Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Разведения сыворотки |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
контроль |
|
антигена |
|||||||
|
|
|
|
|
|
||
Физиологический раствор |
- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Сыворотка больного |
0,5 |
0,5 |
- |
- |
- |
- |
|
в разведении 1:25 |
|||||||
|
|
|
|
|
|
||
Диагностикум O (H) |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Во второй пробирке сыворотку смешать с физиологическим раствором и 0,5 мл перенести в третью, снова перемешать и 0,5 мл смеси перенести из третьей пробирки в четвертую, а из четвертой - таким же способом в пятую. После перемешивания из пятой пробирки 0,5 мл смеси удалить в банку с раствором хлорамина.
Впробирки первого ряда добивать по 0,5 мл брюшнотифозного O-диагностикума, а
впробирки второго ряда - по 0,5 мл брюшнотифозного Н-диагностикума. Предварительные результаты реакции учесть после 2-часового инкубирования пробирок в термостате при 37ºC, а окончательные - на следующем занятии, после суточного выдерживания при комнатной температуре.
Произвести учет результатов реакции Видаля по четырехкрестной системе с "О"- и "Н"-диагностикумами. Результаты реакции и заключение записать в тетрадь.
Результаты реакции Видаля
Разведение |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
контроль |
|
сыворотки |
|||||||
|
|
|
|
|
|
||
―O‖-диагностикум |
|
|
|
|
|
|
|
―H‖-диагностикум |
|
|
|
|
|
|
Заключение___________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
6. Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).
8. Приготовить взвесь испражнений больного в физиологическом растворе в соотношении 1:10, профильтровать через ватно-марлевый фильтр и произвести посев взвеси на среду обогащения (магниевая среда) и на дифференциально-диагностические среды Плоскирева или Эндо и висмут-сульфит-агар. Поместить посевы в термостат.
Контрольные вопросы
Чем отличаются сальмонеллы брюшного тифа от сальмонелл паратифов А и В по биохимическим свойствам? Какова антигенная структура сальмонелл?
Какие микробиологические методы используются для диагностики брюшного тифа и паратифов? Какой материал берется от больного для ранней диагностики брюшного тифа и как этот материал исследуется?
Почему при серологической диагностике брюшного тифа используются "О" и "Н" - антигены? Какое значение имеет исследование испражнений при брюшном тифе и паратифах?
Каков порядок исследования испражнений?
Как производится идентификация выделенных чистых культур возбудителей брюшного тифа? Как определяются серологическая группа и серотип сальмонелл?
Как осуществляется фаготипирование брюшнотифозных бактерий и в чем заключается значение этого метода?
Какой материал берется для бактериологического исследования на брюшнотифозное бактерионосительство и каким образом он исследуется?
Как осуществляется серологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства? Каковы особенности патогенеза брюшного тифа?
Какие существуют иммунопрепараты для профилактики брюшного тифа и паратифов? В чем суть иммунофлуоресцентного метода диагностики брюшного тифа?
43
Какие микроорганизмы чаще всего вызывают пищевые токсикоинфекции? Какие условия способствуют возникновению пищевых токсикоинфекций?
Какие сальмонеллы чаще всего оказываются возбудителями пищевых токсикоинфекций?
Каковы морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
Каковы особенности патогенеза пищевых токсикоинфекций?
Какие микробиологические методы используются для диагностики пищевых токсикоинфекций? Что подлежит исследованию при пищевых токсикоинфекциях?
На какие питательные среды следует сеять материал при пищевых токсикоинфекциях? Как производится идентификация сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
Как производится исследование пищевых продуктов на наличие условно патогенных микробов кишечной группы?
Как производится исследование пищевых продуктов на наличие стафилококка? Как обнаруживается стафилококковый энтеротоксин?
Какие формы сальмонеллезов бывают у животных?
Каковы эпидемиологические особенности пищевых токсикоинфекций? Каковы меры предупреждения пищевых токсикоинфекций?
Что такое спорадический сальмонеллез и каковы особенности его эпидемиологии?
Методы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов А. Бактериологический
1. Исследование крови больного
44
2. Исследование желчи, мочи, испражнений Исследуемый материал
Б. Серологический
РПГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. ИФМ. Реакция Видаля.
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОТИФОЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА
А. Бактериологический
Исследование желчи, мочи, испражнений – по классической схеме
Б. Серологический
Реакция пассивной Vi-гемагглютинации (РП-Vi-ГА) для выявления Viантител, определение O-, Н-, Vi-антител одновременно
В. Аллергический
Кожная проба с Ви-тифином
45
Методы микробиологической диагностики пищевых токсикоинфекций, вызываемых сальмонеллами и условно патогенными
бактериями кишечной группы
А. Бактериологический
Материал: остатки пищи, рвотные массы, смывы с предметов, промывные воды, испражнения, моча
Кровь
МПА (по методу |
Среда магниевая |
Среды Плоскирева, |
Среда Рапопорт |
|
Шукевича) |
||||
|
Эндо, Левина, МПА |
|
||
|
|
|
Микроскопия |
МПА |
Пестрый ряд |
|
||
|
|
Реакция агглютина- |
|
|
|
|
ции с сальмонеллез- |
|
|
|
|
ными монорецеп- |
|
|
|
|
торными O- и Н- |
|
|
|
|
сыворотками или |
Определение чув- |
Проба с |
Фаготипирование |
|
монорецепторными |
||||
ствительности |
(для S. typhimurium) |
|||
О-сальмонеллезным |
||||
сыворотками для |
||||
к антибиотикам |
|
|||
фагом |
|
|||
других бактерий |
|
|||
|
|
|||
|
|
|
Б. Иммунологические
Применение реакции иммунофлуоресценции как экспресс-метода для обнаружения сальмонелл.
Реакция агглютинации для выявления антител с парными сыворотками больного по типу реакции Видаля. Для реакции используют диагностикум, живые лабораторные культуры и аутоштаммы.
Применение реакции пассивной гемагглютинации с использованием О- эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител и реакции Кумбса для обнаружения неполных антител.
46
Методы микробиологической диагностики пищевых отравлений, вызываемых стафилококками
А. Бактериологический
Материал: остатки пищи, рвотные массы, промывные воды, испражнения, смывы с предметов
МПБ с 6,5% и 10% хлористого натрия и МПБ с 1% глюкозы
Кровяной МПА |
Молочно-солевой агар |
МПА
МПБ
Ферментация маннита |
Микроскопия |
|
Биологическая проба на
кошках
Проба на плазмокоагуляцию
Определение фаготипа
Б. Обнаружение стафилококковых энтеротоксинов: непрямой бактериологический, серологический и биологический методы.
В. Энтеротоксин на кошках определяют внутривенным введением материала.
Полученный центрифугат или фильтрат стафилококковой культуры прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в вену уха или бедренную вену в количестве 0,5 мл на 1 кг веса. Наличие рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в сроки от 30 минут до 3 часов, указывает на присутствие энтеротоксина.
47