Материал: Practicum_po_microbiologii

17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Почва является естественной средой обитания микроорганизмов. В ней имеются все условия для благоприятного их развития (достаточное количество влаги, органических и минеральных веществ). Из природных субстратов почва обильно заселена микроорганизмами, которые составляют ее постоянную микрофлору. Санитарно-гигиеническая роль этой микрофлоры огромна. Почвенные микроорганизмы участвуют в минерализации органических отбросов, самоочищении почвы, в круговороте веществ в природе.

В почву могут попадать патогенные микроорганизмы со сточными водами, с трупами людей и животных. В связи с этим почва может служить источником распространения возбудителей инфекционных болезней, через почву загрязняются объекты окружающей среды, может происходить обсеменение сапрофитными и болезнетворными микроорганизмами сырья, пищевых продуктов, кормов.

Количественный и видовой состав микроорганизмов в почве обусловлен содержанием в ней органических веществ, влаги, рН, температурой, климатическими условиями и т.д.

В составе микрофлоры почвы принято выделять так называемые физиологические группы микроорганизмов, которые участвуют в различных процессах и на разных этапах постепенного разложения органических веществ, к которым относятся:

1. Аммонофикаторы (гнилостные).

2. Нитрифицирующие бактерии.

3. Азотофиксирующие.

4. Бактерии, расщепляющие клетчатку, а также вызывающие различные брожения (молочнокислое, спиртовое, маслянокислое и др.)

5. Бактерии, участвующие в круговороте серы, железа, фосфора других элементов.

В почве могут быть и патогенные бактерии, продолжительность их выживаемости зависит от вида и условий внешней среды.

Неспорообразующие патогенные бактерии и вирусы погибают в ней в течение нескольких суток или месяцев, в частности, возбудитель туберкулеза в почве сохраняется до 1 года.

Особое место занимают возбудители почвенных инфекций (сибирской язвы, эмфизематозного карбункула, столбняка, ботулизма), которые образуют споры и сохраняются в почве годами, а возбудитель сибирской язвы – десятки лет.

Краткий санитарно-бактериологический анализ почвы включает определение двух показателей: общего количества микробов (в 1 г почвы) и коли-титра.

В отдельных случаях в почве определяют возбудителей сибирской язвы, столбняка, ботулизма.

Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1000 м выделяют два участка по 25 м² каждый: один участок выбирают вблизи, другой – вдали от источника загрязнения. С каждого участка отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали или в четырех точках по краям и в одной в центре. Образцы берут на глубине до 20 см, при исследовании почвы скотомогильников – ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см, Пробы отбирают стерильной железной лопаткой, совком или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером отобранной почвы.

Масса каждого образца должна быть 200-300 г, а смешанного – не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее чем через 12-18 ч при хранении при 1-5 °С.

В колбу на 500 мл, наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из полученного разведения почвы 1:10^-1 готовят десятикратные разведения: для чистых почв 1:10^-2 до 1:10^-4, для загрязненных – до 1:10^-6 и больше.

Определение общего микробного числа (ОМЧ)

Из последних 3-4 пробирок приготовленных разведений берут 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не менее двух чашек на каждое разведение). В эти чашки заливают по 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С МПА и тщательно перемешивают. Посевы культивируют в термостате при 37°С 24-48 ч.

Учет результатов проводят путем подсчета выросших колоний и определения среднеарифметического числа. Полученное число колоний умножают на степень разведения исследуемой почвы, получая число бактерий в 1 г почвы.

Определение коли-титра почвы методом бродильных проб с использованием среды Кесслера. Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых почв от 1:10^-1 до 1:10^-3: для загрязненных – от 1:10^-3 до 1:10^-6 . После тщательного перемешивания 1 мл полученной суспензии из различных разведений переносят в пробирку с 9 мл среды Кесслера (на 1 л дистиллированной воды 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 2,5 г лактозы, 4 мл 1%-ного водного раствора генцианвиолета). Посевы культивируют при 43°С в течение 48 часов.

На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслера. Из пробирок с наличием газа продолжают высев на среду Эндо. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.

На третьем этапе исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Отбирают колонии, типичные для бактерий группы кишечных палочек, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких полиморфных грамотрицательных палочек производят высев из этих колоний на среду Кесслера для подтверждения газообразования в чистой культуре.

Таблица 3

Санитарно-бактериологические показатели почвы

Задание для самостоятельной работы

1. Провести исследование воздуха в различных помещениях кафедры на общую бактериальную загрязненность методами седиментации (по Коху) и с использованием аппарата Кротова.

2. Провести исследование различных образцов почвы для определения общего микробного числа и коли-титра.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Дать представление о санитарно-показательных микроорганизмах.

2. Микрофлора воздуха и почвы и источники ее загрязнения.

3. Методы санитарно-бактериологического исследования воздуха.

4. Методы санитарно-бактериологического исследования почвы.

Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать общее представление о микрофлоре воды, о путях загрязнения, овладеть методами ее исследования.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробы воды: водопроводная и речная; чашки Петри, в пробирках – расплавленный МПА (столбиком), стерильные пипетки на 1 мл, стерильный физиологический раствор по 9 мл.

Для демонстрации – прибор Зейтца, водоструйный вакуумный насос, мембранные фильтры (№ 3), среда Эндо в чашках; глюкозо-пептонная или лактозо-пептонные среды с индикатором и поплавками, разлитые по колбам и пробиркам. Для определения коли-титра методом бродильных проб заранее делаются посевы воды для получения отрицательных и положительных результатов.

Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут попадать в питьевую воду.

Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно предприятий, перерабатывающих животное сырье и др. Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их свойств, времени года, наличия питательных веществ и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, бруцеллы до 100 дней, возбудитель туберкулеза до 1 года.

Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы и др.).

Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней и возникновения эпизоотии.

Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение общего количества микробов (ОМЧ);

2) Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) Обнаружение в воде патогенных микроорганизмов.

При санитарно-бактериологических исследованиях пробы воды забирают не менее 0,5 л. Из открытых водоисточников пробу отбирают батометром (рис. 52). Батометр – стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, потягивая ее за веревочку. После поднятия батометра пробку заменяют на ватную. Воду из рек, озер отбирают с глубины 10-15 см от поверхности, а при небольшой глубине на расстоянии 10-15 см от дна.

Для отбора проб воды из кранов водопровода используют стерильные колбы на 0,5 л с ватной пробкой. Кран перед забором пробы стерилизуют обжиганием горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду при полном открытии крана. Пробы воды исследуют тотчас же или не позднее 2 ч с момента взятия. Если это невозможно, то хранят не более 6 ч при 1-5 ^СС.

Определение общего количества микробов (ОМЧ) в воде. При определении ОМЧ в водопроводной воде производят посев без разведения, внося 1 мл ее в стерильную чашку Петри. При исследовании воду открытых водоемов, сточных вод предварительно разводят стерильной водопроводной водой в зависимости от предполагаемого загрязнения: от 1:10^-1 до 1:10^-4 , так же вносят из последних разведений по 1 мл в стерильные чашки Петри.

Посевной материал заливают расплавленным и охлажденным до 45°С МПА и после застывания инкубируют в термостате при 37°С 24 ч. После этого срока проводится подсчет выросших колоний и методом расчета определяется общее количество микробов в 1 мл исследуемой воды.