Наружный осмотр
Лучше всего проводить, положив рыбу в кювет с небольшим количеством воды. Отобранную рыбу внимательно осматривают, чешую и кожу при этом не удаляют. Осмотр ведут без использования лупы или микроскопа. Оптические приборы рекомендуется применять при извлечении паразитов из рыбы и для выяснения их систематического положения.
На поверхности тела, голове, плавниках, глазах могут быть видны различного рода кровоизлияния, покраснения, опухоли, изъязвления, что может свидетельствовать о наличии инфекционных или незаразных болезней. Подобные же поражения могут оставлять некоторые паразиты, в частности моногенеи, пиявки или паразитические раки, которые иногда теряются при подълме рыбы на палубу, выборке ел из сетей и т. п. В ряде случаев на поверхности тела рыбы видна только часть рачка, а его голова глубоко погружена в ел мускулатуру.
В наружных покровах рыб, у основания плавников, на самих плавниках иногда встречаются белые или тлмные пятна, пузырьки или припухлости, в которых находятся цисты миксо- и микроспоридий, трематод, а также нематоды (например, половозрелые филометры) или паразитические раки.
В слизи, покрывающей тело рыб, паразитируют миксоспоридии, триходины, апиозомы и другие простейшие. Для их выявления с плавников и поверхности тела рыб делают небольшой соскоб слизи, помещают его на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и полученный препарат изучают под малым, средним и большим увеличением микроскопа.
На поверхности тела, голове и плавниках бывают выражены опухоли в виде мелких бородавок, крупных наростов белого, серого, жллтого, розового или члрного цветов. Природа их происхождения может быть различной.
И, наконец, сама рыба может иметь механические повреждения, скелетные аномалии, различного рода деформации тела.
После вылова рыбы из ел пищеварительного тракта через анальное отверстие или ротовую полость на поверхность тела иногда выползают некоторые нематоды, трематоды или же скребни, создавая впечатление ел “червивости”.
Ротовая полость
Здесь паразитируют миксоспоридии, моногенеи, трематоды, пиявки, паразитические изоподы. Некоторые из них имеют довольно крупные размеры. Например, длина паразитических изопод достигает 3 - 6 см, почти такого же размера могут быть цисты, содержащие дидимозоидных трематод. Следует учесть, что при хранении на воздухе выловленной рыбы некоторые трематоды и нематоды выползают из ел желудка в ротовую полость. Подобная картина часто наблюдается также при вылове океанических глубоководных рыб, например, долгохвостых, мерлузовых, у которых в связи со сменой давления выворачивается желудок, и его содержимое попадает в ротовую полость.
В ротовой полости рыб иногда встречаются опухоли различного происхождения.
Жаберная полость, жабры
Для удобства исследования жаберной полости рекомендуется ножницами срезать одну из жаберных крышек, осмотреть срезанную крышку и полость, потом быстро вырезать все жаберные дуги, положить в биологическую солонку или чашку Петри и держать там слегка смоченными водою. Жаберные дуги с жаберными лепестками обследуют на стекле под лупой, пользуясь двумя препаровальными иголками. Затем лепестки отрезают от дуги возле их основания, сдавливают между двумя стлклами до прозрачности и рассматривают под малым увеличением микроскопа. Это дает возможность выявить тех паразитов, которых не видно под лупой. И, наконец, делают мазки слизи с жаберных лепестков и обследуют их.
К внутренней стороне жаберных крышек прикрепляются трематоды (чаще всего, заключлнные в капсулы дидимозоиды) и паразитические копеподы (например, калиговые). Жаберные дуги становятся местом поселения миксоспоридий (геннегвий, миксидиумов, миксоболюсов), моногеней и копепод. Большинство моногеней и раков, обитающих на жабрах и жаберных дугах, имеют мелкие размеры и не влияют на товарные качества рыбы. Однако среди них иногда встречаются довольно крупные формы, например, капсалидные моногенеи (их длина до 2-3 см), паразитирующие у луны-рыбы, нототениевых, тунцов, или же копеподы рода пеннелл (длиной до 20-25 см) - у луны-рыбы, меч рыбы, парусников, тунцов, светящихся анчоусов и некоторых других океанических рыб. В жаберной полости живут изоподы, имеющие довольно крупные размеры (до 5-6 см).
Кровь
Можно брать несколькими способами: непосредственно из сердца пастеровской пипеткой, из хвостовой артерии или из сосудов внешней жаберной дуги. В крови живут гемогрегарины, трипанозомы, трипаноплазмы, у некоторых рыб в ней могут встретиться яйца сангвиниколидных трематод. Кровепаразитов изучают на свежих мазках или окрашенных по Романовскому или же Паппенгейму.
Полость тела и внутренние органы
Первоначально следует взять пипеткой жидкость из брюшной полости, капельку поместить на стекло, накрыть покровным стеклом и просмотреть препарат под микроскопом. Здесь могут встретиться паразитические жгутиконосцы. Затем следует вскрыть брюшную полость. Для этого ножницами делают разрез по брюшку от анального отверстия к голове и вырезают одну часть брюшной стенки. Далее перерезают пищеварительный тракт впереди у пищевода и сзади, у анального отверстия, стараясь не повредить целостность внутренних органов. В противном случае выпавшие из них в полость тела паразиты могут оказаться в несвойственных им местах, создавая искажлнную картину заражлнности рыбы Османов С.О. Паразиты и болезни прудовых рыб Узбекистана. - Ташкент: Наука, 1965. - 114 с. Особенно тщательно следует препарировать кишечник, во избежание выпадения из него пищевых компонентов и обитающих в нлм нематод, трематод, цестод и скребней. Полость вскрытой рыбы тщательно осматривают.
Каждый внутренний орган должен быть осмотрен сначала снаружи с целью обнаружения на нлм паразитов. В полости тела на серозных покровах и под ними, на поверхности внутренних органов и брыжейке паразитируют, главным образом, личиночные формы трематод, цестод, нематод и скребней, а также микроспоридии, но могут встречаться и половозрелые формы филометридных нематод, амфилины (у осетровых рыб). Здесь же могут встретиться белые, желтоватые или серовато-белые грануллмы, свидетельствующие о наличии в рыбе мико- и миксобактерий или же грибов. В стенке кишечника проходит развитие некоторых форм кокцидий.
При обследовании полости тела и поверхности внутренних органов особое внимание следует обратить на возможность обнаружения личинок анизакидных нематод. Наличие этих паразитов представляет серьезную проблему при использовании заражлнной рыбы в пищевых целях. Личинки рода анизакис чаще всего свлрнуты в плоские спирали, заключлнные в прозрачную капсулу, личинки гистеротиляциумов, контрацэкумов и псевдотеррановы могут быть одеты сравнительно толстой оболочкой или же находятся в свободном состоянии.
Личиночные формы цестод и скребней, паразитирующие в полости тела и на внутренних органах рыб, встречаются, как правило, в инкапсулированном состоянии. Однако некоторые цестоды, например, личиночные формы дифиллоботриид, встречаются рыбах в свободном состоянии. Они зарегистрированы у ряда морских и океанических (нототениевых, ставридовых, тресковых и некоторых других), а также солоноватоводных рыб и относятся к категории потенциально опасных для человека. Среди скребней подобное патогенное значение имеют личинки коринозом и больбозом.
Для обследования глаз необходимо извлечь глазное яблоко из орбиты, положить на стекло, надрезать острыми ножницами со стороны, противоположной передней камере, и рассмотреть содержимое задней камеры под малым увеличением микроскопа. Для обследования мозга его необходимо извлечь из вскрытой черепной коробки. В глазах и мозгу паразитируют миксоспоридии (например, миксоболюсы, миксозомы), криптокарион, метацеркарии диплостомовых и гетерофиевых трематод, личинки нематод (например, филометриды).
Сердце вынимают вместе с крупными сосудами и исследуют в глубоком часовом стекле или в солонке с физиологичным раствором. В сердце паразитируют амфибделлидные моногенеи, трематоды рода апорокотиле, самцы филометр, здесь же могут быть обнаружены головы копепод, снабжлнные различными прикрепительными органами.
Жллчный пузырь отделяют от внутренней стороны печени, которая прилегает к кишечнику. Стенки пузыря просматривают между предметными стеклами сначала под лупою, а затем под микроскопом, жллчь исследуют отдельно.
В стенке пузыря и жллчи можно найти вегетативные стадии (плазмодии) и споры миксоспоридий, ооцисты кокцидий, половозрелых трематод; иногда в жллчи встречаются личинки нематод.
Мочевой пузырь извлекают целиком и кладут на часовое стекло. Отдельно обследуют жидкость из пузыря, потом делают соскоб с его внутренней стенки. В мочевом пузыре паразитируют миксоспоридии, инфузории, иногда - трематоды (например, горгодериды).
В плавательном пузыре можно обнаружить кокцидий (иногда полость пузыря заполнена ооцистами этих простейших вместе с остатками клеток тканей хозяина), личинок цестод, половозрелых нематод (например, ангвилликол у угрей).
Селезлнку и поджелудочную железу обследуют отдельно, компрессорным методом.
Почки изучаются последними среди внутренних органов и их необходимо обследовать в области главной почки и в ел средней части.
Во всех внутренних органах могут быть обнаружены гифы и споры грибов.
Мускулатура
Обследование мускулатуры (мяса) рыбы - наиболее ответственная часть паразитологического инспектирования.
Перед обследованием мускулатуры с любой рыбы (рыбы-сырца, рыбы охлаждлнной, мороженой, соллной, маринованной, копчлной или вяленой) необходимо снять кожу и проверить подкожную клетчатку на наличие каких-либо включений. Это могут быть гифы грибов, цисты миксо- и микроспоридий или трематод, остатки частей тела паразитических рачков.
Затем мышцы рыбы надрезают в виде поперечных ломтиков толщиной не более 1 см сначала с одной стороны тела, а затем с другой. Надрезы лучше делать под косым углом к позвоночнику рыбы. Каждый ломтик просматривают в ярком падающем свете невооружлнным глазом. При таком контроле в мышечных тканях достаточно хорошо видны цисты миксо- и микроспоридий, личиночные формы цестод, нематод и трематод, половозрелые формы некоторых дидимозоидных трематод, а также паразитические раки и их остатки. Микро- и миксоспоридии, личиночные формы цестод располагаются в цистах белого, жллтого, коричневого или члрного цветов. Для определения систематической принадлежности паразитов, заключлнных в цисты, содержимое обнаруженных цист необходимо исследовать под микроскопом.
Цестоды очень легко извлекаются из цист и имеют члтко оконтуренное лентовидное тело, передний конец которого обычно вооружлн различного рода прикрепительными органами типа присосок, крючьев, хоботков с крючьями и т.п. Чтобы убедиться в том, что обнаруженный паразит является личинкой цестоды, достаточно микроскопа с увеличением х50-80.
Для определения чрезвычайно мелких спор микро- и миксоспоридий необходимо большое увеличение микроскопа - х800-1200. Нематоды рода анизакис в мышцах обычно свлрнуты в спирали, заключлнные в полупрозрачные капсулы. Красновато-коричневые личинки псевдотеррановы внешне напоминают тонкие кровеносные сосуды и, также как и желтоватые личинки гистеротиляциумов, встречаются в мышцах в свободном состоянии, но иногда заключены в капсулы. Плероцеркоиды некоторых цестод, например, гимноринхов и моликол, находятся в мышечной ткани рыб в неинцистированном состоянии, имеют плоское лентовидное тело молочно-белого цвета, а их длина достигает 50 - 120 см. Они могут пронизывать мускулатуру рыб в различных направлениях, создавая впечатление ел “червивости”.
При разделке мышц крупные паразиты, размеры которых превышают 1 см, могут быть повреждены. Для их последующего систематического определения необходимо извлечь хотя бы 2 - 3 экз. таких паразитов целиком. Для этой цели используются пинцеты, препаровальные иглы и скальпели.
Наиболее эффективным методом исследования мускулатуры, позволяющим быстро обследовать большие количества рыбы и рыбной продукции, является просмотр мышечной ткани на просвет (в ярком проходящем свете). Для этого рекомендуется иметь специальное приспособление в виде столика с прозрачной крышкой, лучше из молочного или матового стекла, и подсветкой снизу. Яркость подсветки устанавливается опытным путем. Толщина ломтиков просматриваемого на просвет мяса зависит от степени его просвечиваемости, но, как правило, не превышает 3-4 см. Все включения в мышцах рыбы размерами от 2-3 мм и более обычно хорошо заметны на просвет.
Очень эффективным методом исследования мускулатуры, особенно для выявления личинок нематод, является просмотр размельчлнной мышечной ткани в УФ-свете. Для этого мясо рыб размельчается с помощью механического дезинтегратора из обычного кухонного комбайна и затем просматривается в УФ-свете. Личинки в УФ-свете ярко светятся и легко обнаруживаются, особенно при обследовании замороженной и оттаявшей рыбы. По сравнению со стандартными методами, этим методом выявляется дополнительно до 30-50 % паразитов. Вместе с тем, мы установили, что при подобном измельчении мяса рыбы тело некоторых гельминтов, особенно имеющих крупные размеры, может быть разорвано, и тем самым картина заражлнности рыбы будет до некоторой степени искажена.
Для выявления личинок анизакисов в мышечной ткани рыб использовуют проекционный трихинелоскоп ПТ-80, с помощью которого обследуются раздавленные кусочки мяса размерами 1,0 х 1,5-2,0 х 0,5 см.