Материал: Practicum_po_microbiologii

Определить, при каком сочетании объектива и окуляра проводилась микроскопия?

А. х90 и х7.

Б. х90 и х10.

В. х90 и х15.

Г. х40 и х15.

4. При микроскопии препарата с объективом х90 и окуляром х10 получено нерезкое изображение.

Найти ошибку, которая была допущена при проведении микроскопии.

А. Конденсор не поднят до конца.

Б. Микроскопия проводится без масла.

В. Использовано вогнутое зеркало.

5. При микроскопии препарата с использованием объектива х90 и окуляра х10 выявлена слабая освещенность поля зрения.

Ваши действия по устранению этого недостатка:

А. Поднять конденсор до уровня предметного столика.

Б. Проверить и открыть диафрагму конденсора.

В. Нанести на препарат иммерсионное масло.

6. Размеры бактерии измеряются в микрометрах (мкм), один мкм составляет:

А. 1/10 мм.

Б. 1/100 мм.

В. 1/1000 мм.

7. Структурные образования бактериальной клетки измеряются нанометрах (нм), один нм составляет:

А. 1/10 мкм.

Б. 1/100 мкм.

В. 1/1000 мкм.

8. Завершив микроскопию с использованием иммерсионной системы, необходимо сделать:

А. Поднять макровинтом тубус из масла и убрать препарат.

Б. Убрать препарат, поднять тубус микроскопа макровинтом.

9. После работы с микроскопом с использованием иммерсионной системы необходимо сделать:

А. Макровинтом поднять тубус, убрать препарат, салфеткой снять с объектива масло, поставить объектив х8, подложить салфетку под объектив, опустить тубус и конденсор.

Б. Убрать препарат, макровинтом поднять тубус, снять с объектива масло, поставить объектив х8, подложить салфетку под объектив, опустить тубус и конденсор.

В. Макровинтом поднять тубус, убрать препарат, поставить объектив х8, подложить салфетку под объектив, опустить тубус и конденсор.

10. При микроскопии препарата с иммерсионным объективом допущена ошибка, которая привела к получению нерезкого изображения. Найдите способ исправления ошибки.

А. Нанести на препарат иммерсионное масло.

Б. Вращать макровинт.

В. Вращать микровинт на полоборота в ту или иную сторону.

11. Установлено, что стафилококки при микроскопировании имеют диаметр, равный 1,35 мм, в действительности этот микроорганизм имеет диаметр, равный 1 мкм. Определите, при каком сочетании объектива и окуляра проводилась микроскопия?

А. Объектив х40, окуляр х15.

Б. Объектив х90, окуляр х7.

В. Объектив х90, окуляр х10.

Г. Объектив х90, окуляр х15.

12. Конденсор микроскопа предназначен для:

А. Уменьшения светового потока.

Б. Фокусирования световых лучей на плоскости рассматриваемого объекта.

В. Увеличения изображения объекта.

13. Микровинт микроскопа предназначен для:

А. Фокусировки при работе с объективом х40.

Б. Фокусировки при работе с объективом х90.

В. Перемещения препарата при микроскопии при работе с объективом х90.

14. При работе с микроскопом при увеличении х90 микровинт не вращается. Ваши действия по восстановлению работы микровинта:

А. Микровинт вращать в обратную сторону, добиваясь положения белой точки на середине между двумя белыми линиями.

Б. Поднять макровинтом объектив х90 из масла, вращая микровинт в обратную сторону, добиться положения белой точки на середине между двумя белыми линиями.

В. Обратиться за помощью к преподавателю.

Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Овладеть методикой приготовления препаратов для микроскопии и их окраски простым методом. Ознакомиться с основными формами бактерий.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки со взвесью бактериальных культур (кишечная палочка, стафилококки, вакцинный штамм бациллы сибирской язвы). Набор растворов красок – разведенный фуксин, щелочная метиленовая синь; предметные стекла, спиртовки, бактериологические петли, микроскопы.

Таблицы, схемы.

3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии

Препараты для микроскопии готовят на предметных стеклах. Для работы необходимо иметь специально приготовленные предметные и покровные стекла, которые должны быть чистыми и обезжиренными.

Новые стекла моют в теплой воде с мылом. Для обезжиривания их помещают на 2-3 дня в смесь Никифорова (равные объемы спирта и эфира в сосуде с притертой пробкой).

Если предметные или покровные стекла были в употреблении, их обрабатывают хромовой смесью, промывают водой, кипятят 30-40 мин в 5%-ном растворе соды.

Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем почистить сухой тканью. Капля воды, нанесенная на хорошо обезжиренное стекло, растекается равномерно. На недостаточно обезжиренном стекле вода распадается на мелкие капли.

В зависимости от характера исследуемого материала при его взятии используют бактериологическую петлю или пастеровскую пипетку. Петлю делают из платиновой или нихромовой проволоки длиной 5-6 см и закрепляют в петледержателе. На конце проволоки делают петлю. Петлю держат, как карандаш. Рабочую часть петли стерилизуют в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем петледержатель.

Приготовление окрашенного препарата (мазка) состоит из нескольких этапов (рис. 7): 1) приготовление; 2) высушивание; 3) фиксация; 4) окраска.

Рис. 7. Схема приготовления препарата-мазка

1. Приготовление мазка

На предметном стекле с обратной стороны восковым карандашом обозначают место мазка диаметром 2-3 см.

Из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, стерильной петлей берут каплю материала и распределяют на предметном стекле. Из культур, выращенных на плотной среде, петлей с поверхности берут небольшое количество материала, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора или воды и размазывают по стеклу.

Из плотного патологического материала (печень, почки, селезенка и др.) делают мазки-отпечатки. Для этого стерильными ножницами отрезают кусочек органа и прикладывают к предметному стеклу, делая один или несколько отпечатков.

2. Высушивание мазка

Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в термостате.

3. Фиксация мазка

Мазки фиксируют после полного высыхания с целью:

1) закрепить мазок на стекле;

2) убить бактерии;

3) убитые бактерии лучше воспринимают краску.

Фиксацию мазков осуществляют одним из двух способов: физическим и химическим. Физический метод заключается в трехкратном проведении обратной стороной мазка через пламя спиртовой горелки, задерживая в пламени на 1-2 секунды.

При химическом способе мазок погружают в жидкости:

а) этиловый спирт 96°-ный на 10-15 минут, или

б) смесь равных объемов спирта и эфира на 10-15 мин, или

в) ацетон - 5 минут.

4. Окраска мазка

Бактерии различно относятся к красителям, эти свойства называют тинкториальными.

3.2. Бактериологические краски

Наиболее широко в микробиологии используют анилиновые красители основного и нейтрального характера. Для окраски мазков применяют красители:

1) красные (фуксин основной, нейтральрот);

2) синий (метиленовый синий);

3) фиолетовые (генцианвиолет, кристаллвиолет, метилвиолет);

4) зеленые (бриллиантовая зелень, малахитовая зелень).

Все применяемые красители поступают в лаборатории в сухом порошкообразном или кристаллическом виде. Из таких красителей, как основной фуксин, генцианвиолет, метиленовая синь, заранее готовят насыщенные спиртовые растворы.

Р е ц е п т ы к р а с и т е л е й:

1. Карболовый фуксин Циля

Основной фуксин	1 г
Спирт 95°-ный	10 мл
Карболовая кислота кристаллическая	5 г
Глицерин	5 – 6 капель
Вода дистиллированная	100 мл

Через 48 ч краситель фильтруют. Срок хранения длительный.

2. Разведенный фуксин Пфейффера

Фуксин Циля	1 мл
Вода дистиллированная	9 мл
Срок хранения не более	1 суток.

3. Щелочная метиленовая синь Лефлера

Насыщенный раствор сини спиртовой	30 мл
1 %-ный раствор едкого натра или калия	1 мл
Вода дистиллированная	100 мл

Срок хранения длительный.

4. Карболовый генцианвиолет

Насыщенный спиртовой раствор Генцианвиолета	10 мл
5%-ный раствор карболовой кислоты	100 мл