Материал: Practicum_po_microbiologii

Тема 50. Возбудители хламидиозов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики хламидиозов.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходима таблица-схема микробиологической диагностики хламидиозов, готовые фиксированные неокрашенные препараты хламидий (вакцинный штамм), окрашенные препараты по Маккиавеллу, вакцинный штамм возбудителя и эритроциты для постановки РГА.

1. Классификация возбудителя:

Сем.: Chlamydiaceae

Род: Chlamydia

Виды: 1. Ch. trachomatis (подгруппа А – возбудитель трахомы человека);

2. Ch. psittaci (подгруппа Б – возбудитель орнитоза и хламидийных абортов с.-х. животных)

2. Общая характеристика болезни:

1. Орнитоз (пситтакоз) – инфекционная болезнь, которая у птиц проявляется поражением желудочно-кишечного тракта, истощением, параличами конечностей и крыльев; у сельскохозяйственных животных (телята, свиньи); у человека – респираторного аппарата.

2. Хламидийный аборт – хроническая инфекционная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, свиней, кобыл, характеризующаяся абортами, могут возникать пневмонии, энтериты, полиартриты, иногда происходит нарушение центральной нервной системы.

3. Восприимчивые животные

- все виды, включая птиц. Болеет и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- основные пути заражения – аэрогенный, алиментарный и половой;

- при аэрогенном заражении развитие происходит в легких и регионарных лимфатических узлах, что приводит к нарушению целостности эпителия и кровеносных сосудов. Возбудитель далее проникает в кровь, паренхиматозные органы, кишечник, вызывая токсемию;

- хламидии при беременности размножаются в плаценте, вызывая плацентит и некрозы;

- основным фактором вирулентности у них является некротоксин.

Методы диагностики (рис. 148):

А. Микробиологическая диагностика:

1. Материал для исследования:

- на орнитоз: от птиц – кишечник, от млекопитающих – некротизированные участки легких, паренхиматозных органов и кишечник;

- на хламидийный аборт – абортированный плод, околоплодные оболочки, выделения из шейки матки и влагалища.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: по Граму, по Романовскому-Гимзе, по Маккиавеллу;

б) микрокартина: инфекционной формой являются округлые элементарные тельца от 0,2 до 0,4 мкм;

- по Маккиавеллу окрашиваются в красный цвет;

- по Романовскому-Гимзе – в красно-фиолетовый;

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) неподвижны.

Рис. 148. Схема лабораторной диагностики хламидиозов

3, 4. Культивирование на биологических моделях:

Хламидии являются строгими внутриклеточными паразитами, поэтому не растут на искусственных питательных средах. Для их выделения заражают биологические модели:

куриные эмбрионы, культуры клеток, цыплят, белых мышей, морских свинок.

Б. Серологический метод:

- используют РСК, РГА, РИФ.

В. Аллергический метод:

- применяется при диагностике орнитоза у птиц, в качестве аллергена используют орнитин.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- эмульсин. Вакцина против хламидиоза животных культуральная инактивированная.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- отсутствуют.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологические свойства хламидий на демонстрационных препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Окрасить готовые фиксированные препараты по Маккиавеллу и микроскопировать.

2. Поставить РГА с хламидиозным антигеном.

3. Изучить лабораторные методы диагностики хламидиозов.

Тема 51. Возбудители микозов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства микроскопических грибов и методы микологического исследования.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы плакаты, таблицы, биопрепараты, культуры микроскопических грибов, выделенных от животных, больных микозами; препаровальные иглы или микологические крючки, предметные и покровные стекла.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Возбудители микозов и вызываемые ими болезни.

2. Морфологические и культуральные особенности патогенных грибов, вызывающих микозы.

3. Методы лабораторной диагностики микозов.

1. Классификация возбудителей:

I. Поверхностные микозы кожи и ее производных (волосы, когти):

- Возбудители стригущего лишая

Роды: Trichophyton (трихофития)

Microsporum (микроспория)

Род: Achorion (парша).

II. Глубокие микозы:

Род: Criptococcuc farciminosus(эпизоотический лимфан­гит)

III. Висцеральные (внутренние) – микозы с локализацией процессов в органах дыхания или других органах:

Роды: Mucor (мукоромикоз)

Penicillium (пенициллез)

Aspergillus (аспергиллез)

Candida (кандидомикоз)

Coccioides (кокцидиоидомикоз).

2. Общая характеристика болезни:

- Стригущий лишай – хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся зудом и появлением на коже участков с обломанными волосами, покрытых корками и чешуйками.

- Парша (фавус) – хроническая инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих, характеризующаяся поражением кожи, перьев, внутренних органов.

- Эпизоотический лимфангит (африканский сап) – хроническая инфекционная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся гнойным воспалением кожи, подкожной клетчатки с поражением лимфатических сосудов и узлов.

- Кандидомикоз (молочница) – хроническая инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих и человека, характеризующаяся поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта, других внутренних органов, иногда кожи.

- Висцеральные микозы – инфекционные болезни многих видов животных, включая птиц и человека, характеризующиеся в основном поражением органов дыхания с вовлечением лимфатических узлов.

3. Восприимчивые животные:

- все виды, включая птиц. Восприимчив и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности (стригущий лишай)

- возбудители размножаются в тканях, содержащих роговое вещество кератин, находящийся в коже, в роге. Он проникает в волосяные фолликулы и в шейку волоса, корковое вещество, что ведет к нарушению питания волос и его выпадению, развивается воспалительная реакция,

- возбудители выделяют токсины и кератолитические ферменты.

Методы диагностики стригущего лишая (I), кандидомикоза (II).

А. Микологическая диагностика (рис. 149, 150):

1. Материал для исследования:

- соскобы с мест поражения кожи (волос, эпидермис и др.) (I);

- трупы мелких животных, соскобы со слизистой оболочки ротовой полости; молоко из пораженной доли вымени (II).

2. На дерматомикозы патологический материал обрабатывают 10%-ным раствором едкого натра в течение 20 мин и готовят препарат «раздавленная капля» с 50%-ным раствором глицерина;

а) микроскопируют объективами х8 и х40 в затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой); на кандидомикоз готовят мазки-препараты, фиксируют и окрашивают метиленовой синью или раствором Люголя.

Рис. 149. Схема лабораторной диагностики дерматомикозов

Рис. 150. Схема лабораторной диагностики кандидомикоза

б) микрокартина:

- при трихофитии – гифы не разветвлены, споры лежат правильными рядами вдоль волоса (рис.151);

Рис. 151. Волос, пораженный грибом рода Trichophyton. Увеличение х400

- при микроспории – гифы и споры по отношению волоса располагаются беспорядочно (рис. 152);

Рис. 152. Волос, пораженный грибом рода Microsporum. Увеличение х400

- при кандидомикозе – дрожжеподобные грибы имеют шаровидную овальную форму до 10 мкм (рис. 153.)

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды:

- сусло агар (неохмеленное пивное сусло и 2% агар-агара);

- среда Сабуро (глюкоза, пептон, агар-агар);

- среда Чапека (глюкоза, набор ми­неральных солей, агар-агар);

Рис. 153. Возбудитель кандидомикоза из соскоба со слизистой оболочки ротовой полости собаки. Увеличение х400

б) особенности выделения культуры:

- аэробы,

- оптимальная температура 28-30ºС,

- срок культивирования 7-10 дней,

в) культуральные свойства:

При определении рода и вида возбудителей изучают их морфологические особенности в динамике развития на питательных средах. Для этого колонии, выросшие на средах вначале микроскопируют под стереоскопическим или обычным микроскопом под малым увеличением (х8). Далее готовят препараты «раздавленная капля» и микроскопируют под объективами х8 и х40.

- возбудители стригущего лишая на средах образуют гладкие или складчатые со слизистым налетом колонии;

- в препаратах из культуры возбудителей мицелий разветвлен, септирован. У трихофитонов на концах гифов разветвления в виде рогов оленя, у микроспорона – спиралевидные или ракетообразные. Образуют споры и макроконидии;

- возбудитель микроспории под ультрафиолетовыми лучами светится зеленым светом;

- возбудитель кандидомикоза на средах образует гладкие или шероховатые колонии различной окраски.

4. Биопроба:

- при стригущем лишае заражать белых мышей, морских свинок, втирая материал в скарифицированную кожу;

- при кандидомикозах внутривенно заражают белых мышей, морских свинок, кроликов.

Б. Серологическая диагностика:

- в ветеринарной практике не используют.

В. Аллергическая диагностика:

- в ветеринарии не используют.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- при трихофитии – живые вакцины ТФ-130 или ЛТФ-130,

- при микроспории – вакцину «Ментовак».

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- при трихофитии – живые вакцины ТФ-130 или ЛТФ-130.

Задания для самостоятельной работы

1. Ознакомиться с культуральными свойствами возбудителей микозов.

2. Приготовить препараты из культур патогенных грибов, выделенных от животных, больных микозами, и изучение их морфологических свойств.