Материал: Биоиндикация. Микробиологические методы исследования экосистем (90

п. 1.1.3). Для определения числа клеток в 1 г почвы (NАz , КОЕ/г почвы) проводят расчеты в соответствии с п. 1.1.4.

После подсчета колоний измеряют их диаметр. Для этого берут чашки с оптимальным числом колоний, которые использовали для определения численности бактерий рода Azotobacter. Если какая-либо колония имеет неправильную форму, то рассчитывают среднее значение ее диаметра из нескольких измерений. Результаты измерений заносят в таблицу (табл. 6).

Таблица 6

Результаты измерений диаметра колоний бактерий р. Azotobacter

После измерения диаметров всех колоний находят среднее значение диаметров (Dср) по формуле:

Dср = ( ∑di / i ) + m [мм],

где ∑di – сумма диаметров всех колонии, i – количество колоний, m –стандартная ошибка.

Стандартную ошибку определяют точно так же, как указано в п. 1.1.4.

2.1.4. Определение коэффициента влияния

Степень влияния изучаемого образца почвы на скорость роста колоний бактерий рода Azotobacter оценивают по отношению среднего значения диаметров колоний в опытных вариантах к среднему значению диаметров колоний в контроле:

КВ = Dоп / Dконтр ,

где КВ – коэффициент влияния; Dоп – среднее значение диаметров колоний в опытном образце почвы; Dконтр – среднее значение диаметров колоний в контрольном образце.

26

Если К=1, то изучаемый опытный образец почвы не оказывает влияния на скорость роста колоний тест-организма по сравнению с контрольным образцом. Если К < 1 – действие ингибирующее, при К > 1 наблюдается стимуляция. Сопоставляя коэффициенты влияния различных почвенных образцов, можно получить данные об их сравнительной токсичности.

2.1.5. Обобщение полученных результатов

Все результаты заносят в таблицу (табл. 7).

Таблица 7

Некоторые показатели роста и развития бактерий р. Azotobacter в анализируемых почвенных образцах

На основании полученных результатов по изучению популяции Azotobacter определить, какой из почвенных образцов обладает наибольшей биологической токсичностью. Установить, имеются ли среди изученных почв такие, которые снижают показатели роста и развития на 50% (LD50)8 и которые обладают биоцидными9 свойствами (LD100).

Тема3.Оценка состояния окружающей среды

с помощью санитарно­показательных

микроорганизмов

К санитарно-показательным микроорганизмам относят представителей облигатной микробиоты человека и животных, обитающих в кишечнике или респираторном тракте. С экскретами

8Летальная доза (от лат. letalis – смертельный) – доза какого-либо химического или физического агента, воздействие которой на живой орга-

низм приводит к смертельному исходу. LD50 – полулетальная (средняя летальная) доза. Один из наиболее широко применяемых показателей опасности токсичных веществ.

9Биоцидный (от греч. bios – жизнь и лат. caedo – убиваю) – уничтожающий все живое.

27

организма они попадают во внешнюю среду, где определенное время сохраняют жизнеспособность. Обнаружение санитарнопоказательных микроорганизмов в окружающей среде косвенно указывает на возможное присутствие патогенных микробов, выделяющихся из организма теми же путями. Таким образом, сани- тарно-показательные микроорганизмы являются не только индикаторами загрязнения окружающей среды выделениями человека и животных, но и показателем ее эпидемической опасности (безопасности).

Определение санитарно-показательных микроорганизмов может проводиться качественно и количественно. Качественная

оценка подразумевает определение наличия или отсутствия сани- тарно-показательных микроорганизмов. Подобные исследования проводят, когда объекты вообще не должны содержать данные микроорганизмы и когда необходим ориентировочный анализ. При количественной оценке выявляют степень обсеменения са- нитарно-показательными микроорганизмами, сравнивают ее с установленными нормативами и на основании этого дают заключение об эпидемической опасности (безопасности) исследуемого объекта [12, 13].

3.1. Лабораторнаяработа4

Оценка санитарно­гигиенического состояния объектов рабочей зоны

Объекты рабочей зоны подвергают санитарно-микробиологи- ческому обследованию, поскольку

1)их микробное обсеменение четко отражает гигиеническое состояние среды, непосредственно окружающей человека в течение рабочего дня;

2)такие объекты могут служить посредниками при передаче возбудителей многих инфекционных заболеваний.

Важнейшим источником микробного обсеменения таких объектов является человек. Большое количество разнообразных микроорганизмов попадает на них также из воздуха, возможно загрязнение насекомыми и т. п.

При санитарно-микробиологическом обследовании объектов рабочей зоны обычно устанавливают присутствие и количество санитарно-показательных микроорганизмов – индикаторов того

28

или иного вида загрязнения, тогда как их общее микробное обсеменение может представлять интерес лишь в немногих случаях.

Цель работы – оценка санитарно-гигиенического состояния различных объектов в учебных лабораториях и вспомогательных помещениях с помощью санитарно-показательных микроорганизмов.

Задачи:

1.Определить присутствие в исследуемом объекте санитар- но-показательных микроорганизмов – индикаторов воздушнокапельного загрязнения окружающей среды.

2.Определить присутствие в исследуемом объекте санитар- но-показательных микроорганизмов – индикаторов фекального загрязнения окружающей среды.

3.Определить присутствие в исследуемом объекте санитар- но-показательных микроорганизмов – индикаторов загрязнения окружающей среды разлагающимися органическими веществами.

4.На основании проведенных исследований дать предварительную санитарно-гигиеническую оценку исследуемого объекта.

Для выполнения данной работы отводится два занятия. На первом занятии студенты проводят отбор проб и делают все необходимые посевы (п. 3.1.1–3.1.2). На следующем – проводят анализ посевов и оценивают санитарно-гигиеническое состояние исследуемых объектов (п. 3.1.3–3.1.4).

Порядок выполнения лабораторной работы

3.1.1. Методы отбора проб

Наиболее простыми и удобными методами отбора проб с поверхностей являются метод смывов и метод отпечатков.

Метод смывов

Смывы производят с различных поверхностей увлажненными стерильными ватными тампонами, которые закреплены на стеклянных или металлических палочках и вмонтированы в пробирки с ватно-марлевыми пробками.

В пробирки наливают 5 мл стерильной воды (9%-го раствора NaCl или 1%-й пептонной воды) и закрывают пробками таким образом, чтобы тампоны не касались жидкости. Непосредственно перед взятием смыва тампон опускают в жидкость для увлажне-

29

ния. В процессе отбора смывов рекомендуется неоднократное смачивание тампонов.

С крупных предметов смывы берут по возможности в нескольких местах с общей площади не менее 100 см2 , тщательно протирая поверхность. Небольшие объекты протирают со всех сторон. При обследовании столовых приборов смывы берут со всей поверхности трех однотипных предметов. У тарелок протирают всю внутреннюю поверхность; у вилок, ложек, ножей протирают всю рабочую поверхность и наружный край высотой 2 см. При взятии смывов с рук увлажненным тампоном проводят по 5 штрихов по ладонным поверхностям обеих рук, включая пальцы. Затем этим же тампоном протирают межпальцевые промежутки, ногти и подногтевые пространства. После отбора проб тампон помещают в ту же пробирку, тщательно встряхивают и доставляют в лабораторию. В лаборатории проводят посевы на различные дифференциально-диагностические среды для обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов.

Метод отпечатков

Применяется для определения биологической контаминации ровной гладкой поверхности (как горизонтальной, так и вертикальной). Наиболее удобными для этих целей являются бакпечатки промышленного производства. При проведении исследования бакпечатку с требуемой плотной диагностической средой извлекают из контейнера, прикладывают поверхностью среды к исследуемому объекту и вновь вставляют в контейнер. При отборе проб с помощью этого метода никаких дополнительных посевов проводить не требуется. Использованные бакпечатки помещают в термостат. Время и температура инкубации зависит от того, присутствие какого санитарно-показательного микроорганизма требуется установить.

3.1.2.Посевы на дифференциально-диагностические среды для обнаружения санитарно-показательных

микроорганизмов

Посевы выполняют для обнаружения трех групп санитарнопоказательных микроорганизмов: индикаторов воздушно-капель- ного, фекального загрязнения и загрязнения разлагающимися органическими веществами.

30