Материал: Practicum_po_microbiologii

Тема 30. Возбудители эшерихиозов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителей эшерихиозов и методы бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим и культуральным свойствам кишечной палочки и биопрепараты. Для приготовления препаратов – мазков-отпечатков – суточные культуры кишечной палочки, реактивы для окрашивания их по Граму, среда Эндо, среда Левина, среда Гисса, кровяной МПА, пробирки со взвесью культур кишечной палочки, диагностические агглютинирующие сыворотки для серо-групповой типизации кишечной палочки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Кишечная палочка, ее морфологические и культуральные свойства, ее роль в возникновении кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных.

2. Схема бактериологического исследования материала на эшерихиоз.

1. Классификация возбудителя

Сем: Enterobacteriaceae

Род: Escherichia

Вид: E. coli (энтеропатогенные штаммы)

2. Общая характеристика болезни:

Колибактериоз – острая инфекционная болезнь молодняка сельскохозяйственных животных, характеризующаяся главным образом диареей.

3. Восприимчивые животные:

- все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц и пушных зверей, главным образом, молодняк;

- болеет человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит алиментарным путем, реже аэрогенным;

- возбудитель проникает в кровь, вызывает сепсис или размножается в кишечнике - энтеротоксическая или энтеритная формы;

- факторы вирулентности – возбудитель продуцирует термолабильный экзотоксин и термостабильные эндотоксины, гемолизины, обладает адгезией и др.

Методы диагностики (рис. 81)

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при жизни - кал;

- посмертно – труп целиком, отрезок тонкого кишечника, брыжеечные лимфатические узлы, паренхиматозные органы, головной мозг.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: полиморфные палочки до 3 мкм, располагаются одиночно, реже попарно (рис. 82);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) подвижны.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические среды (среда Эндо, среда Левина и др.);

б) особенности выделения возбудителя:

- факультативные анаэробы;

Рис. 81. Схема лабораторной диагностики эшерихиоза (колибактериоза)

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка;

- на МПА – сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии;

- на среде Эндо – ярко-красные колонии, на среде Левина – темно-фиолетовые или черные колонии (рис. 83).

Рис. 82. Возбудитель эшерихиоза (энтеропатогенные кишечные палочки) чистая агаровая культура. Увеличение х900

Рис. 83. Рост кишечных палочек на среде Левина. Колонии темно-фиолетовые или черные. Увеличение х2

г) биохимические свойства:

- обладают высокой сахаролитической активностью; для выявления проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гисса);

- ферментируют с образованием кислоты и газа – глюкозу, лактозу, маннит, не расщепляют сахарозу;

- желатин не разжижают, сероводород не образуют, образуют индол, дают положительную реакцию с метиленовым красным (ярко-розового цвета), отрицательная реакция Фогес-Проскауэра;

д) биопроба

- внутримышечно заражают выделенной микробной культурой белых мышей и цыплят.

Б. Серологический метод:

- используют РА (пробирочная и на стекле) для серотипизации полученного антигена (микробной культуры) с поли- и моновалентными коли-сыворотками;

- используют реакцию иммунофлюоресценции.

В. Аллергический метод:

- не применяется.

4. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивированная ГОА – формолтиомерсаловая вакцина (вводят стельным коровам, супоросным свиноматкам, суягным овцам);

- колипротектант ВИЭВ (взвесь убитой нагреванием культуры эшерихий, отмытой от токсинов и консервированной формалином).

5. Биопрепараты для специфической терапии:

- поливалентная гипериммунная сыворотка,

- коли-гертиеровский бактериофаг.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологические, культуральные, биохимические свойства кишечной палочки.

2. Приготовить препараты-мазки из суточных культур кишечной палочки, окрасить по Граму и микроскопировать.

3. Изучить бактериологическую диагностику эшерихиоза сельскохозяйственных животных.

4. Приготовить препарат «висячая» капля из бульонной культуры кишечной палочки и провести микроскопию для установления подвижности.

5. Провести серотипизацию культуры кишечной палочки в РА с использованием поли- и моновалентных коли-сывороток.

Тема 31. Возбудители сальмонеллезов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить возбудителей сальмонеллезов и методы их бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации таблица-схема проведения исследования на сальмонеллез, биопрепараты. Питательные среды: МПА, МПБ, Эндо, Плоскирева, Кларка и Симмонса, среда с лактозой, индикаторные среды для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для видовой дифференциации сальмонелл.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Виды сальмонелл, имеющие наибольшее значение в патологии животных.

2. Сальмонеллы, их морфологические и культуральные свойства, их роль в возникновении кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных.

3. Схема бактериологической диагностики болезней, вызванных сальмонеллами.

1. Классификация возбудителей

Сем: Enterobacteriaceae

Род: Salmonella

Виды сальмонелл, имеющих наибольшее значение в патологии животных:

1. S. enteritidis (dublin) - у телят.

2. S. choleraesuis (suipestifer)- у поросят.

3. S. typhisuis- у свиней.

4. S. typhimurium- у водоплавающей птицы.

5. S. abortus egui- аборт кобыл.

6. S. abortus ovis- у овец.

7. S. pullorum- у птиц.

2. Общая характеристика болезни:

Сальмонеллезы – группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.-х. животных и промысловых животных, характеризующихся при остром течений лихорадкой и профузным поносом, при хроническом – воспалением легких. У взрослых животных болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), а у беременных самок возможны аборты. У человека могут возникать пищевые токсикоинфекции при употреблении продуктов, содержащих токсины сальмонелл.

3. Восприимчивые животные:

- все виды животных, особенно молодняк, включая птиц, промысловых животных и человека.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- Основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное.

- Размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенным путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы.

- Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.

Методы диагностики (рис. 84)

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при жизни – кал, сыворотка крови;

- посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.

2. Микроскопия

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно (рис. 85);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

Рис. 84. Схема лабораторной диагностики сальмонеллезов

Рис. 85. Возбудитель сальмонеллеза (чистая агаровая культура). Увеличение х900

д) капсулу не образуют;

е) подвижны (за исключением S. pullorum).

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др., накопительные.

б) особенности выделения возбудителя

- факультативные анаэробы;

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям:

- на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка,

- на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии,

- на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина - светло-фиолетовые колонии.

После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).

г) биохимические свойства:

- обладают высокой сахаролитической активностью;

для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса). При этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;