезинфицирующие вещества делят на следующие группы:

1.Окислители – повреждают сульфгидрильные группы белков. К ним относятся галогены (хлор, бром, йод) и их соединения, перекись водорода, перманганат калия.

2. Поверхностно-активные вещества – повреждают клеточную стенку. К ним относятся бактерицидные мыла, сульфонол, амфолан, твины.

3. Соли тяжелых металлов – вызывают коагуляцию белков, образование нерастворимых альбуминатов. К ним относятся соли ртути, серебра, меди, свинца. Их применение ограничено при наличии дополнительных белков, которые затрудняют доступ к возбудителю.

4. Фенол, крезол и их производные – повреждают клеточную стенку, растворяют липиды цитоплазматической мембраны, нарушая ее полупроницаемость, а затем повреждают белки, вызывая гибель микробов.

5. Щелочи, известь – приводят к набуханию и растворению белков. Их применение ограничено из-за повреждающего действия на различные предметы (посуду). 6. Красители – обладают сродством к фосфорнокислым группам, повреждают нуклеопротеиды и вызывают гибель микроорганизмов. К ним относятся бриллиантовый зеленый, метиленовый синий, риванол, трипофлавин и др. К наиболее распространенным дезинфицирующим веществам относятся хлорная известь (0,1 –10% р-р), хлорамин (0,5 – 5% р-р), фенол (3-5% р-р). лизол (3-5% р-р). двутретьосновная соль гипохлората кальция (ДТСГК (0,1-10% р-р). 0,1 – 0,2% р-р сулемы и др. соединения ртути, 70 этиловый спирт. В микробиологической практике дезинфицирующие вещества используют для обработки посуды (пипетки, предметные стекла и пр.), рабочего места, рук и др. Выбор дезинфицирующего вещества, длительность его воздействия определяется особенностями микроорганизма и той средой, в которой он находится (например, мокрота).

10) Санитарно-показательные микроорганизмы. Какие патогенные микроорганизмы могут длительно сохраняться в почве?

1. Возбудители ботулизма, актиномицеты, грибы - возбудители микозов.

2. Спорообразующие бациллы и клостридии, которые попадают в почву с выделениями человека и могут длительно здесь сохраняться в виде спор ( возбудители сибирской язвы, клостридии столбняка и газовой анаэробной инфекции)

3. Неспорообразующие бактерии, вирусы, попадающие в почву с выделениеми человека и животных и сохраняющиеся в почве несколько дней и месяцев.

31. Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах. Санитарнопоказательные микроорганизмы для почвы, воды, воздуха.

для почвы: Escherichia coli, Clostridium perfringens, Streptococcus faecalis

Для воды Escherichia coli

Для воздуха закрытых помещений Staphylococcus aureus, Streptococcus viridans

32. Микробиологические исследования в аптечных учреждениях: объекты, отбор проб, методы исследования. Какие показатели определяются?

1. Дистиллированная вода, используемая для изготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель). Пробы отбирают в количестве 300 мл в стерильные бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки (или трубопровода), конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри, затем заливают растопленным МПА. После застывания агара чашки выдерживают сутки при 37ºС и ещё сутки при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и 39 внутри питательной среды. При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 мл исследуемой воды на 2 чашки со средой Сабуро и инкубируют при 20-22ºС в течение 3-4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках. Результаты оценивают путём суммирования числа бактерий и грибов. Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) проводится по методике для питьевой воды. Оценка результатов проводится в соответствии с требованиями ГОСТ «Вода питьевая».

2. Дистиллированная вода для приготовления инъекционных растворов и глазных капель. Инъекционные растворы до стерилизации. Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах. Пробы дистиллированной воды отбирают в стерильные флаконы в количестве 15-20 мл. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее 1,5 часов, и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации. Глазные капли доставляют в аптечной упаковке. Определение количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов проводят так же, как в предыдущем исследовании. Определение наличия БГКП в 1 мл проводится следующим образом. Исследуемый материал в количестве 1 мл засевают в 9 мл разведённой среды Эйкмана. Посевы выращивают при 37ºС в течение суток, затем высевают на среду Эндо и после суточного инкубирования чашек при 37ºС отбирают на чашках подозрительные колонии бактерий и определяют их принадлежность к БГКП. Количественное определение БГКП проводится следующим образом. 1 мл исследуемого материала наливают в стерильную чашку Петри и заливают растопленной средой Эндо. После застывания среды её инкубируют при 37ºС в течение суток и учитывают количество типичных колоний. Предельно допустимые количества микроорганизмов в 1 мл: дистиллированная вода, используемая сразу же после перегонки, не более 15, используемая после стерилизации для изготовления асептическим способом глазных капель - не более 3, растворы для инъекций до стерилизации не позднее 1,5 часов после изготовления – не более 30. Наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки и протея в данной группе исследуемых материалов недопустимо.

3. Инъекционные растворы и глазные капли после стерилизации доставляются для исследования в аптечной упаковке. Материалы этой группы должны быть стерильными.

4. Отбор сухих лекарственных веществ производят по показаниям. Стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории отбирают 30-50 г вещества. Если вещество таблетированное, отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в таком же количестве.

30. Экология микробов. Микрофлора воды, воздуха, почвы. Роль микробов в круговороте веществ в природе.

Микрофлора воздуха: какие микробы чаще всего встречаются, как меняется микрофлора в зависимости от условий.

 Обнаруживаются кокковидные и палочковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы. Воздух рассматривают как фактор передачи респираторных инфекций, при которых возбудитель передается воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем. Солнечные лучи и другие факторы способствуют гибели микрофлоры воздуха. Воздух может служить фактором передачи патогенных микробов - стафилококков, стрептококков, палочек дифтерии, кокклюша, туберкулеза, вирусов кори и гриппа.

Микрофлора меняется в зависимости от микрофлоры поверхности данного участка земли, климатических условий, времени года и других факторов. Чем больше в воздух попадает с поверхности земли пыли, тем больше в нем микробов. Воздух густонаселенных местностей и особенно крупных городов обычно богат микроорганизмами, гораздо меньше загрязнен воздух сельской местности. Количество микроорганизмов, находящихся в воздухе, заметно уменьшается по мере удаления от населенных мест. Зимой в воздухе микробов находится гораздо меньше, чем летом.

Микрофлора воды: происхождение, зависимость микрофлоры от условий.

Состав микрофлоры воды зависят от химического состава воды, температуры, содержания CO 2 и O 2 , рН, облучения солнечными лучами, содержания питательных веществ, флорой и фауной, глубиной водоёма, выпуском сточных и промышленных вод. В пресных водоёмах (реки, озёра) нормальными обитателями являются Micrococcus roseus и др. микрококки, Pseudomonas fluorescens , извитые формы ( Sp . rubrum ).

В водах пресных водоемов обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдомонады), кокковидные (микрококки) и извитые. Загрязнение воды органическими веществами сопровождается увеличением анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов. Микрофлора воды выполняет роль активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые утилизируются микроорганизмами. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, энтерококки) и возбудители кишечных инфекций,(брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры и др.). Т.о., вода является фактором передачи возбу- дителей многих инфекционных заболеваний. Вода артезианских скважин практически не содержит микроорганизмов.

Почва является основной средой обитания многих микроорганизмов, с растениями и животными биогеоценоз. Микрофлора почвы принимает активное участие в процессах формирования и самоочищения, а также в круговороте веществ в природе (азота, углерода, серы, железа и других соединений). Значение - микробы осуществляют разложение и минерализацию органических животных и растительных остатков, осуществляют очищение от нечистот и отбросов. Микрофлора почвы по количественному и видовому составу значительно колеблется в зависимости от региональных и климатических условий, химического состава и физических свойств почвы, реакции (рН), температуры, влажности, степени аэрации. Микроорганизмы распространены по горизонтам почвы неодинаково. Меньше всего микроорганизмов содержится обычно в самом поверхностном слое почвы толщиной несколько миллиметров, где они подвергаются неблагоприятному воздействию солнечного света и высушиванию. Чем глубже почвенные горизонты, тем беднее они органическими веществами, доступ воздуха в них затруднен, поэтому здесь численность анаэробных бактерий увеличивается. Микрофлора почвы представлена разнообразными видами бактерий, актиномицетов, грибов, водорослей и простейших животных.К постоянным обитателям почвы относятся различные гнилостные, преимущественно спорообразующие, аэробные и анаэробные бактерии; бактерии, разлагающие клетчатку; нитрифицирующие, денитрифицирующие, азотфикси-рующие, серо- и железобактерии.