Материал: chastnaya_sanitarnaya_mikrobiologia

6. Возбудитель лептоспироза

Лептоспироз – инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудителя открыли Инад и Идо в 1914-1915 гг. Лептоспиры относят к семейству Leptospiraceae (leptos – тонкий, speira – виток, спираль) и роду Leptospira, который включает два вида: патогенный – L. interrogans и сапрофитный – L. biflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серологических групп.

В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola.

Морфология. Лептоспиры – спиралевидные бактерии диаметром 0,1-0,25 мкм и длиной от 6-15 до 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить состоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность, наиболее частый тип движения – вращательно-поступательный. Спор не образуют. Грамотрицательные, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому-Гимзе – в красный цвет, фиксация мазка существенно изменяет их морфологию; используют также метод импрегнации серебром по Левадити.

Культивирование. Лептоспиры – хемоорганотрофные факультативно-анаэробные бактерии. Культивируют их в аэробных условиях при 28-30 ⁰С на специальных средах, содержащих 5-10 % сыворотки крови кролика или овцы, дистиллированную, водопроводную, колодезную воду или фосфатный буфер (рН 7,2-7,6): среды Уленгута, Терских, Ферворта-Вольфа, Любашенко и др. Рост лептоспир обычно проявляется через 7-20 суток, иногда 1-2 месяцев. Среда при этом не изменяется. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма – типичная для патогенных штаммов, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства. Изучены недостаточно. Способность ферментировать углеводы отсутствует; образуют каталазу, оксидазу, липазу и другие ферменты.

Токсинообразование. Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они образуют эндотоксин и патогенные ферменты: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулазы, гиалуронидазы, липазы, лецитиназу, которые выделяются в результате лизиса лептоспир. Патогенностью обладают свежевыделенные штаммы лептоспир; при культивировании на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

Антигенная структура. Лептоспиры обладают белковым соматическим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полисахаридные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свойства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются более 7-30 суток; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 суток; в свежем молоке – 8-24 ч; в почках убойных животных при 0-4 ⁰С – до 28 суток; в замороженном мясе погибают через 10 суток. Чувствительны к действию поваренной соли: в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 суток; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) – через 15 минут.

При кипячении погибают моментально, при 56-58 ⁰С – в течение 25-30 минут. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 % соляной кислоты, 0,5 % фенола) инактивируют лептоспиры за 20 минут.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы L. Pomona и L. Hebdomadis), свиньи (серогруппы L. Pomona и L. Tarassovi), овцы, лисицы, песцы, менее – лошади, козы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основные носители лептоспир в природных очагах: серые и водяные полевки, ондатры, серые крысы, домовые мыши, землеройки.

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомяки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки.

Патогенез. Входными воротами возбудителя являются поврежденные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после заражения их обнаруживают в печени. Затем наступает генерализация инфекции (бактеремия), размножение и накопление лептоспир в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких, появляется лихорадка. К этому времени образуются антитела. Они инактивируют лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхиматозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептоспиры недоступны воздействию антител, где они активно размножаются и выделяются с мочой.

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.

Эпизоотологические данные. К лептоспирозу восприимчивы все сельскохозяйственные, домашние и многие виды диких животных, особенно в молодом возрасте, а также птица.

Различают природные и антропоургические очаги (связанные с деятельностью человека) лептоспироза. Источником инфекции в природных очагах являются грызуны, насекомоядные, парнокопытные, хищные млекопитающие многих видов, реже птицы, выделяющие патогенных лептоспир в окружающую среду с мочой.

В антропоургических очагах источником возбудителя являются больные и переболевшие животные-лептоспироносители (свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, собаки, домовые мыши и крысы), а также больные люди, выделяющие возбудитель преимущественно с мочой и инфицирующие внешнюю среду, в том числе водоемы. У животных лептоспироз может протекать бессимптомно, а лептоспиры могут выделяться с мочой в течение многих месяцев.

Основные пути заражения – контактный и алиментарный. Лептоспироносителями являются мышевидные грызуны. Крысы и прочие грызуны являются основным резервуаром и источником распространения заболевания.

Лептоспироз – природноочаговая болезнь, ему свойственна энзоотичность; возникает в любое время года среди жвачных, в основном в пастбищный сезон.

Предубойная диагностика. У крупного рогатого скота появляется угнетенное состояние, связанность в движениях, отказ от корма, атония преджелудков, гемоглобинурия, желтушность слизистых оболочек, повышение температуры тела до 41,5 ⁰С, у некоторых животных отмечались некрозы кожи сосков вымени и стельные коровы абортируют.

У свиней заболевание чаще протекает бессимптомно или с проявлениями кратковременной лихорадки, абортов, рождением мертвых или нежизнеспособных поросят, некротическими поражениями на различных участках кожного покрова. При скрытой или атипичной форме болезни применяют бактериоскопию мазков-опечатков, серологические исследования (РНГА), разработанные Б.К. Ильясовым, Т.И. Тугамбаевым.

В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА).

Послеубойная диагностика. Видимые слизистые оболочки желтушны, изредка кожа и подкожная клетчатка, сухожилия, фацсии – молочно-желтого цвета. Серозные оболочки также желтушны с точечными и полосчатыми кровоизлияниями. В грудной полости красновато-желтоватая жидкость.

Легкие иногда отечны с точечными кровоизлияниями под плеврой. Мышца сердца дряблая. Печень обычно дряблая, кровонаполненная, глинисто-желтая, неравномерно окрашена и на поверхности ее глинисто-желтые пятна различной величины. В корковом слое почек, эпикарде во многих случаях множественные точечные кровоизлияния, граница между корковым и мозговым слоями почек сглажена. У переболевших животных находят интерстициальный нефрит. Моча в мочевом пузыре красного цвета. Устанавливая дифференциальный диагноз, следует исключить пироплазмоз и острый некробактериоз печени. Эти болезни не сопровождаются некрозом кожи и слизистых оболочек.

При пироплазмозе, кроме того, селезенка бывает увеличенной, полнокровной, а при гнойном гепатите в печени множественные гнойные очаги.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3-5 сутки болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирают не позже 2 ч после гибели животного. Мочу собирают при естественном мочеиспускании; в летнее время исследуется не позднее 3 ч после взятия.

Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровь, тканевую суспензию из коркового слоя почки, печени, у плода – из всех органов. Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры активно подвижны и имеют форму прямой или S-образной с загнутыми в виде крючков концами серебристо-белой нити. Лептоспир также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити.

Выделение культур. Материал засевают по 1-3 капли в 3-5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при 28-30 ⁰С в течение 3 месяцев. Лептоспиры начинают размножаться через 7-20 суток, иногда через 1-2 и очень редко – 3 месяца. Наличие роста определяют темнопольной микроскопией раздавленных капель на 3, 5, 7, 10 сутки и далее через каждые 5 суток. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3-5 пробирок со свежей средой. Выделить культуры лептоспир удается не всегда.