Материал: Practicum_po_microbiologii

- образует экзотоксины: отечный, летальный, защитный (протективный);

- внутри инфицированного организма возбудитель образует капсулы.

Методы диагностики (рис. 103):

Рис. 103. Схема лабораторной диагностики сибирской язвы

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при подозрении на сибирскую язву категорически запрещено вскрывать трупы;

- ухо павшего животного или толстые мазки крови;

- при вынужденном убое – паренхиматозные органы, отечная ткань.

2. Микроскопия

а) методы окраски: по Граму, на капсулу (методы Ольта, Михина),

б) микрокартина: крупные палочки до 10 мкм, располагаются одиночно, попарно в виде коротких цепочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные – слегка закругленные.

в) грамположительные;

г) в почве и культуре образует споры (рис. 104);

д) в инфицированном организме вокруг палочек формируется капсула (рис. 105);

е) неподвижны.

Рис. 104. Возбудитель сибирской язвы из чистой агаровой культуры. Спорообразование. Увеличение х900

Рис. 105. Возбудитель сибирской язвы из селезенки белой мыши. Окраска по Ольту на капсулы. Увеличение х900

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ;

б) Особенности выделения возбудителей:

- факультативный анаэроб,

- оптимальная температура 37С,

- срок культивирования 18-20 ч,

в) культуральные свойства:

- на МПБ – прозрачный, на дне пробирки хлопьевидный осадок,

- на МПА – серо-белые колонии до 5 мм, край изрезанный – R-форма (рис. 106),

- на МПЖ – растет в виде «елочки», перевернутой верхушкой вниз.

г) биохимические свойства:

- обладает умеренными сахаролитическими свойствами и протеолитической активностью, разжижает МПЖ;

- гемолиза на кровяном МПА не вызывает.

д) биопроба:

- заражают подкожно белых мышей, морских свинок.

Для идентификации возбудителя используют дополнительные методы:

- на гемолитические свойства,

- фаготипирование, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ),

- тест «жемчужного ожерелья» (выращивание на МПА с пенициллином); при положительном результате – возбудитель принимает шаровидную форму, расположенную в виде цепочек (рис. 107);

- реакцию преципитации.

Рис. 106. Край колонии (R-форма) возбудителя сибирской язвы. Увеличение х10

Рис. 107. Феномен «ожерелья» у возбудителя сибирской язвы под воздействием пенициллина. Увеличение х1350

Б. Серологический метод:

- реакцию преципитации (РП) используют для исследования кожевенно-мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего исследуемого материала, для идентификации выделенных культур.

В. Аллергический метод:

- для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики предложен аллерген ВНИИВиМ (антраксин).

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- живая бескапсульная вакцина-штамм СТИ,

- живая бескапсульная вакцина из штамма 55.

6. Биопрепараты для специфической терапии

- гипериммунная противосибиреязвенная сыворотка,

- противосибиреязвенный гаммаглобулин.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства вакцинных штаммов СТИ, Ланге, Ценковского на МПА, МПБ и кровяном агаре.

2. Приготовить препараты-мазки из суточной агаровой культуры вакцинного штамма СТИ, окрасить их по Граму и микроскопировать.

3. Приготовить препараты-отпечатки из печени морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, окрасить на капсулу (по Ольту или Михину) и микроскопировать.

4. Провести постановку РП методом наслаивания и оценить ее результаты.

Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить особенности морфологических, культурально-биохимических свойств патогенных анаэробов и схему проведения бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы: морфология микробов-анаэробов, формы колоний, схема бактериологической диагностики. Трупы морских свинок, павших после заражения (каждым видом отдельно) культурами, питательные среды – МППБ, глюкозо-кровяной агар, среда Вильеона-Блера, стерильные пастеровские пипетки, наборы инструментов. Окрашенные препараты.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Сущность анаэробного дыхания.

2. Методы создания анаэробиоза.

3. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические способности возбудителей анаэробных инфекций.

4. Схема бактериологической диагностики.

5. Биопрепараты для профилактики и терапии анаэробных инфекций.

40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)

1. Классификация возбудителя

Сем.: Bacillaceae

Род: Clostridium

Вид: Cl. Chauvoei (клостридиум Шаво)

2. Общая характеристика болезни:

Эмкар – острая неконтагиозная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота, реже овец, характеризующаяся развитием крепитирующих отеков в мышцах, хромотой и быстрой гибелью животных (рис. 108).

Рис. 108. Эмфизематозный карбункул – инфильтрат в межчелюстном пространстве

3. Восприимчивые животные:

- крупный рогатый скот, реже мелкий рогатый скот.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит при попадании спор с кормом, водой, через раны, укусы кровососущих насекомых. С током крови возбудитель попадает в мышцы, где интенсивно размножается, выделяя экзотоксин, гиалуронидазу, гемолизин. При этом происходит нарушение целостности кровеносных сосудов, что приводит к отеку и некрозу тканей, образовавшиеся газы вызывают образование крепитирующих припухлостей.

Методы диагностики:

А. Бактериологическая диагностика (рис 109):

1. Материал для исследования

- кусочки пораженных мышц, отечный экссудат, печень, селезенка, кровь сердца.

Рис. 109. Схема лабораторной диагностики эмфизематозного карбункула

2. Микроскопия

а) методы окраски: простой метод, по Граму, по Муромцеву,

б) микрокартина: полиморфные толстые, с закругленными концами палочки до 8 мкм (рис. 110).

в) грамположительные,

г) образуют споры,

д) не образуют капсулу,

е) подвижны.

Рис. 110. Возбудитель эмфизематозного карбункула из отечной жидкости погибшей коровы. Увеличение х900

3. Культивирование:

а) посевы на питательные среды: МППБ, сахарный кровяной МПА;

б) особенности выделения чистой культуры:

- облигатный анаэроб,

- оптимальная температура 37°С,

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на МППБ – помутнение, осадок, газообразование незначительное,

- на сахарном кровяном агаре – колонии в виде «перламутровой» пуговицы или виноградного листа (края изрезанные), узкая зона гемолиза.

4. Биопроба:

- заражают внутримышечно морских свинок.

Б. Серологическая диагностика:

- не применяется.

В. Аллергическая диагностика:

- не применяется.

5.Биопрепараты для специфической профилактики: инактивированная ГОА формолвакцина, живая вакцина из штамма №2/14.

6. Биопрепараты для специфической терапии: гипериммунная сыворотка.

40.2. Возбудители злокачественного отека

1. Классификация возбудителей

Сем.: Bacillaceae

Род: Clostridium

Виды: С1. septicum

С1. perfringens

С1. novji (С1. oedematiens)

С1. histoliticum

2. Общая характеристика болезни:

Злокачественный отек – острая неконтагиозная инфекционная болезнь животных, характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом.

3. Восприимчивые животные:

- все виды животных и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возникает после ранений, родов, травм, кастрации;

- образует экзотоксины, различные ферменты – протеолитические, сахаролитические, гемолитические и др., которые вызывают в мягких тканях отеки, некроз, скопление газа и интоксикацию организма.

Методы диагностики:

А. Бактериологическая диагностика (рис. 111):

1. Материал для исследования – кусочки пораженных органов, мышц, экссудат.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму, по Муромцеву;

б) микрокартина: С1. septicum – изолированные палочки с закругленными концами, в мазках-отпечатках с серозных оболочек – нити (рис. 112);

- С1. perfringens – толстые, короткие палочки, расположенные одиночно (рис. 113);

- С1. novji – крупные палочки, расположенные одиночно

(рис.114),

- С1. histoliticum – тонкие, стройные, с закругленными концами, расположенные одиночно, попарно (рис. 115),

в) все возбудители по Граму окрашиваются положительно;

г) образуют споры;

д) не образуют капсулу;

е) подвижны, за исключением С1. perfringens, который образует капсулу и неподвижен.

Рис. 111. Схема лабораторной диагностики злокачественного отека животных

Рис 112. С1. septicum в препаратах: 1 – из культуры; 2 – с поверхности печени морской свинки

3. Культивирование:

а) посевы на питательные среды: МППБ и сахарный кровяной МПА (КМПА),

б) особенности выделения чистой культуры:

- облигатные анаэробы,