Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

Бактериологическое исследование испражнений при эшерихиозах

Испражнения

53

Классификация бактерий рода Shigella

Приложение к ЗАНЯТИЮ 9

А. Метод колициногенотипирования

Метод колициногенотипирования разработан английскими исследователями Абботом и Шенноном (1958) и основан на определении колициногенотипов шигелл Зонне по действию этих бактерий на 15 индикаторных культур, из которых 13 принадлежит к виду шигелл Зонне, 1 - S. dysenteriae 2 (Штуцера-Шмитца) и 1 - Escherichia сoli К-12 ROW.

С помощью этого набора индикаторных культур в настоящее время выявлено 17 колициногенных типов бактерий Зонне.

Испытываемую культуру сеют на МПА с генцианвиолетом двумя линейными штрихами параллельно диаметру чашки. После инкубирования при 37°C в течение 48 часов выросшую культуру убивают парами хлороформа и удаляют с поверхности среды узким краем стерильного шлифованного предметного стекла. На поверхность агара наносят свежие культуры индикаторных штаммов в виде линейных штрихов, пересекающих линии посева исследуемой культуры. Посевы индикаторных штаммов инкубируют 18-20 часов при 37°C и производят учет результатов по наличию или отсутствию зон торможения роста индикаторных культур и их размерам.

Регистрируют результаты следующими условными обозначениями:

++++- зона торможения 15-20 мм;

+++- зона торможения 10-15 мм;

++- зона торможения более 5 мм;

+- зона торможения 4-5 мм;

±- зона торможения меньше 4 мм;

-- отсутствие зоны торможения.

Полученный спектр действия исследуемой культуры на индикаторные штаммы сопоставляют со стандартной схемой титрования и присваивают этой культуре соответствующий колициногенотип.

Типовые и индикаторные культуры набора Абботта и Шеннона для колициногенотипирования шигелл Зонне

Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону

Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов; - отсутствие зоны торможения; V – вариабельные результаты.

Методика колицинотипирования при помощи колициногенных штаммов

Определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам проводят при помощи эталонных колициногенных штаммов Фредерика:

Колицинотипирование, т.е. определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам, определяют следующим образом.

Свежие эталонные колициногенные штаммы Фредерика, выросшие на среде Ресселя, сеют уколом петли в соответствующие квадраты чашки с 1,5%-ным МПА, подкрашенным генцианвиолетом, и инкубируют при 37ºC в течение 24 часов. Выросшие колонии бактерии убивают парами хлороформа, и поверхность агара заливают 2,5 мл расплавленного 0,7%-ного МПА, содержащего 2 капли 6-часовой испытуемой бульонной культуры ши-

56

гелл Зонне. После 20-часового роста при 37°C производят учет результатов опыта. При наличии чувствительности к колицинам испытуемого штамма бактерии Зонне вокруг колоний колициногенных культур образуются зоны задержки роста подобно зонам задержки роста вокруг дисков с антибиотиками. Культура считается чувствительной к колицину, если ширина задержки роста бактерий более 2 мм.

Результаты регистрируют плюсами: + - зона задержки 2 мм; ++ - зона задержки 2-5 мм; +++ - зона задержки 5-10 мм; ++++ - зона задержки более 10 мм.

Б. Вирулентность дизентерийных бактерий обусловлена наличием у них факторов адгезии и колонизации, инвазии. (Эти факторы патогенности контролируются главным образом плазмидами). Кроме того, шигеллы способны вырабатывать 2 типа экзотоксинов: цитотонины (термолабильный и термостабильный) и цитотоксины (способностью вырабатывать цитотоксины шигеллу наделяют конвертирующие умеренные фаги).

Патогенность шигелл определяется с помощью кератоконъюнктивальной пробы на морской свинке.

В. Факторы патогенности диареегенных E. coli