Материал: Practicum_po_microbiologii

Министерство сельского хозяйства

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ

И ОБРАЗОВАНИЯ

ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Р.Г. ГОСМАНОВ, Н.М. КОЛЫЧЕВ, А.А. БАРСКОВ

ПРАКТИКУМ

ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ

ОМСК 2006

ПРЕДИСЛОВИЕ

При подготовке ветеринарного врача микробиологии и иммунологии отводится одно из ведущих мест. Знания, полученные при изучении этих дисциплин, составляют основу проведения лабораторной микробиологической диагностики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.

Предлагаемый «Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии» содержит современную информацию по программе преподавания микробиологии и иммунологии на ветеринарных факультетах. Практикум включает четыре раздела: «Общая микробиология и иммунология», «Серологические реакции», «Основы санитарной микробиологии», «Частная микробиология».

Значительно расширена и дополнена информация по современным методам диагностики, к которым отнесены реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный метод (ИФМ), полимеразная цепная реакция (ПЦР), ДНК-зонды.

Большой объем информации по частной микробиологии заставил отойти от привычной повествовательной манеры изложения. Описание диагностики болезней, вызываемых патогенными микроорганизмами дано в жестком схематическом ключе, на базе методов, приведенных в разделе «Общая микробиология».

Для достижения большей эффективности самоподготовки и контроля знаний большинство разделов завершают тестовые вопросы, которые могут быть использованы для компьютерного контроля. Практикум рассчитан для лабораторно-практических занятий на базе теоретических знаний.

При составлении практикума авторы стремились максимально использовать существующую нормативно-техническую документацию по диагностике инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Все практические замечания и пожелания авторами будут приняты с признательностью и благодарностью.

Раздел I. Общая микробиология

Главной целью изучения общей микробиологии является получение знаний и приобретение навыков самостоятельной практической работы, необходимых для проведения микробиологической лабораторной диагностики инфекционных болезней животных. Правильно и своевременно поставленный диагноз определяет основные условия организации и проведения мероприятий по ликвидации инфекционных болезней, характер и эффективность мер по искоренению очагов инфекции, успех специфической профилактики и терапии.

При диагностике инфекционных болезней прибегают к комплексу методов, основанных на эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. В большинстве случаев для окончательного подтверждения диагноза проводят лабораторную диагностику, которая включает:

1. Бактериологическую, вирусологическую, микологическую и др. диагностику.

2. Серологическую диагностику.

3. Генную диагностику.

I. Бактериологическая диагностика состоит из трех этапов:

1. Микроскопия окрашенных препаратов

2. Посев на питательные среды с выделением чистой культуры бактерий для установления культуральных и ферментативных свойств

3. Биопроба (заражение лабораторных животных) для определения вируленности, выделенных бактерий.

II. Серологическая диагностика включает в себя постановку серологических реакций.

III. Генная диагностика основана на проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР), ДНК-зондов и др.

Бактериологическая диагностика

ТЕМА 1. Принципы организации и оборудование ветеринарных лабораторий (1.1). Техника безопасности при работе в лаборатории (1.2). Общая схема проведения бактериологической диагностики (1.3). Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала для исследования (1.4).

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомить студентов с организацией и оборудованием ветеринарных лабораторий, с техникой безопасности при работе. Усвоить общую схему проведения бактериологической диагностики. Освоить технику взятия и консервации патологического материала.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Оборудование, аппаратура. Органы от трупов животных. Пинцеты, скальпели, ножницы. Деревянный ящик с опилками, металлический ящик, банки, полиэтиленовые мешочки и пленка, 5%-ный раствор карболовой кислоты, 30% раствор глицерина, хлористый натрий, дистиллированная вода. Форма сопроводительного письма на патологический материал. Таблицы, схемы.

1. Принципы организации и оборудование ветеринарных лабораторий

Лабораторная диагностика проводится ветеринарными лабораториями, которые по масштабу своей деятельности подразделяются на республиканские (областные, краевые), зональные, районные, специальные – на предприятиях, перерабатывающих животноводческую продукцию (мясо-, молочные комбинаты и др.). В ветеринарных лабораториях проводят диагностические исследования инфекционных болезней: на туберкулез, бруцеллез, сибирскую язву, рожу свиней и др.

Бактериологические лаборатории обычно размещаются в нескольких помещениях, которые в зависимости от объема работы и целевого назначения занимают большую или меньшую площадь. В каждой лаборатории предусмотрены: а) боксы для работы с отдельными группами бактерий или вирусов; б) помещения для серологических исследований, приготовления питательных сред, стерилизации, мойки посуды; виварий с боксами для здоровых и подопытных животных.

В лаборатории должно быть следующее оборудование: биологический иммерсионный микроскоп с дополнительными приспособлениями (осветителем, фазово-контрастным устройством, темнопольным конденсором и др.), люминесцентный микроскоп, термостаты, оборудование для стерилизации (автоклавы, сушильные шкафы), рН-метр, аппарат для получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические, аналитические и торзионные весы; аппаратура для фильтрования (фильтры Зейтца и бактериальные свечи), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов – бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др., лабораторная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрасы, флаконы, ампулы, пастеровские пипетки, градуированные на 1, 2, 3, 4, 5 и 10 мл) и другое оборудование.

В лаборатории необходимо иметь место для окраски микроскопических препаратов, где находятся растворы красителей, спирт для обесцвечивания, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место должно быть снабжено газовой горелкой (или спиртовкой) и банкой с дезинфицирующим раствором.

Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами. Химическими реактивами, диагностическими сыворотками и другими материалами.

1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории

1. Заходить и работать в лаборатории только в халате и белой шапочке (халат должен быть наглухо застегнут, волосы подобраны под шапочку).

2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, продукты питания.

3. За каждым студентом под определенным номером закрепляется рабочее место, микроскоп и другое оборудование.

4. На рабочем месте можно размещать только необходимое оборудование для выполнения работы. Обычно это набор красок, промывалка с водой, сливная чашка, чашка с чистыми предметными стеклами, бактериологическая петля, банка с дезинфицирующим раствором.

5. Без ведома преподавателя или обслуживающего персонала нельзя включать электроприборы и аппаратуру.

6. Каждый студент должен строго соблюдать аккуратность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование.

7. При распаковке материала, присланного для исследования, необходимо соблюдать осторожность – банки с материалом снаружи обтирать дезинфицирующим раствором и ставить только на подносы.

8. Если в процессе работы инфицированный материал случайно попал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. При попадании зараженного материала на кожу, конъюктиву, в рот – нужно немедленно обратиться к преподавателю.

9. По окончании работы патологический материал, использованные культуры микроорганизмов. Инструменты поместить в биксы для обеззараживания.

10. Перед уходом из лаборатории необходимо снять специальную одежду, тщательно обработать руки дезинфицирующим раствором и вымыть с мылом.

1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики

Бактериологическая диагностика начинается со взятия, консервирования и транспортировки патологического материала и включает три этапа исследования:

1. Микроскопические исследования исходного материала позволяют обнаружить наличие в нем возбудителя, изучить его морфологические особенности и тинкториальные свойства.

2. Бактериологические исследования проводятся с целью выделения чистой культуры возбудителя с установлением его морфологических, тинкториальных, культурально-биохимических свойств, а в ряде случаев – антигенной структуры.

3. Биологические исследования (постановка биопробы) проводятся путем заражения лабораторных животных, которые позволяют определить вирулентность возбудителя, а также выделить его в чистой культуре.

4. Проведенные исследования позволяют определить видовую принадлежность возбудителя и поставить бактериологический диагноз.