равьиной кислоты. По отношению к сулеме, феноJiу,
резорцину, хинозолу, хлорамину, цетилцефиролу чувстви
тельность дегидраз почти одинакова, причем наимень
шие концентрации, вызывающие полное или почти пол
ное угнетение дегидраз, совпадают в пределах ошибки
биологического опыта. Не исключена возможность по
ражения и других ферментных систем. Свои п.редполо
жения Г. Н. Першин подкрепил тем, что в любой живой
клетке имеются дегидразы, без которых немыслимо те
чение окислительно-восстановительных реакций. Они
есть и у анаэробов, у которых отсутствуют истинные ок
сидазы.
Функция оксидаз на,столько важна для жизни, что
инактивация их приводит к гибели клеток.
Хлорамин, перекись водорода и фенол угнетают ак
тивность каталазы кишечной палочки. Поливинилпир ралидон-йод в концентрациях 0,0035% по ,свободному
йоду угнетает дыхательные фер·менты кишечной па
лочки.
Угнетение окислительно-восстановительных Ф:рмен
тов играет ,существенную роль в механизме деиствия
йодофоров на микробную клетку, так как происходит па
раллельно наступлению бактерицидного эффекта (Л. 3.
Скала, 1969).
По данным П. Ф. Милявской (1951), в цитоплазме
клетки кишечной палочки, не подвергшейся воздействию
дезинфицирующих средств, видны округлые или оваль
ные образования темно-фиолетового цвета, трактуемые некоторыми авторами как ядра. В отдельных клетках имеются две гранулы, расположенные биполярно, а иног да ближе к центру. Протоплазма красноватого тона, а при подкраске лихтгрюном - зеленого цвета. Воздейст вие фенола ведет к уменьшению размеров гранул - «ядер», появлению большого количества биполярных
гранул, ухудшает видимость в препаратах протоплазмы,
вплоть до почти полного ее исчезновения. Все эти изме
нения нарастают по мере повышения концентрации ве
щества.
В клетках, обработанных 1, 3 и 5% растворами форм
альдегида, «ядра» хорошо сохраняются: клетки резко
базофильны, гранулы рассматриваются с трудом. Таким образом, в отличие от фенола формальдегид фиксирует,
как правило, структуру клетки и вызывает выраженную
базофилию протоплазмы большинства клеток. Измене-
45
ния, наблюдаемые в клетках, одинаковы независимо ot
концентрации формальдегида.
Обладая малой молекулой, хлор и атомарный кис лород, видимо, попадают в ,бактериальную клетку
чер·ез поры клеточной мембраны путем простой диф
фузии.
Эффект дезинфекции (гибель клетки) зависит от мно
гих факторов, в том числе от биологических особенно
стей микроорганизма (вид, штамм) и его количества.
Например, резистентность бактерий брюшного тифа к
препаратам, содержащим активный хлор, значительно выше, чем бактерий дизентерии. Туберкулезные мико
бактерии еще более устойчивы (особенно к кислотам),
чем патогенные микроорганизмы кишечной группы. Наи большей устойчивостью обладают споры микроорганиз
мов, например сибиреязвенной палочки. Отмечена раз
ная устойчивость и у разных штаммов одного вида мик
робов. Прежде всего погибают наиболее чувствительные
~<летки, устойчивые выживают значительно дольше, ос
новная же масса популяций погибает в промежуточный
период.
При обеззараживании учитывается и степень обсеме ненности объекта микроорганизмами, что особенно важ
но при использовании газов и ионизирующего излуче
ния. Например, при стерилизации с помощью радиоак тивного кобальта ~ли ускоренных электронов инструк
циями предусматривается предварительное определение
степени обсемененности объекта, а затем выбор дозы. Концентрация дезинфицирующего средства в раство
ре имеет существенное значение. По мере увеличения
концентрации бактерицида в растворе возрастает сте
пень инактивации ферментов (Е. К. Скворцова и др.,
1969). При воздействии 1% раствора фенола на свеже
выделенный штамм под микроскопом не выявляются от
личия между подопытными и контрольными клетками.
Наоборот, при воздействии 3% раствора фенола появля ются большие изменения в структуре клетки: многие как бы вакуолизируются, в некоторых вещество гранул рас
полагается тонким пристеночным слоем и уменьшается
вразмерах. Протоплазма окрашивается слабее, нежели
вконтроле.
Резкие изменения видны в клетках, подвергшихся действию 5% раствора фенола: подавляющее большин
ство их имеет биполярные небольшие темные гранулы,
46.
протоплазма почти отсутствует и едва заметна в виде
тяжей между гранулами или слабо контурирована в клетках с одной гранулой. При воздействии минималь
ных доз хлорамина происходит слипание тонких фиб
рилл нуклеоида с образованием коротких извитых тру
бочек и тяжей. Таким образом, в данном случае можно
говорить об агрегации нитей ДНК в результате воздей
ствия хлорамина. После воздействия бактерицидной до
зы хлорамина возникают резкие изменения структуры
(А. В. Куликовский, 1969).
Бактерициды значительно различаются по активно
сти. Одни эффективны в 5% концентрации (лизол), дру
гие - в 0,2% (гипохлориты), а третьи - в еще более
низких концентрациях. Концентрация препарата зависит
также от обеззараживаемого объекта и степени его об
семененности.
Эффективность дезинфекции обусловливается также
временем воздействия_ rшедарата, так как мгновенного
бо·еззараживания не существует. Наиболее часто исполь
зуют средства, эффективные в течение 20 мин, а газы - ОТ 2 ДО 24 Ч.
Подобно химическим реакциям бактерицидное дейст
вие подавляющего числа средств усиливается с повыше
нием температуры. Широко употребляется условное обо
значение Q10 для выражения пропорционального увели
чения скорости реакции при повышении температуры на
каждые 10 °С. Так, если говорят, что Q 10 =2, то это озна чает, что при повышении температуры от 20 до 30 °С ско
рость гибели клеток увеличивается в 2 раза.
Большую роль при обеззараживании играет среда, в
которой находится патогенный микроорганизм. Он легко погибает под воздействием бактерицидов в воде и воз духе, особенно если не защищен органическим и неорга
ническим субстратами. Трудно убить микроорганизм, за щищенный белком, особенно высохшим, а также в выде лениях (фекалии, кровь, гной и др.).
В значительной мере эффективность дезинфекции за
висит от изменения рН среды. Наиболее сильно влияет
величина рН на активность хлора и его соединений, ам фолитов, йодофоров. Эти вещества в кислой среде актив нее, чем н щелочной. Например, раствор хлорной ~вве сти, содержащей 10% активного хлора, при рН 4,0 и температуре 18-20°С убивает споры сибиреязвенной па
лочки, находящиеся на батистовых тест-объектах, через
47
5-10 мин, а при рН 11,0- через 180 мин. В 1% раство
ре сулемы при рН 1,6 кишечная палочка погибает в 6
раз быстрее, чем в том же растворе с рН 4,5. Некоторые
виды микроорганизмов весьма чувствительны к измене
нию рН жидкости (воды и др.). В частности, весьма чув
ствительны к изменению рН вибрионы холеры Эль Тор:
они быстро погибают в кислой среде, но хорошо размно
жаются в щелочной.
Гибель микроорганизма как в жидкости, так и на по
верхности в значительной мере зависит от поверхностно
го натяжения бактерицидного средства, суть которого
заключается в том, что если две фазы (микроорганизм
и жидкость) находятся в соприкосновении, то прочность тонкого слоя, образующего границу между этими фаза
ми, зависит от степени поверхностного натяжения. При
высоком поверхностном натяжении контакт жидкости с
микроорганизмом затрудняется, и, наоборот, чем меньше
поверхностное натяжение, тем легче растекаемость жид
кости по поверхности вообще и поверхности микроорга
низма в частности.
Особенность обеззараживаемого объекта, его положе
ние существенно влияют на эффективность обеззаражи вания, что учитывается при дезинфекции, -а частности
твердQIХ поверхностей (стена, потолок, пол). Такие по верхности могут бЬ;IТЬ гладкими, шероховатыми и отли чаться по материалу (деревянные, металлические, ошту
катуренные, кирпичные, окрашенные масляной или кле
евой :краской, оклеенные обоями и др.). Поверхности мебели и различной обстановки, объектов из ткани (шерсть, хлопчатобумажная ткань, кожа, синтетика и др.) оказывают влияние на степень растекаемости жид
кости (смачиваемость, поверхностное натяжение жидко
сти и др.).
С учетом ряда факторов определяют норму расхода
дезинфицирующего средства. Например, при орошении поверхностей расход дезинфицирующего раствора на
1 м2 обрабатываемой площади колеблется от 300 мл до
1 л на 1 м2, при обеззараживании белья путем погруже
ния - 4-5 л на 1 кг, в случае обеззараживания сухого
кожевенного сырья 2,5% соляной кислотой - 10 л на
1 кг и т. д.
Способ обработки обеззараживаемого объекта также
оказывает влияние на эффективность дезинфекции. Наи
лучший способ - это погружение обеззараживаемого
48
объекта в бактерицидную жидкость, имеющую низкое
поверхностное натяжение, или обеззараживание его в специальных (дезинфекционных) камерах.
Влияние указанных факторов учитывают при оценке
антимикробной активности дезинфицирующих средств и
разработке оптимальных режимов обеззараживания объ
ектов внешней среды при различных инфекционных за
болеваниях. Химические вещества, применяемые для де
зинфекции, должны отвечать следующим требованиям:
обладать хорошей растворимостью в воде, вызывать ги
бель микроорганизмов в короткие сроки, не снижать ак
тивность в присутствии органических веществ, быть не токсичными или малотоксичными для людей и живот ных, не иметь резкого неприятного запаха, не быть
маркими и не портить обеззараживаемьiе предметы.
Препараты не должны терять бактерицидные свойства
при хранении как в сухом виде, так и в виде растворов,
быть дешевы и удобны для транспортировки.
При изучении дезинфицирующего средства необхо
димо иметь подробную химическую характеристику пре парата с указанием физико-химических свойств, нейтра
лизующих веществ и условий хранения. Определение ан тимикробной активности испытуемых дезинфицирующих
средств состоит из следующих этапов: 1) подбор куль тур микроорганизмов для определения антимикробной
активности средств; 2) изучение активности средств в опытах с тест-объектами из батистовой ткани; 3) изуче ние активности средств при обеззараживании поверхно стей; 4) изучение активности средств при обеззаражива нии белья; 5) изучение активности средств при обезза раживании посуды; 6) изучение активности средств при обеззараживании выделений (кал, моча, мокрота и др.).
Подбор культур микроорганизмов в качестве тест культур и требования, предъявляемые к ним. Для опре деления антимикробной активности дезинфицирующего
средства используют следующие виды ,микроорганизмов:
а) кишечную палочку как на·иболее устойчивый вид из кишечной группы бактерий; б) золотистый стафило
кокк - :наиболее устойчивый вид из ко·кковой группы микробов; в) антракоид в споровой форме - представи
тель спорообразующих микроорганизмов.
При выборе штаммов культур обращают внима1Ние на
наличие у них типичных морфологических, биохимиче
ских и ·культуральных свойств, а также на их устойчи-
4 В. И. Вашков |
49 |