Материал: Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

З А Н Я Т И Е 10

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика холеры

План занятия:

1.Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств холерного и холероподобных вибрионов.

2.Бактериологическое исследование испражнений холерного больного (разбор схемы).

3.Ускоренная диагностика холеры (демонстрация).

4.Исследование воды на наличие холерного вибриона (разбор методики).

5.Изучение иммунопрепаратов, применяемых для профилактики, лечения и диагностики заболеваний, вызываемых бактериями кишечной группы, и холеры. Демонстрация и разбор.

6.Правила взятия и пересылки материала при исследовании на кишечную группу микробов. Особенности взятия и пересылки материала при подозрении на холеру. Разбор методов.

7.Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (окончание). Регистрация результатов посева на среды «пестрого ряда», МПА, среду Пешкова. Окончательная идентификация возбудителя по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле.

Методические указания

1. Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда".

58

2. Одну петлю испражнений засевают на пептонную воду в пробирке, другую петлю испражнений засевают на пластинку щелочного МПА так, чтобы получить изолированные колонии. Находят на щелочном МПА колонии, подозрительные на колонии холерного вибриона (прозрачные с серо-голубым оттенком), готовят из них препараты-мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Проверяют подвижность в препарате «висячая капля». На сахарных средах определяют группу по Хейбергу, дифференцируют биовар. Ставят реакцию агглютинации на стекле вывыделенной культуры с холерной О-сывороткой и типовыми сыворотками Огава и Инаба. Проверяют холерогенность выделенной культуры.

Реакция агглютинации выделенной культуры вибриона с холерной О-сывороткой

1 – опыт; 2 – контроль Предварительное заключение: ___________________________________________________

_____________________________________________________________________________

4. Для исследования воды без предварительной фильтрации берут ее не менее 1 л, определяют рН, доводят ее насыщенным раствором соды до 7,6-7,8. Затем добавляют к 900 мл воды 100 мл основного раствора пептона (пептона 10 %, хлористого натрия 5 %, азотнокислого калия 1 % и углекислого натрия 20%). Засеянную 1%-ную пептонную воду (первая среда обогащения) разливают в колбы и флаконы по 250 мл и ставят в термостат на 5-8 часов. Дальнейшее исследование проводят по обычной схеме.

7. Зарегистрировать результаты посева на среды «пестрого ряда», сделать предварительный вывод о родовой или видовой принадлежности возбудителя. С помощью соответствующих сывороток поставить реакцию агглютинации на стекле и определить серовар (серотип) возбудителя.

Регистрация результатов посева исследуемой культуры на среды "пестрого ряда"

Предварительное заключение о родовой или видовой принадлежности:

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

59

Реакция агглютинации выделенной культуры возбудителя кишечной инфекции

Заключение _________________________________________________________________

________________________________________________________________________

Контрольные вопросы

Каковы морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические особенности холерного вибриона?

Каково антигенное строение холерного вибриона?

По каким признакам отличают семейство Vibrionaceae от семейств Enterobacteriaceae,

Pseudomonadaceae?

По каким признакам отличают род Vibrio от родов Aeromonas, Plesiomonas? По каким признакам отличают холерный вибрион от холероподобных? Какие существуют биотипы холерного вибриона?

Как происходит заражение при холере?

Где в организме больного локализуется холерный вибрион?

Какие микробиологические методы применяют для диагностики холеры? Какой материал берут от больного для исследования?

Какой трупный материал подвергают исследованию?

Какие правила следует соблюдать при взятии, пересылке и исследовании материала при подозрении на холеру?

Какие питательные среды применяют для выделения холерного вибриона? Как выделяют чистую культуру холерного вибриона?

На основании каких признаков идентифицируют холерный вибрион?

Какова сущность иммунофлуоресцентного метода ускоренного обнаружения холерного вибриона?

По каким признакам отличают классический вибрион от вибриона Эль Тор?

Какие токсины образует холерный вибрион? Какое действие оказывает энтеротоксин (холероген) на организм человека?

Вчем заключается принцип патогенетического лечения больных холерой? Как ставят пробу со специфическими холерными монофагами?

Вчем заключается биологический метод определения холерогенности вибрионов? Какие серотипы различают у холерных вибрионов?

Какие основные биологические свойства парагемолитических вибрионов? Как происходит заражение ими и какие они вызывают заболевания?

Какое основное отличие галофильных вибрионов от холерных и холероподобных? Какие методы обнаружения холерогена Вы знаете?

Какова природа и структура холерного энтеротоксина (холерогена)?

Каковы косвенные доказательства отсутствия токсигенных свойств у холерного вибриона? Какими функциями обладают фрагменты А и В холерогена?

С чем связана способность некоторых холероподобных вибрионов вызывать холероподобные диареи?

Каким образом идентифицируют холероподобные, т.е. не относящиеся к O1-группе, вибрионы?

60

Методы микробиологической диагностики холеры Бактериологический

Испражнения, рвотные массы, содержимое желчного пузыря, тонкого кишечника, вода

Микроскопия

Щелочной МПА

РИФ

Щелочной МПА

Микроскопия

1% ПВ

Определение

подвижности

Методы ускоренной диагностики холеры 1. Иммунофлуоресцентный

Мазки обрабатывают люминесцентной сывороткой и рассматривают в люминесцентном микроскопе. При наличии в исследуемом материале холерного вибриона в первом мазке произойдет свечение вибрионов, во втором - свечение отсутствует.

2. Реакция пассивной гемагглютинации

Для обнаружения холерных вибрионов в содержимом кишечника используют антительный диагностикум, т.е. эритроциты, на которых предварительно адсорбируют соответствующе антитела. Реакцию ставят по обычной методике. При наличии в исследуемом материале холерных вибрионов происходит агглютинация эритроцитов.

Приложение к ЗАНЯТИЮ 10

А. Возбудитель холеры относится к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio, в составе которого уже более 30 видов. Род Vibrio включает следующие виды, имеющие медицин-

ское значение: V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. anginolyticus, V. vulnificus, V. fluvialis, V. mimicus.

К роду Vibrio относятся грамотрицательные, не образующие спор и капсул палочки, изогнутые (1/4 окружности или витка спирали) или прямые, с одним полярно расположенным жгутиком, индофенолоксидазоположительные, образующие кислоту без газа из d-глюкозы путем гликолиза по схеме Эмбден-Мейергофа (до молочной кислоты), имеющие декарбоксилазы лизина и орнитина, лишенные аргининдигидролазы, разжижающие желатин, восстанавливающие нитраты в нитриты и не образующие сероводорода.

Вид V. cholerае разделяют на следующие 4 биовара: Vibrio cholerae O1 cholerae, V. cholerae eltor), V. cholerae O139 bengal, V. cholerae non O1 - включает все холероподобные вибрионы, не относящиеся к O1-серологической группе. Первые три относятся к двум се-

62