Материал: Вашков В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных заболеваниях

вость к действию повышенной температуры (59 °С), фе­

нола и хлорамина. Споровую культуру антракоида про­

веряют на устойчивость к пару и хлорамину (табл. 8).

Таблица 8

УСТОЙЧИВОСТЬ РАБОЧИХ ШТАММОВ

УСТОЙЧl!ВОСТЬ

Устойчивость рабочих штаммов проверяют не реже

одного раза 13 месяц. Музейные культуры хранят при температуре от 1 до 4 °С в виде сухой культуры в ампу­ лах (после лиофильной сушки) не более 2 лет или в ви­ де посевов 1на мн.со-пептонном агаре (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5-3 мм) не более 6 мес.

При отсутствии культур с указанной устойчивостью

их выделяют из внешней среды. Для выделения кишеч­

ной палочки готовят 20 мл взвеси фекалий путем смеши­ вания 2-3 образцов их с водопроводной водой в соот­

ношении 1: 2. Затем взвесь смешивают с 40 мл фенола, разведенного водой 1 : 90, и через 5-минутные интервалы делают посев (по две петЛ'и взвеси на поверхность сре­ ды Эндо). Через 1 сут типичные ,колонии кишечной па-

'

лочки пересевают на поверхность мясо-пептонного ага-

ра. Культуру, выросшую на этом агаре, идентифицируют по морфолоI1ическим, биох,имическим и культуральным свойствам, затем проверяют ее устойчивость к фенолу и хлорамину. Выделение штаммов золотистого стафило­

кокка производят по такой же методике, только посев делают на мясо-пептонный агар и материалом для выде-

50

Для заражения стерильные батистовьtе тест-объекты

(в количестве 50-100 штук) в чашке Петри заливают 10-20 мл бактериальной или споровой взвесью, ,ра·вно­

мерно смачивая все тест-объекты. Чашку Петри закры­ вают крышкой и оставляют тесты в бактериальной или

споровой взвеси на 20 мин. Затем в асептических услови­

ях батистовые тест-объекты, пропитанные ·культурой, пе­ реносят на поверхность стерильной фильтровальной бу­

маги (2 слоя на дне чашки Петри), покрывают их свер­

ху стерильной бумагой и закрывают чашку Петри крыш­

кой. Для фиксации микроорганизмов на батистовых тест­ объектах через 10 мин после удаления избытка жидко­ сти тест-объекты переносят •на поверхность сухой сте­ рильной фильтровальной бумаги в чашке Петри, _сверху прикрывают ,стерильным листом фильтровальной бумаги и подсушивают в термостате при 37 °С в течение 20 мин

с приоткрытыми крышками.

Хранят зараженные тест-объекты в чашках Петри в

рефрижераторе при температуре 4 °С. Срок хранения

тест-объектов, зараженных культурой ~ишечной палоч­

ла. Определение устойчивости тест-культур проводят при воздействии дезинфицирующих растворов на тест-куль­ туру, фиксированвую на батистовых тест-объектах. Ис­ пользуют чистый кристаллический фенол, перегнанный

при температуре 180 °С. Хранят его в герметичной стек­ лянной таре, помещенной в эксикатор над обожженным хлоридом кальция. Рабочие растворы фенола готовят на

стерильной водопроводной воде в день опыта. Концент­ рация раствора зависит от вида культуры (устойчивость золотистого стафилококка испытывают при разведении

фенола 1 : 70, а устойчивость кишечной палочки - 1 : 90).

При постановке опытов в стеклянную колбу пипет­

кой наливают требуемый объем соответствующего рас­

твора фенола (из расчета 0,5 мл на каждый тест-объ­

ект). О11считав в чашке Петри зараженные тест-объекты

(по два на каждую экспозицию), захватывают их пинце­

том все сразу и после обжигания горлышка ·колбы опу­

скают в раствор фенола, не касаясь краев. Легкими пока­ чиваниями колбы достигают смачивания всех тест-объ­ ектов дезинфицирующим раствором. Колбу помещают в

водяную баню (19-20°С) и держат ее в этих условиях

52

в течение всего опыта. Момент смачивания · всех тест­

объектов ,считают началом опыта. Через каждые 5 мин

в течение 1 ч стерильным охлажденным пинцетом или

платиновой петлей извлекают по два тест-объекта из раствора фенола и опускают в пробирку с 5 мл стериль­

ной ,водопроводной воды. Через 5 мин тест-объекты пе­

реносят ·во вторую пробирку также с 5 мл стерильной

водопроводной воды. Затем через 5 мин из второй про­

бирки каждый тест-объект помещают в пробирку с 5 мл

жидкой питательной среды (мясо-пептонный •или казеи­ новый бульон).

Контролем служат два тест-объекта, не подвергав­ шиеся действию фенола, но погруженные в пробирки со стерильной водопроводной водой на максимальный срок

действия фенола. Перед посевом на питательную среду контрольные тест-объекты та·кже промывают в двух во­

дах.

Посевы ставят в термостат при 37 °С. Результаты учи· тывают через 24-48 ч и окончательно через 7 сут. Опы­

ты повторяют не менее 3 раз.

Определение устойчивости культур к хлорамину. До

проверки устойчивости культур к хлорамину йодометри­

ческим способом определяют количество активного хло­

ра в сухом веществе. В опытах ,используют хлорамин,

содержащий 26-28% активного хлора. Определение

устойчивости рабочих штаммов к хлорамину проводят по методике, аналогичной определению устойчивости к

фенолу. Только первую промывку производят не в воде, а в 0,5% растворе гипосульфита натрия, который необ­ ходим для нейтрализации хлора, фиксированного на ткани. При определении устойчивости культуры кишеч­ ной палочки используют 0,1 % раствор хлорамина, золо­ тистого стафилококка - 0,2%, спор антракоида - 10%.

Контролем в опытах при определении устойчивости к хлорамину служат 2 тест-объекта, погруженные в во­ ду на максимальный срок действия хлорамина, после чего их промывают в 0,5% растворе гипосульфита нат­ рия и в воде. Друг-им контролем ,служит контроль нейт­

рализации, который заключается в следующем. Тест­

объекты погружают в растворы хлорамина на макси­ мальный срок .его действия, затем их последовательно

отмывают в гипосульфите на'Грия и в воде, после чего

засевают на МПБ, куда вносят разведение тест-культу­

ры, содержащее 10-20 клеток. Посевы ,ставят в термо-

53

стат при температуре 37 °С и проверяют через 24-48 ч.

Окончательно результаты учитывают через 7 дней.

Определение устойчивости культур спор к пару.

Устойчивость спор культуры антракоида к пару прове­

ряют в аппарате Ойля ~ Мюллера следующим образом:

в колбу аппарата наливают воду ,и нагревают до кипе­

ния. При достижении температуры 100 °С на термометре,

находящемся под действием текущего пара, на предва­ рительно обожженную сетку помещают два зараженных

тест-объекта. Сетку с тест-объектами вносят в зону дей­ ствия текучего пара. По истечении 1 мин тест-объекты извлекают и засевают в две пробирки с бульоном. На

обожженную сетку вновь кладут 2 тест-объекта ,и выдер­

живают под действием пара 2 мин. Увеличивая экспози­ цию каждый раз на 1 мин, так продолжают делать до

5-7 мин. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 7 дней.

Предварительный учет результатов проводят через 48 ч, окончательный - на 7-е сутки.

Аппарат Ойля-Мюллера может быть заменен кол­

бой емкостью 1-2 л с широ1шм удлиненным горлом.

Корковую пробку колбы на 1/ 3 срезают для выхода пара

·из колбы. Через пробку пропускают проволоку, имею­ щую на конце металлическую сеточку диаметром 3- 3,5 см, на которую помещают тест-объекты. Сеточка с

тестами должна находиться над уровнем воды на рас­

стоянии 5-6 см. :

Определение бактерицидных и спороцидных свойств

дезинфицирующих средств. Для определения наличия

бактерицидного или спороцидного действия дезинфици­ рующих средств готовят 1-5% раствор испытуемого

препарата на дистиллированной или стерильной водо­ проводной воде из расчета 0,5 мл раствора на каждый тест-объект. В растворы дезинфици,рующих ,средств по­

гружают батистовые тест-объекты, зараженные культу­ рой кишечной палочки, или стафилоко~ка, или спорами

антракоида, ка-к описано выше.

Начиная с момента погружения тест-объектов в дез­

инфицирующий раствор через каждые 5 ·мин в течение

1 ч и более вынимают петлей из раствора по 2 тест­ объекта, которые после двукратной промывки в воде или нейтрализаторе и воде переносят в жидкую питательную среду (казеиновый или мясо-пептонный бульон).

Посевы помещают в термостат при температуре 37 °С. Учет результатов проводят ежедневно. Посевы с куль-

54