Материал: Practicum_po_microbiologii

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Прокариоты отличаются от эукариотов следующими признаками:

А. Имеют ядро.

Б. Имеют рибосомы.

В. Имеют мезосомы.

Г. Имеют нуклеотид.

2. Найдите каждому описанию бактериальной структуры их функциональные свойства:

1. Мезосомы

2. Рибосомы

3. Нуклеотид

4. Цитоплазматическая мембрана

А. Осуществляет синтез белка.

Б. Участвует в передаче наследственных признаков.

В. Выполняет функцию активного транспорта различ­ных веществ в бактериальную клетку.

Г. Являются центрами дыхательной активности.

3. Подберите к рисункам названия для основных форм кокковидных бактерий:

А. Стафилококки.

Б. Стрептококки.

В. Диплококки.

Г. Сарцины.

Д. Тетракокки.

4. Подберите к рисункам названия для основных форм палочковидных бактерий:

А. Бактерии - не образующие спор.

Б. Бациллы - образующие споры.

В. Клостридии - образующие споры.

5. Подберите к рисункам названия для основных форм извитых бактерий

А. Вибрионы.

Б. Спириллы.

В. Спирохеты.

6. Установите правильную последовательность этапов при приготовлении препаратов для микроскопии:

А. Изготовление мазка, фиксация, высушивание, окраска.

Б. Изготовление мазка, высушивание, фиксация, окраска.

В. Изготовление мазка, фиксация, высушивание.

7. Фиксация мазков препаратов проводится с целью:

А. Прикрепить мазок к предметному стеклу.

Б. Убить микробы, находящиеся в патматериале.

В. Выявить внутреннюю структуру бактерий.

Г. Фиксировать жгутики.

8. При окрашивании бактерий необходимо хорошо знать цвета красок. Определите, какие краски имеют красный цвет:

А. Генцианвиолет.

Б. Фуксин.

В. Сафранин.

Г. Кристаллвиолет.

9. Для простого метода окрашивания препаратов используют следующие растворы красителей:

А. Метиленовая синь до 5 мин.

Б. Раствор Люголя до 3 мин.

В. Разведенный фуксин 2-3 мин.

Г. Карболовый фуксин до 5 мин.

10. Микроскопия препаратов, приготовленных из патологического материала и бактериальных культур, окрашенных простым методом, позволяет установить:

А. Форму бактерий.

Б. Жгутики.

В. Отсутствие или наличие бактерий.

Г. Капсулу.

Д. Подвижность.

Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать представление о сложных методах окрашивания бактерий. Овладеть методикой окраски бактерий по Граму.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Комплект оборудования для окраски мазков. Набор красок и реактивов для окрашивания по Граму: генцианвиолет (по Синеву), раствор Люголя, этиловый спирт 96°, разведенный фуксин. Пробирки со взвесью бактериальных культур (кишечная палочка, стафилококки, вакцинный штамм бациллы сибирской язвы). Спиртовки, предметные стекла, бактериологические петли. Микроскопы, иммерсионное масло.

Таблицы, рисунки, схемы и др.

4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий

Методы позволяют, как и простые, обнаружить бактерии в исследуемом материале и изучить их морфологические особенности. Вместе с тем эти методы дают возможность выявить различия химического состава бактериальной клетки (окраска по Граму), а также установить ее структурные особенности - наличие спор, капсул и др. Все эти признаки учитываются в лабораторной практике при определении вида бактерий.

Сложные методы окрашивания заключаются в том, что применяют несколько реактивов и растворов красителей.

4.2. Окрашивание по Граму

Это универсальный дифференциально-диагностический метод окраски. Все бактерии по своему отношению к окраске этим способом делятся на две группы: грамположительные (грампозитивные) и грамотрицательные (грамнегативные). Техника окрашивания состоит в следующем. На обычно приготовленный и фиксированный мазок накладывают небольшой кусочек фильтровальной бумаги, заранее пропитанный раствором генцианвиолета (модификация А.В. Синева) и смачивают 2-3 каплями воды. Окраска продолжается в течение 2 минут. Фильтровальную бумагу с генцианвиолетом удаляют и на мазок наносят несколько капель раствора Люголя на 2 минуты (мазок чернеет). Сливают люголевский раствор и действуют 96°-ным спиртом 30 секунд. Промывают водой. Дополнительно окрашивают разведенным фуксином. Промывают водой, высушивают между листами фильтровальной бумаги и микроскопируют под иммерсионным объективом.

Микрокартина: грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розовый (до красного). Шарообразные формы микроорганизмов в большинстве красятся по Граму положительно, извитые формы – отрицательно, палочковидные формы встречаются как грамположительные, так и грамотрицательные.

Для получения правильных результатов рекомендуется использовать суточные культуры микробов, применять свежеприготовленный раствор разведенного фуксина и проводить окрашивание параллельно с известными культурами микроорганизмов.

Механизм окраски по Граму объясняется физико-химическими особенностями строения цитоплазмы и клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных содержится значительно больше рибонуклеиновой кислоты и белков в цитоплазме и пептидогликана в клеточной стенке. Поэтому при обработке препарата генцианвиолетом и раствором Люголя у грамположительных бактерий образуется более прочное соединение ионов йода и красителя.

При обработке спиртом грамположительные бактерии удерживают краситель, а грамотрицательные обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в розово-красный цвет.

Задания для самостоятельной работы

1. Приготовить препараты из чистых культур кишечной палочки, стафилококка и вакцинного штамма сибирской язвы, окрасить по Граму.

2. Микрокартину зарисовать, результаты работы внести в бланк экспертизы.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Бактерии по-разному окрашиваются по методу Грама (Грам + и

Грам –), потому что:

А. Имеют капсулу.

Б. Различаются по форме клеток.

В. Различаются по структуре и химическому составу

клеточной стенки.

Г. Имеют различный состав химический цитоплазмы.

2. Какими структурно-химическими особенностями обладает клеточная стенка грамположительных бактерий в отличие от грамотрицательных?

А. Содержит фосфолипиды.

Б. Содержит липопротеины.

В. Имеет пептидогликан до 90% и многочисленные извитые канальца.

3. Выберите правильную последовательность красок и реактивов, необходимых для окраски препарата по Граму:

А. Генцианвиолет, обесцвечивание спиртом, промывание водой, раствор Люголя, разведенный фуксин.

Б. Разведенный фуксин, раствор Люголя, генцианвиолет, обесцвечивание спиртом, промывание водой.

В. Генцианвиолет, раствор Люголя, обесцвечивание спиртом, промывание водой, разведенный фуксин.

Г. Обесцвечивание спиртом, промывание водой, раствор Люголя, генцианвиолет, разведенный фуксин.

4. При окраске препарата по Граму, приготовленного из известной культуры грамположительных бактерий, допущена одна неточность, в результате чего при микроскопии обнаружены бактерии, окрашенные в красный цвет. Найти вероятную причину неправильной окраски бактерий:

А. Длительная окраска генцианвиолетом.

Б. Длительное обесцвечивание спиртом.

В. Кратковременная окраска разведенным фуксином.

Г. Длительная обработка раствором Люголя.

5. При окраске препарата по Граму, приготовленного из известной культуры грамотрицательных бактерий, допущена одна неточность, в результате чего при микроскопии обнаружены бактерии, окрашенные в фиолетовый цвет. Найти вероятную причину неправильной окраски бактерий:

А. Длительная окраска генцианвиолетом.

Б. Кратковременное обесцвечивание спиртом.

В. Длительная окраска разведенным фуксином.

Г. Длительная обработка раствором Люголя.

6. 1. Грамположительные бактерии окрашиваются:

2. Грамотрицательные бактерии окрашиваются:

А. В красный цвет.

Б. В фиолетовый цвет.

7. К грамположительным бактериям относятся возбудители:

А. Стафилококкозов.

Б. Сальмонеллезов.

В. Столбняка.

Г. Бруцеллеза.

8. К грамотрицательным бактериям относятся возбудители:

А. Колибактериоза.

Б. Сибирской язвы.

В. Туберкулеза.

Г. Некробактериоза.